В первый день бактериологического метода посев производят для

Добавил пользователь Дмитрий К.
Обновлено: 18.09.2024

Материал для исследования берется до начала антибактериальной терапии или не ранее двух-трех недель после ее окончания. В течение суток перед исследованием рекомендовано не применять местные лекарственные препараты. Материал для исследования из зева берется утром до чистки зубов или не ранее чем через 2 часа после последнего приема пищи.

Исследование мокроты

Предпочтительным является исследование утренней порции мокроты. Перед сбором мокроты рекомендуется почистить зубы и прополоскать рот кипяченой водой. Недопустимо попадание в мокроту слюны и носовой слизи. Мокрота собирается в стерильный контейнер. Рекомендуется держать контейнер как можно ближе к губам и сразу же сплевывать в него мокроту по мере ее откашливания, кашель может быть индуцирован с помощью нескольких глубоких вдохов. При отсутствии мокроты, накануне вечером или рано утром в день сдачи анализа назначается отхаркивающее средство или раздражающие ингаляции.

Посев из урогенитального тракта (мужчины и женщины)

Материал для исследования берется до начала антибактериальной терапии или не ранее двух-трех недель после ее окончания.

За 24 часа до исследования рекомендуется исключить половой акт, местные лекарственные препараты (свечи), вагинальные дезинфицирующие средства, спринцевание, использование любрикантов, тампонов, спермицидов, раствора уксуса, Люголя, трансвагинальное УЗИ, кольпоскопию. Взятие биоматериала не производится во время менструации. Контроль лечения рекомендуется проводить не ранее 14-21 дня после окончания терапии.

При взятия мазка из уретры женщинам и мужчинам не мочиться в течение 2 часов.

Посев эякулята

Перед взятием материала необходимо провести тщательный туалет наружных половых органов без антисептиков. Материал для исследования берется не ранее, чем через 2 часа после мочеиспускания. Исследование проводится до начала антибактериальной терапии или не ранее двух-трех недель после ее окончания. Для сбора эякулята на посев необходимо в течение 3-5 дней (оптимально 3 дня) исключить половой акт, мастурбацию. Сбор эякулята осуществляется путем мастурбации, не касаясь головкой полового члена краев контейнера.

Эти и другие бактериологические исследования вы можете сделать в наших клиниках.

Микроорганизмы (бактерии, вирусы, простейшие и другие) сопровождают человека всю его жизнь. Вопрос наличия инфекции особенно важен касательно детей, женщин, пожилых, ослабленных людей. Каких микроорганизмов следует опасаться, как определять их наличие в организме, как делать бакпосев при беременности, что предпринимать при выявлении микроорганизмов – это малая часть вопросов, которые слышат от своих пациентов инфекционисты и врачи других специальностей.

Прежде чем лечить инфекцию, следует:

заподозрить ее наличие в организме;
выделить из тканей;
верифицировать (подтвердить) вид инфекционного агента, поразившего организм.

В медицине разработан ряд клинических исследований, благодаря которым проводят идентификацию микроорганизмов, спровоцировавших ту или иную инфекционную болезнь. Один из самых информативных методов исследования – бактериологический посев. Его суть заключается в том, что выделения человеческого организма помещают на питательные среды, на которых способны вырасти колонии (скопления) тех или иных микроорганизмов. Расшифровка результатов бакпосева не требует сверхсложной аппаратуры – колонии оценивают визуально. Их характеристики, позволяющие распознать тот или иной инфекционный агент, давно описаны.

Преимущества бакпосева, показания к проведению

Бактериологический посев является одним из самых популярных методов лабораторного исследования благодаря таким характеристикам:

необходимость относительно небольших материальных ресурсов, что немаловажно в современной медицине;
высокая информативность (нередко правильный диагноз болезни, затрудненный из-за нечетких или отсутствующих клинических симптомов, могут поставить только благодаря оценке результатов бакпосева);
высокий уровень специфичности (практически не наблюдается такого, чтобы колонии разных возбудителей выглядели одинаково, что вносило бы путаницу во время диагностики);
для понимания того, что показывает бактериологический посев, нужны только знания в клинической микробиологии и клинический анализ, в ряде случаев – лупа. Специальной сложной аппаратуры не требуется;
возможность изучить любую биологическую жидкость из любых органов и тканей человеческого организма.

В то же время следует учитывать и некоторые нюансы проведения исследования:

Показаниями для выполнения бактериологического посева являются:

признаки инфекционного процесса;
симптомы воспалительного процесса, даже если есть подозрение, что он асептический (без участия микрофлоры);
клинические ситуации, когда имел место контакт здорового человека с зараженным, но симптомы еще не проявились в силу специфики инфекционного заболевания.

Бактериологический посев в акушерстве и гинекологии

Инфекционное поражение женского организма – одна из главных проблем репродуктивной медицины. Заражение будущей матери инфекционным агентом влияет не только на ее персональное самочувствие, но и на:

способность забеременеть;
возможность выносить плод без угрозы прерывания беременности;
здоровье будущего ребенка.

Поэтому бактериологический посев так важен в диагностике гинекологических инфекций (в том числе скрытых или имеющих скудные клинические проявления). В частности, большое клиническое значение имеет бакпосев на микрофлору из влагалища, которая защищает репродуктивную систему женщины от патогенных микроорганизмов.

Для беременных бактериологический посев является обязательной процедурой.

Точность результатов исследования зависит не только от квалификации медицинских работников, но и от осведомленности самой женщины. Так, для бакпосева из цервикального канала или влагалища требуется, чтобы пациентка не подмывалась и не спринцевалась. Нельзя использовать не только гигиенические моющие средства, но даже обычную чистую воду.

Как правильно делать бакпосев

Несмотря на то, что бакпосев – технически одна из самых простых процедур в медицине, существуют определенные правила проведения. Ключевые из них:

Один из самых точных и информативных лабораторных исследований качества мочи (урины) — бактериологический анализ мочи (бакпосев, посев на микрофлору). Этот метод диагностики выявляет патогенные микроорганизмы и определяет их чувствительность к антибактикам. Это позволяет сэкономить время и сразу назначить эффективное лечение.

Прием уролога, гинеколога — 1000 руб. Комплексное УЗИ малого таза — 1000 руб. Прием по результатам УЗИ или анализов — 500 руб (по желанию)

Недостатком анализа можно назвать особые требования к сбору материала и длительность теста. Однако лишь при посеве мочи врач получает точную уникальную информацию, которую часто не способны показать другие лабораторные исследования.

Показания для назначения бакпосева мочи

Анализ мочи на посев может быть назначен терапевтом, гинекологом , урологом или педиатром в следующих случаях:

при инфекциях мочевыделительной системы (рецидивирующий цистит , пиелонефрит , урологические патологии, мочекаменная болезнь );
при болезнях органов ЖКТ (энтерококк и дизентерия);
при сахарном диабете , беременности и бесплодии , иммунодефиците, туберкулёзе, ВИЧ;
для контроля эффективности проведённого лечения инфекции ;
для уточнения диагноза при неоднозначной симптоматике;
для выявления устойчивости микроорганизмов к антибактериальной терапии.

Также бакпосев мочи может назначаться при наличии следующих симптомов:

нарушение частоты мочеиспусканий (может свидетельствовать о поражении почек, простатите );
тошнота, рвота, общая слабость, повышение температуры (симптомы заболевания почек);
боль в пояснице (сигнал возможного развития бактерий в почечных канальцах);
изменение цвета мочи.

Какие патологии выявляет бактериологический анализ мочи

Бакпосев на патогенную флору поможет диагностировать такие заболевания, как:

хронический уретрит ;
рецидивирующий цистит;
пиелонефрит;
паранефрит.

Бактериологический анализ мочи выявляет следующие инфекции в зависимости от возбудителя:

Стафилококки и стрептококки . Выявляет все виды патогенных микроорганизмов, опасных при беременности для ребёнка; . Патогенные микроорганизмы в урине подтверждают сомнительный диагноз; . Назначается пациенту, если его партнёр — носитель вируса;
Бациллу Коха . Степень бактериурии определяет наличие туберкулёза и насколько поражены почки и мочевыводящие пути при таком заболевании;
Протеи . Протейная инфекция вызывает воспаление почек и мочевыводящих путей, может привести к острому пиелонефриту;
Энтерококки . Эти кишечные бактерии могут быть губительными для мочевыводящей системы;
Синегнойную палочку. Эта бактерия является причиной циститов, уретритов и пиелонефритов;
Коклюш . Анализ выявит болезнь даже на ранней стадии и при начальных
симптомах;
Клебсиеллы . Опасная бактерия, устойчивая к большинству антибиотиков. Вызывает воспалительные заболевания мочевыводящих путей и может привести к различным тяжёлым последствиям;
Дизентерийные соединения . Способен выявить сальмонеллез и дизентерию у пациентов любого возраста.

Методика исследования мочи на инфекции

Для идентификации инфекционного возбудителя анализ урины на посев проводится по следующему алгоритму:

Первичное исследование осадка мочевой жидкости под микроскопом (проводится не всегда).
Первичный посев мочи на стерильность для выявления типа возбудителя.
Накопление собранной в посеве культуры.
Изучение особенностей выявленных бактерий.
Окончательная идентификация возбудителя.

Для теста — посев мочи — необходим подбор определённой среды: для стафилококков – кровяной агар, стрептококков – сахарный раствор и т.д. Однако могут проводить посев и в нескольких средах (максимум 3-4).

Бактериологический анализ мочи в целом занимает 7-10 дней. Полученный результат будет содержать описание величины, формы, прозрачности, оттенка, структуры поверхности, роста колонии в высоту.

Методика определения чувствительности возбудителей к антибиотикам

Для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам (антибиотикограмма) анализ урины на посев проводится по следующему алгоритму:

Деление чаши Петри на несколько секторов и помещение в каждый из них полоски с антибиотиком.
Маркировка цветом каждого участка и засев выделенной культурой.
Помещение чаши в термостат с температурой 36,6.
Ведение ежедневного контроля. Отсутствие роста и размножения бактерий означает, что антибиотик их подавляет, а значит подобран верно.

В противном случае возбудитель устойчив к действию данного антибиотика, и его нужно заменить.

Антибиотикограмма проводится только при обнаружении бактерий более, чем 104 КОЕ/мл. Длительность такого анализа составляет 4-5 дней. Современные экспресс-методики позволяют получить результат уже через 2 дня. В экстренных случаях, когда результат необходим для лечения тяжелобольного пациента, предварительные данные могут быть предоставлены уже спустя 4 часа.

Подготовка к процедуре и сбор мочи на посев

Для получения реальной картины состояния внутренней микрофлоры крайне важно соблюсти все требования относительно подготовки и сбора мочи:

Анализ посев мочи при беременности

В период беременности женщина ещё больше, чем обычно, уязвима для различных болезней. К ним относятся и инфекции различного генеза, включая передающиеся половым путём. К тому же, исследованиями доказано, что 45% всех смертей плода ( замирание беременности , выкидыш ) случилось из-за внутриутробного инфицирования.

Бактериологический анализ мочи во время беременности обязателен, даже при отсутствии признаков инфекции. Инфекция длительно и бессимптомно могла протекать в организме женщины и активизироваться при наступлении беременности (до 6% беременных имеют скрытую бактериурию).

Важность проведения анализа мочи на посев во время беременности подтверждается следующим:

выявление и идентификация возбудителей инфекции;
проведение возможного лечения с учётом срока беременности;
предупреждение заражения плода и нанесения ему непоправимых органных изменений, несовместимых с жизнью.

Проводить бакпосев мочи нужно дважды за беременность – в 1 триместре и практически перед самыми родами (на 36 неделе). При наличии соответствующих показаний это значение может увеличиться. Врач может назначить беременной дополнительные бакпосевы мочи, если она страдает заболеваниями мочевого пузыря и почек, или при общем анализе мочи были обнаружены лейкоциты и белок.

Правила подготовки и сбора материала для беременной общие. На поздних сроках беременности плод давит на мочевой пузырь, поэтому женщине порой трудно дотерпеть до утра. Рекомендуется сходить в туалет по будильнику в 1-2 часа ночи, а затем уже утром собрать мочу для анализа.

Расшифровка результатов бакпосева мочи: норма и патология

Результат анализов выводится в КОЕ на 1 мл мочи. КОЕ (колониеобразующие единицы) – это абсолютное значение, показывающее количество клеток бактерий в 1 мл урины.

Лаборатория выдаст распечатку результатов, в которой будут указаны все виды микроорганизмов, их количество, измеренное в КОЕ/мл, и антибиотикограмма – группы препаратов, к которым чувствителен каждый вид бактерий.

Результат бакпосева не всегда однозначно положительный или отрицательный. Он имеет референсные значения, которые указывают на степень воспаления.

Менее 1000 КОЕ/мл	Норма, лечение не требуется.
1000-100000 КОЕ/мл	Требуется повторное исследование. Возможно, результат искажён из-за нарушения правил подготовки или сбора мочи.
Более 100000 КОЕ/мл	Наличие инфекции, необходимо срочно начинать лечение.

На бланке антибиотикограммы проставляются значки:

Обозначение	Уровень чувствительности к антибиотикотерапии
S	высокий
I	умеренный
R	полная резистентность (устойчивость) к антибиотикам

Где сдать анализ мочи на инфекции и сделать расшифровку бакпосева в СПБ?

Такое обследование в Санкт-Петербурге проводится в специализированной уролого — гинекологической клинике Диана. Здесь же можно пройти все виды экспертного УЗИ (стоимость 1000 руб), сдать все анализы и получить консультацию гинеколога, уролога, эндокринолога , онколога и дерматолога . Стоимость консультации любого специалиста — 1000 руб.

8.1. Техника посева и выделения чистых культур микроорганизмов

Доставляемый в лабораторию материал подвергают бактериологическому исследованию в тот же день. Техника посева зависит от характера засеваемого материала, консистенции питательной среды и цели исследования.

Для проведения посевов необходимы: подлежащий исследованию материал, питательные среды, бактериологическая петля, шпатели (стеклянные, металлические), пастеровские и градуированные пипетки, металлические кюветы или поднос для переноса засеянных чашек и металлические коробки для переноса пробирок, ведро или бачок с крышками для сброса отработанного инфицированного материала, спиртовая или газовая горелка.

Жидкий материал для посева берут петлей или пипеткой. При взятии петлей жидкость должна образовать в кольце петли тонкую прозрачную пленку – "зеркало". Пипетками пользуются в том случае, когда материал засевают в большом или точно отмеряемом объеме.

Способ взятия плотного материала определяется его консистенцией. При посевах чаще всего пользуются бактериологической петлей.

Все манипуляции, связанные с посевом и выделением микробных культур, производят над пламенем горелки. Бактериальную петлю перед взятием материала прокаливают в пламени горелки, затем ее остужают так, чтобы при соприкосновении с жидкой средой она не вызывала кипения жидкости, а прикосновение к агару не сопровождалось его плавлением. Для остуживания петли лучше всего погружать ее в конденсационную жидкость пробирки со стерильной питательной средой или прикасаться к крышке чашки Петри со стерильной средой. Нельзя остужать петлю прикосновением к поверхности питательной среды, даже свободной от микробного роста, так как на ней могут находиться колонии, не видимые простым глазом.

После окончания посева петлю прожигают повторно для уничтожения находящейся в ней микробной культуры или инфицированного микроорганизмами материала.

Пипетки и шпатели, использованные для посевов, опускают в дезинфицирующий раствор.

После посева на чашках Петри со стороны дна, на пробирках – в верхней трети надписывают название засеянного материала или ставят номер анализа и дату посевов.

8.1.1. Техника посевов на плотные и жидкие питательные среды

При посеве в жидкую питательную среду петлю с находящимся на ней материалом погружают в среду. Если материал вязкий и с петли не снимается, его растирают на стенке сосуда, а затем смывают жидкой средой. Жидкий материал, набираемый в пастеровскую или градуированную пипетку, вливают в питательную среду.
При посеве на скошенный мясопептонный агар пробирку берут в левую руку между I и II пальцами, чтобы основание пробирки находилось на поверхности кисти руки и посев осуществлялся под контролем глаза. Пробку из пробирки вынимают правой рукой IV и V пальцами, не прикасаясь к той ее части, которая входит внутрь пробирки. Остальные три пальца правой руки остаются свободными для взятия бактериологической петли, посредством которой производится посев. Петлю держат, как писчее перо. После вынимания пробки пробирку с питательной средой держат в наклонном положении во избежание попадания в нее посторонних микроорганизмов из воздуха.

При посеве на скошенный агар петлю с находящимся на ней пересеваемым материалом вводят в пробирку до дна, опускают плашмя на поверхность питательной среды и скользящими движениями наносят штрихи снизу вверх от одной стенки пробирки к другой (рис. 8.1).

• При посеве на поверхность плотной питательной среды из пробирки в чашки Петри пробирку фиксируют II, III и V пальцами левой руки, а крышку чашки Петри приоткрывают I и IV пальцами левой руки настолько, чтобы в образовавшуюся щель свободно проходили петля или шпатель (рис. 8.2). Небольшое количество исследуемого материала, взятого из пробирки бактериологической петлей, втирают в поверхность питательной среды у края чашки. Затем петлю прожигают, чтобы уничтожить избыток находящегося на ней материала. Линию посева начинают с того места, в котором находится материал. Бактериологическую петлю кладут плашмя на питательную среду, чтобы не поцарапать ее поверхность, и проводят штрихи по всей среде или по секторам, разграфив предварительно дно чашки (при условии, что среда прозрачна) на 4, 8 или 16 равных частей. Нужно стараться, чтобы штрихи, наносимые петлей, располагались как можно ближе друг к другу, так как это удлиняет общую линию посева и дает возможность получить изолированные колонии микробов в концевой ее части.
• Для равномерного распределения засеваемого материала по поверхности плотной питательной среды можно пользоваться вместо петли тампоном или шпателем.

При обилии в засеваемом материале микробов они растут в виде пленки, покрывающей всю поверхность питательной среды. Такой характер микробного роста получил название сплошного или газонного. Посев газоном производят, когда нужно получить большие количества микробной культуры одного вида.

Для посева материала в толщу плотной питательной среды готовят взвесь в стерильной водопроводной воде или в изотоническом растворе. Набирают 0,1–1 мл взвеси в пипетку (в зависимости от степени предполагаемого микробного загрязнения) и выливают в пустую стерильную чашку Петри. Вслед за этим чашку заливают 15–20 мл мясопептонного агара, расплавленного и остуженного до температуры 40– 45 "С (при такой температуре пробирка со средой, приложенная к щеке, не должна вызывать ощущения ожога). Для равномерного распределения исследуемого материала в питательной среде закрытую чашку с содержимым слегка вращают по поверхности стола.
Посев уколом в столбик питательной среды производят в пробирку со средой, застывшей в виде столбика. Пробирку берут в левую руку как обычно, и в центре столбика до дна пробирки вкалывают петлю с находящимся на ней материалом.
Калиброванной бактериологической петлей (диаметр 2 мм, емкость 0,005 мл) производят посев мочи на сектор А чашки Петри с простым агаром, сделав около 40 штрихов. Затем петлю прожигают и производят 4 штриховых посева из сектора А в сектор I, из сектора I в сектор II и из сектора II в сектор III, каждый раз после прожигания петли (рис. 8.3).

Чашки инкубируют при температуре 37 °С в течение 18– 24 ч, после чего подсчитывают количество колоний, выросших в разных секторах, и определяют количество бактерий в 1,0 мл по приведенной табл. 8.1 (этот метод принят для определения степени бактериурии).

Таблица 8.1. Определение количества бактерий в 1 мл методом секторных посевов*

Количество колоний в секторах

Количество бактерий в 1 мл

*Приказ № 535 от 22 апреля 1985 г. "Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений" (Москва, 1985).

8.1.2. Методы выделения чистых культур

Чистой культурой принято называть совокупность однородных микроорганизмов, относящихся к одному виду, полученных из массы одной колонии, клетки которой идентичны по морфологическим, тинкториальным, культуральным, метаболическим и генетическим признакам, так как по существующим представлениям микробная колония является популяцией бактериальных клеток, возникшей в результате размножения единственной материнской клетки. Микробная колония являются аналогом клона.

Чистые культуры микроорганизмов одного вида, выделенные из различных источников, могут отличаться друг от друга незначительным отклонением морфологических, культуральных или биохимических признаков, не выходя за пределы своего вида или подвида. Такие культуры называют штаммами. Вместо ранее именованных типов в зависимости от характера изменившегося признака их обозначают морфоварами (отличные по морфологическим признакам), сероварами (имеющие антигенные отличия), биоварами (отличающиеся биологическими свойствами).

Чистая культура необходима для изучения морфологических, культуральных, биохимических и антигенных свойств, по совокупности которых определяется видовая принадлежность исследуемого микроорганизма.

Для выделения чистых культур микробов из материалов, содержащих обильную смешанную микрофлору, предложено много различных методов. Наибольшее распространение получил метод механического разъединения микроорганизмов, находящихся в исследуемом материале, с целью получения изолированных колоний на поверхности или в глубине питательной среды. Очень широко применяются селективные питательные среды, стимулирующие развитие тех микроорганизмов, чистую культуру которых предполагается выделить. Некоторые виды микробов обладают высокой чувствительностью к воздействию определенных факторов внешней среды. Индивидуальная устойчивость микробов к тому или иному фактору была использована для разработки методов выделения чистых культур путем умерщвления сопутствующей микрофлоры. Этим способом производится выделение споровых форм микробов, устойчивых к действию высокой температуры, микобактерий туберкулеза, безразличных к действию концентрированных растворов минеральных кислот, в отличие от остальных микробов, содержащихся в мокроте.

При выделении чистой культуры патогенных микробов из патологического материала, загрязненного посторонней микрофлорой, прибегают иногда к заражению лабораторных животных, восприимчивых к тому виду микроба, который предполагается выделить из исследуемого материала. Биологический метод выделения чистой культуры применяется при исследовании мокроты на содержание в ней пневмококков, микобактерий туберкулеза.

Получение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху). Три пробирки, содержащие по 15 мл мясопептонного агара, ставят в водяную баню для расплавления агара. Расплавленную среду остужают до температуры 43–45 °С. В пробирку вносят одну бактериологическую петлю исследуемого материала. Для лучшего перемешивания материала со средой засеянную пробирку вращают несколько раз, зажав между ладонями. После этого одну петлю (прокаленную и остуженную) содержимого 1-й пробирки переносят во 2-ю и таким же образом из 2-й в 3-ю. Приготовленные разведения микробов выливают из пробирок в стерильные чашки Петри, обозначенные номерами, соответствующими номерам пробирок.

После застудневания среды с исследуемым материалом чашки помещают в термостат. Количество колоний в чашках с питательной средой уменьшается по мере разведения материала.

Выделение чистой культуры по способу Дригальского. Расплавленную питательную среду разливают в три чашки Петри. Застывшую среду обязательно подсушивают, так как влажная поверхность ее способствует образованию сливного роста. В первую чашку вносят одну каплю исследуемого материала и стерильным шпателем втирают его в поверхность питательной среды. Далее, не прожигая шпателя и не набирая нового материала, шпатель переносят во 2-ю, а затем и 3-ю чашки, втирая в поверхность питательных сред оставшийся на нем материал.

Метод рассева по поверхности, предложенный Дригальским, является наиболее употребительным для получения чистой культуры микробов. Вместо шпателя можно пользоваться петлей. Материал на питательной среде распределяют параллельными штрихами по всей чашке в одном направлении. Затем, повернув чашку на 90°, проводят штрихи в направлении, перпендикулярном первым штрихам. При таком способе посева материал, находящийся в петле, расходуется постепенно, и по линиям штрихов, нанесенных в конце посева, вырастают изолированные колонии микробов.

Выращивание и выделение чистых культур анаэробов. Для выращивания анаэробов необходимо создать определенные условия, сущность которых заключается в удалении молекулярного кислорода из питательной среды и пространства, окружающего эти культуры. Другим обязательным условием, обеспечивающим выделение анаэробов из исследуемого материала, является внесение большого количества посевного материала в питательную среду.

Единственным отличием питательных сред, применяемых для выращивания анаэробов, служит пониженное содержание в них свободного кислорода. Самым простым способом удаления растворенного кислорода является кипячение. Непосредственно перед посевом материала пробирки с питательными Средами кипятят на водяной бане в течение 10–20 мин. При кипячении из среды вытесняется воздух и, следовательно, удаляется кислород. Свежепрокипяченную питательную среду быстро охлаждают, погружая в лед или подставляя под струю холодной воды, чтобы не дать ей насытиться кислородом воздуха, и используют для посева. Для уменьшения диффузии кислорода из воздуха питательные среды заливают сверху стерильным вазелиновым или парафиновым маслом (толщина слоя 1–1,5 см). Засев среды производят пипеткой сквозь масло в наклонном положении пробирки.

В качестве редуцирующих веществ используют глюкозу, аскорбиновую кислоту, цистеин, гликокол, глутатион. Активно связываются с кислородом животные ткани паренхиматозных органов. На этом свойстве животных клеток основано приготовление питательной среды Китта – Тароцци (рецепт 161), широко применяемой для выращивания анаэробов. В жидкие питательные среды помещают иногда пористые вещества: вату, пемзу, которые адсорбируют на своей поверхности пузырьки воздуха.

Для создания бескислородных условий используют физические, химические и биологические факторы.

Физические способы культивирования анаэробов:

• способ Виньяля – Вейона. Берут 4–5 пробирок с 0,5 % расплавленным и охлажденным до температуры 40–45 °С сахарным агаром. В содержимое одной из них вносят пипеткой небольшое количество исследуемого материала и тщательно размешивают. Для уменьшения концентрации материала с целью получения изолированных колоний засеянную среду в количестве, соответствующем объему внесенного материала, переносят из 1-й пробирки во 2-ю, из 2-й в 3-ю. Затем содержимым каждой пробирки заполняют капилляры трех пастеровских пипеток.

Чтобы предупредить застывание питательной среды в момент насасывания ее в пипетки, пока их кончик не обломлен, пипетки погружают на 3–5 мин в стерильную воду с температурой 45–50 °С. После заполнения вытянутый конец трубки запаивают и помещают в стеклянный цилиндр с ватой на дне. Через 2–3 сут в столбике агара вырастают ясно видимые колонии микробов-анаэробов. Выросшие колонии легко изолировать. Для этого капилляр надрезают напильником выше уровня намеченной колонии, надламывают, а колонию микроба, находящуюся в агаре, извлекают петлей и пересевают в свежую питательную среду;

• выращивание анаэробов в условиях вакуума. Вакуумные условия для выращивания анаэробов создают в анаэростате или эксикаторе. Исследуемый материал или культуру микробов засевают в пробирки с жидкой средой или в чашки Петри с плотной питательной средой. Посевы помещают в анаэростат, затем присоединяют его к насосу и выкачивают воздух. Степень разреженности воздуха определяют по показаниям вакуумметра. Колонии анаэробов в вакуумных условиях растут на поверхности плотной питательной среды.

Химические методы выращивания анаэробов (метод Аристовского). Материал, исследуемый на наличие анаэробов, засевают на среду в чашки Петри и помещают их в эксикатор, на дно которого кладут химический поглотитель кислорода: гидросульфит натрия или пирогаллол. В расширенную часть сосуда устанавливают на подставке чашки с посевами. Прибор закрывают крышкой и помещают в термостат при температуре 37 *С на 24–48 ч.

Биологический метод выращивания анаэробов (по Фортнеру). В чашку Петри наливают толстым слоем 5 % кровяной агар с 1–2 % глюкозы. Посередине чашки в питательной среде вырезают стерильным скальпелем канавку шириной 1–1,5 см, которая делит питательную среду на две половины. Одну из них засевают культурой анаэробов или исследуемым на их наличие материалом, другую половину – культурой аэробов: чудесной палочкой (Serratia marcescens) или кишечной палочкой (Escherichia coli). Перед посевом чашки подсушивают в термостате, чтобы аэробы вместе с капельками влаги не могли попасть на другую сторону чашки. Засеянные чашки закрывают, а свободное пространство между дном и крышкой заклеивают лейкопластырем, чтобы предупредить поступление в чашку кислорода извне. В термостате чашки устанавливают вверх дном. Быстро растущие аэробы, поглощая находящийся в чашке кислород, создают тем самым благоприятные условия для роста анаэробов.

Анаэростат для культивирования анаэробов. Анаэростат – прибор для выращивания микробов в анаэробных условиях – представляет собой толстостенную металлическую или пластиковую камеру с герметически привинчивающейся крышкой, на которой имеются вакуумметр и два крана для присоединения к вакуум-насосу. Вместо кислорода в нем используются газовые смеси.

Читайте также: