Посев гонококка на сывороточный агар
Добавил пользователь Алексей Ф. Обновлено: 18.09.2024
Развитие управляющих функций мозга ребёнка: полезные советы и упражнения для педагогов
Сертификат и скидка на обучение каждому участнику
Севастопольское государственное бюджетное образовательное учреждение
протокол методической цикловой комиссии
от ______________20__г №___
Зам. директора по учебной работе
________________Полстянко Н.Н.
МЕТОДИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА
ПРАКТИЧЕСКОГО ЗАНЯТИЯ
Специальность: 31.02.01 Лечебное дело
Составила Олейник Наталья Васильевна
Пояснительная записка
Методической целью практического занятия является формирование профессиональных компетенций, соответствующих основным видам профессиональной деятельности в рамках темы данного практического занятия.
I . Методический блок
ТЕХНОЛОГИЧЕСКАЯ КАРТА ПРАКТИЧЕСКОГО ЗАНЯТИЯ
Количество учебных часов : 2
Актуальность темы:
Патогенные кокки (в основном стафилококки и стрептококки) вызывают различные по своим проявлениям гнойно-воспалительные процессы, обладая способностью поражать любой орган и любую ткань. Стафилококковые инфекции занимают одно из первых мест среди бактериальных инфекций, что связано с развитием у возбудителей устойчивости к антибиотикам. Значительную роль стафилококки играют в развитии внутри больничных инфекций. Зачастую постановку диагноза заболевания значительно облегчают лабораторные методы исследования. В связи с этим, каждая медсестра должна в совершенстве овладеть методикой забора материала для лабораторного исследования от больных и контактных.
III . Цель: Определить основные характеристики патогенных кокков. Ознакомиться со схемой лабораторного исследования при кокковых инфекциях. Изучить основные методики исследования при данных инфекциях и методы профилактики.
Учебные цели занятия:
Студент должен знать:
роль микроорганизмов в жизни человека и общества;
морфологию, физиологию и экологию микроорганизмов, методы их изучения;
основные методы асептики и антисептики;
основы эпидемиологии инфекционных болезней, пути заражения, локализацию микроорганизмов в организме человека,
основы химиотерапии и химиопрофилактики инфекционных заболеваний;
факторы иммунитета, его значение для человека и общества, принципы иммунопрофилактики и иммунотерапии болезней человека, применение иммунологических реакций в медицинской практике.
Студент должен уметь:
проводить забор, транспортировку и хранение материала для микробиологических исследований;
проводить простейшие микробиологические исследования;
дифференцировать разные группы микроорганизмов по их основным свойствам;
осуществлять профилактику распространения инфекции.
2.Воспитательные цели:
Воспитать у студентов аккуратность и прилежание в процессе выполнения самостоятельной работы,
Привить чувство ответственности при выполнении самостоятельной работы.
Развивающие цели:
Повышение мотивации к учебе.
Развитие устойчивого интереса к дисциплине, активация познавательной деятельности по овладению программным учебным материалом.
Развитие творческих подходов в выполнении поставленных задач.
Тип занятия : практическое занятие
Время проведения : 90 мин
ІV. Формирование общих компетенций:
Формирование профессиональных компетенций:
ПК 1.2. Проводить диагностические исследования.
ПК 1.3. Проводить диагностику острых и хронических заболеваний.
ПК 2.1. Определять программу лечения пациентов различных возрастных групп.
ПК 2.2. Определять тактику ведения пациента.
ПК 3.6. Определять показания к госпитализации и проводить транспортировку пациента в стационар.
ПК 4.2. Проводить санитарно-противоэпидемические мероприятия на закрепленном участке.
ПК 4.3. Проводить санитарно-гигиеническое просвещение населения.
ПК 4.5. Проводить иммунопрофилактику.
ПК 4.7. Организовывать здоровье сберегающую среду.
ПК 4.8. Организовывать и проводить работу Школ здоровья для пациентов и их окружения.
ПК 6.4. Организовывать и контролировать выполнение требований противопожарной безопасности, техники безопасности и охраны труда на ФАПе, в здравпункте промышленных предприятий, детских дошкольных учреждениях, центрах, офисе общей врачебной (семейной) практики.
V. Схема интеграционных связей:
1. Междисциплинарные связи:
Внутри дисциплинарные связи:
Знать виды микроорганизмов
Уметь различать микроорганизмы по их свойствам
Знать специфическую профилактику и специфическое лечение инфекционных заболеваний.
Уметь применять иммунологические препараты для профилактики, лечения и диагностики инфекционных заболеваний
VI. Оснащение занятия:
Методическое: методическая разработка практического занятия, мультимедийная презентация, материалы контроля исходного, промежуточного и конечного уровня знаний, инструкция к практическому занятию, методические рекомендации к выполнению внеаудиторной самостоятельной работы студентов
Техническое: мультимедийный проектор.
Материальное: иммунологические препараты, видеоролик .
VII. Методы и приемы обучения:
Основное назначение
Уровень усвоения
Формирование умений и навыков использования и применения полученных знаний.
выполнение практических заданий, работа по алгоритму.
Обогащают знания, формируют умения и навыки, трудолюбие, наблюдательность, систематичность и аккуратность в работе.
2. Проблемное изложение
Раскрытие в изучаемом учебном материале различных проблем и показ способов их разрешения.
Постановка проблемы, анализ, установление причинно-следственных связей.
Развивает самостоятельность мышления, быстроту реакции, способствует развитию творческих решений.
VIII. Перечень обязательной, нормативной и дополнительной литературы:
Наименование учебно-методической литературы (автор(ы), место издания, издательство, год издания, кол-во страниц)
Наличие электронной версии
Основы микробиологии и иммунологии/К.С. Камышева.- Ростовн/Д: Феникс, 2015.-381с.
IХ . Организационно-деятельностная структура занятия
Основные этапы занятия, их функции и содержание
Материалы метод. обеспечения: контроля, наглядности, ТСО, инструкции
Подготовитель-ный этап.
- проверка внешнего вида, заполнение журнала
- мотивация учебной деятельности
контроль исходного уровня знаний:
Отмечает отсутствующих, выясняет причины, обращает внимание на внешний вид студентов.
Сообщает тему занятия, обращает внимание студентов на актуальность изучаемой темы,
цели и задачи, стоящие перед студентами, важность знания предмета для успешного овладения профессией в целом
Проводит тестирование студентов согласно учебным целям.
Анализирует ответы, корректирует ошибки.
Студенты готовят тетради для записей, ручки, карандаши
Записывают тему и план занятия в тетради.
Отвечают на вопросы тестов
Техническое обеспечение: компьютер, презентация по теме.
Активизация мыслительной деятельности студентов на тему занятия, привлечение внимания и осознание её значимости для будущей работы.
Основной этап
Формирование профессиональ-ных умений и навыков:
1. Изучить методику и призвести забор слизи из з е ва и носа.
2. Изучить методику посева крови на сахарный бульон.
3. Заполнить сопроводительную документацию4. Изучить методику и провести определение чувствительности кокков к антибиотикам.
Оценивает работу студента
Студенты бригады демонстри-руют результаты аудиторной самостоя-тельной работы. Представляют результаты внеаудиторной самостоя-тельной работы
Инструкция к практическому занятию (приложение 2).
Презентация темы занятия.
Техническое обеспечение: компьютер, доска маркерная.
Заключитель-ный этап
1. Обобщение и систематизация усвоенных знаний .
2.Контроль и коррекция уровня умений и навыков.
- Контроль конечного уровня знаний.
2. Подведение итогов занятия.
Проверяет выполненные работы
Проводит итоговый контроль знаний
Оценивает бригаду в целом и каждого студента индивидуально, обращает внимание на сложные моменты темы, выставляет оценку каждому студенту с комментариями.
Систематизируют полученную информа-цию
Отвечают на вопросы ситуацион-ных задач и вопросы индиви-дуального опроса
Соотнесе-ние результатов деятельнос-ти с поставлен-ной целью и задачами, осуществление самооценки
Мотивация следующего занятия, активация самоподготовки.
Даёт указания по уборке рабочего места
Слушают, записывают задание, задают вопросы.
Приводят в порядок рабочее место
Рабочая тетрадь Часть 2, СРС №2.
II. Информационный блок
Изучаемые вопросы Уровень усвоения
Изучить методику посева крови на сахарный бульон.
Изучить правила заполнения сопроводительной документации.
Изучить методику и провести определение чувствительности кокков к антибиотикам.
Структурно-логическая схема:
Патогенные для человека кокки относятся к трем семействам:
Micrococcaceae , Streptococcaceae , Neisseriaceae .
Стафилококки (от греч. stafilos – виноградная гроздь) широко распространены во внешней среде – воздухе, воде, почве. В организме человека стафилококки обитают на кожных покровах, а также на слизистых оболочках верхних дыхательных путей и пищеварительного тракта.
Внедряясь, стафилококки вызывают гнойные поражения, в том числе сепсис. Практически все органы и ткани организма человека могут быть поражены воспалительными процессами, вызванными стафилококками. В зависимости от локализации развиваются: фурункулез, пиодермия, экземы, абсцессы, пневмонии, аппендициты, холециститы, энтероколиты, сепсис и т.д. Стафилококки часто выступают как возбудители внутри больничных инфекций.
Исследуемый материал – гной, моча, кровь, мокроту, отделяемое слизистых оболочек; при токсикоинфекциях – рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения.
Используют бактериоскопический и бактериологический методы исследования.
При бактериоскопическом методе исследования используют окраску по Граму, определяя в мазке типичные морфологические признаки.
Бактериологический метод: для выделения чистой культуры производят посев на молочно-солевой, желточно-солевой и кровяной агары, кровь при подозрении на сепсис сеют на сахарный бульон.
Идентификацию проводят по гемолитическим свойствам, лецитовителлазной активности, плазмокоагулирующей и гиалуронидазной активности и характеру пигмента. Обязательным тестом на болезнетворность является подтверждение способности расщеплять маннит в анаэробных условиях. Затем проводят фаготипирование, для выявления источника инфекции, определяют чувствительность к антибиотикам.
Стрептококки имеют шаровидную и овальную форму, размер около 2 мкм, в мазках располагаются попарно или образуют цепочки. Спор не образуют, неподвижны, способность к образованию капсул имеет Str . Pneumoniae , который представляет собой диплококк, состоящий из двух ланцетовидных клеток, окруженных капсулой, Г + .
По признаку выраженности гемолитической активности они подразделяются на три группы: β-гемолитические, ά-зеленящие, γ-негемолитические.
Материал для исследования – мокрота, гнойное отделяемое, кровь, моча, испражнения.
Используют бактериоскопический, бактериологический и серологический методы исследования.
Схема микробиологического исследования при стафилококковых инфекциях.
2. Распечатка иллюстративного материала для мультимедийного сопровождения
Внешний вид упаковки и препарата может отличаться от изображённого на фотографии
Инструкция по применению
Описание
Форма выпуска
Выпускается в виде комплекта из двух лиофилизированных компонентов: основы питательной среды - лиофилизат из объема 100 мл в бутылке - 1 шт; добавка к основе питательной среды - лиофилизат из объема 24 мл в бутылке - 1 шт.
Состав
Состав набора: 2.2.1. Основа питательной среды Экстракт кроличьего мяса 1000 мл, Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей 10 г, Натрий хлористый 5 г, Аутолизат хлебопекарных дрожжей 50 мл, Кислота оротовая 0,00124 г, Агар микробиологический (20±5) г. 2.2.2. Добавка к основе питательной среды. Сыворотка лошадиная нормальная для бактериологических питательных сред жидкая 200 мл, Аутолизат хлебопекарных дрожжей 20 мл, Аминопептид для микробиологических питательных сред 20 мл.
Показания для применения
Предназначен для микробиологических целей. Применяется для выделения гонококка при исследовании инфицированного материала, а также в качестве среды для культивирования и хранения гонококка в научно- исследовательской работе.
Режим дозирования и способ применения
Приготовление реагентов следует проводить в асептических условиях.
В бутылку с основой питательной среды добавляют 100 мл стерильной очищенной воды и выдерживают (30±5) мин, затем помещают на кипящую водяную баню до полного расплавления агара, после расплавления агара выдерживают на водяной бане не более 5 мин.
В бутылку с добавкой питательной среды добавляют 24 мл стерильной очищенной воды и выдержать (20±2) мин до полного растворения при температуре 20-25°С. Растворенную добавку переносят в растворенную и охлажденную до температуры (50±2)°С основу. Среду размешивают, разливают по 3 мл в стерильные пробирки и скашивают. В каждую пробирку добавляют по 0,5 мл стерильного раствора натрия хлорида 0,9% для увлажнения среды.
Среду можно также разливать по 10-15 мл в стерильные чашки Петри. Пробирки или чашки с питательной средой помещают на (24±1) ч в термостате при температуре (37±1)°С для контроля на стерильность.
Готовую питательную среду хранят при температуре (6±2)°С до 7 сут.
Меры предосторожности при применении
Соблюдение «Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения (Москва. 1981 г.)
Латинское название этого микроорганизма — Neisseria gonorrhoeae, по имени немецкого дерматовенеролога Альберта Нейссера (Albert Neisser), который впервые описал гонококки в 1879 году.
Гонококки относятся к диплококкам - то есть имеют округлую форму (кокки) и обычно встречаются парами.
Под микроскопом гонококки представляют собой неподвижные бактерии бобовидной или кофейной формы, обращенные друг к другу вогнутой поверхностью. В сканирующем электронном микроскопе гонококки имеют вид шаровидных или диплококковых образованией со слегка бугристой поверхностью. Их длина составляет от 1.25 — 1.6 мкм, поперечные размеры — 0.7- 0.8 мкм. Гонококки хорошо окрашиваются всеми анилиновыми красителями.
В процессе изучения тончайших срезов данных бактерий, у них выявлена клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана, цитоплазма с рибосомами, мезосомы и нуклеотид с нитями ДНК. На поверхности гонококков выявлены тонкие трубчатые нити (пили), которые помогают возбудителю проникать в организм и обеспечивают ряд других биологических свойств. В частности, пили играют заметную роль роль в передаче генетической информации, например об устойчивости к антибиотикам.
Гонококки растут на искусственных питательных средах в присутствии человеческого белка (асцитический агар) при температуре 37 °С.
Колония гонококков на агаре
Гонококки выявленные в отделяемом уретры отличаются по строению от полученных путем выращивания на агаре. Например, при пересевах гонококков на искусственные питательные среды, бактерии довольно быстро утрачивают пили.
У ряда штаммов гонококков, эти микроорганизмы снаружи окружены капсулой из полисахаридов, что позволяет им избежать поглощения и разрушения лейкоцитами.
Важнейшим свойством гонококка является антигенная изменчивость. Это означает, что у этих бактерий постоянно меняются антигенные детерминанты. Т.е. с каждой сменой популяции и даже на протяжении периода жизни одной популяции гонококков, происходит и смена их антегенной структуры. Частично это связано с тем, что основную антигенную нагрузку несут пили и поверхностные белки клеточной стенки, а также со способностью гонококков к взаимной передаче генетической информации.при непосредственном контакте двух клеток.
Под влиянием ряда факторов, в первую очередь антибиотиков, гонококки могут менять форму, способность воспринимать окраску и биологические свойства.
Вне человеческого организма гонококки быстро погибают. На них губительно действуют антисептические препараты, мыльные растворы, высушивание или прямые солнечные лучи.
Гонококки не переносят нагревание до температур свыше 56°С; при 42°С гонококки погибают за 5-15 часов. Быстрее всего гонококк гибнет при воздействии ультрафиолетового облучения и инсоляции (за 30-60 минут). Температуру ниже оптимальной гонококки также переносят плохо и быстро погибают при 18 °С.
Гонококк может длительно сохранять жизнеспособность после высушивания из замороженного состояния; длительно переносит замораживание (-20-70°С), но гибнет при повторном замораживании и оттаивании.
Рис. 2. Заражение куриного эмбриона на ХАО через естественную воздушную камеру
(по Николау)
Рис. 3. Заражение куриного эмбриона в аллантоисную полость (по Николау)
Заражение через искусственную воздушную камеру применяют чаще первого, так как оно обеспечивает контакт вируссодержащего материала с большей поверхностью ХАО и, следовательно, ведет к образованию большего количества вируса. Для заражения эмбриона этим методом его помещают в штатив горизонтально зародышем вверх. В скорлупе делают два отверстия: одно небольшое над центром воздушной камеры (предназначено для отсасывания из нее воздуха), а другое диаметром 0,2-0,5 см сбоку, со стороны зародыша. Сложность метода в том, что, делая второе отверстие, необходимо осторожно снять вначале кусочек скорлупы, затем скользящим движением, не повреждая ХАО, сдвинуть подскорлупную оболочку в сторону так, чтобы через образовавшийся дефект мог пройти воздух. После этого резиновой грушей через первое отверстие отсасывают воздух из естественной воздушной камеры (рис. 4, а). В результате через боковое отверстие наружный воздух устремляется внутрь, образуя искусственную воздушную камеру, дном которой является ХАО (рис. 4, б).
,
Рис. 4. Заражение куриного эмбриона на ХАО через искусственную воздушную камеру (по Николау и др.)
Через боковое отверстие на поверхность ХАО наносят инфекционную жидкость и отверстие закрывают кусочком лейкопластыря. Закрывать первое отверстие нет необходимости, так как внутренний листок подскорлупной оболочки при этом методе заражения не нарушается и продолжает выполнять роль барьера для микрофлоры окружающей среды.
Дальнейшую инкубацию эмбрионов, зараженных этим методом, проводят в горизонтальном положении боковым отверстием вверх.
Заражение в желточный мешок. Большей частью им пользуются для размножения хламидий, а также вирусов болезни Марека, ринопневмонии лошадей, катаральной лихорадки овец и др. Заражают эмбрионы 5-7-дневного, а иногда и 2-3-дневного возраста (вирус лихорадки долины РИФ). Используют два варианта заражения (рис. 6).
Рис. 5. Заражение куриного эмбриона в амниотическую полость (по Николау и др.)
Рис. 6. Заражение куриного эмбриона в желточный мешок (по Николау и др.)
Первый вариант. Иногда путь заражения осуществляется на горизонтально укрепленном в штативе эмбрионе, при этом зародыш находится внизу, а желток - над ним. Отверстие в скорлупе закрывают каплей расплавленного парафина.
Второй вариант. Эмбрионы помещают в штатив в вертикальном положении. Делают отверстие в скорлупе над центром воздушной камеры и вводят иглу на глубину 3,5-4 см под углом 45° к вертикальной оси в направлении, противоположном месту нахождения зародыша.
Заражение в амниотическую полость. Для этой цели используют эмбрионы 6-10-дневного возраста. Метод используется при культивировании вирусов гриппа, ньюкаслской болезни, ринопневмонии лошадей и др. Есть два способа заражжения (рис. 5).
Закрытый способ. Заражение проводят в затемненном боксе. Яйцо помещают на овоскопе в горизонтальном положении зародышем вверх. Через отверстие в скорлупе над воздушной камерой вводят иглу с затупленным концом по направлению к зародышу. Доказательством того, что игла проникла в амнион, служит движение тела зародыша в направлении передвижения.
Открытый способ. Скорлупу над воздушной камерой срезают так, чтобы образовалось окно диаметром 1,5-2,5 см. Через него пинцетом под контролем глаза снимают подскорлупную оболочку. Затем анатомический (14 см) пинцет с сомкнутыми браншами ведут, продавливая хорионаллантоисную оболочку по направлению к зародышу. Когда пинцет достигнет его, бранши размыкают, захватывают амниотическую оболочку вместе с ХАО и подтягивают к окну. Удерживая левой рукой пинцет с фиксированной в нем оболочкой амниона, вводят вируссодержащий материал (рис. 7). Далее все оболочки опускают, окно закрывают лейкопластырем и эмбрион инкубируют в вертикальном положении.
Заражение в тело зародыша. Для заражения используют эмбрионы 7-12-дневного возраста. Известно два варианта метода.
Первый вариант. Заражают так же, как в амнион закрытым способом, с той лишь разницей, что берут острую иглу и на овоскопе показателем попадания иглы в тело считают подчинение зародыша движениям иглы.
Второй вариант. Заражают так же, как в амнион открытым способом: через окно в скорлупе подтягивают пинцетом тело зародыша. Материал вводят в головной мозг или определенные участки тела. При таких методах заражения бывает значительный процент неспецифической гибели эмбрионов.
Рис. 7. Заражение куриного эмбриона в амнион открытым способом (по Николау и др.)
Рис. 8. Отсасывание аллантоисной жидкости (по Николау)
Рис. 9. Отсасывание амниотической жидкости (по Николау и др.)
Для получения стенки желточного мешка как вируссодержащего материала желток извлекают на чашку Петри, стенку его разрезают ножницами и отполаскивают от содержимого в физиологическом растворе. Тело зародыша извлекают, удерживая его за шею (рис. 10).
При вскрытии куриных эмбрионов ставят бактериологический контроль вируссодержащего материала посевом на МПБ, МПА, МППБ и среду Сабуро. Вируссодержащий материал хранят при минус 25 °С и ниже.
Культивирование с производственными целями на куриных эмбрионах применяется для размножения ряда вирусов (осповакцины, клещевого энцефалита, гриппа, москитной лихорадки и др.). Так, для изготовления гриппозной и оспенной вакцин используют вирусы, размноженные на хорионаллантоисной оболочке, вакцины против москитной лихорадки - в аллантоисной полости, а вирус клещевого энцефалита культивируют в желточном мешке.
Метод размножения вирусов на культурах тканей
Для изготовления живых и инактированных вакцин вирусы размножаются на первичных культурах тканей, а диагностических препаратов также и на перевиваемых культурах.
Для размножения вирусов предложен ряд методов с использованием культур тканей. Такие методы, как Карреля-Берреуза (1910), культивирование кусочков ткани, фиксированных в сгустке плазмы, Меттлендов (1928) - культивирование в переживающих тканях - в настоящее время не используются не только в производстве, но и в исследовательской работе. Эти методы вытеснены культивированием в однослойной культуре клеток.
Работа по культивированию клеток производится в специальных лабораториях при соблюдении высоких требований к стерильности воздуха, посуды, растворов, питательных сред. Используемая посуда должна быть нейтральной, хорошо вымытой и обезжиренной, применяемые реактивы - химически чистыми.
Читайте также: