Пол плода днк технология

Добавил пользователь Alex
Обновлено: 19.09.2024

Стандартный тест определяет также аномалии числа половых хромосом (синдромы Шершевского-Тернера и Кляйнфельтера). Расширенный НИПТ распознает всю патологию, которая входит в стандартный плюс пять микроделеционных синдромов: кошачьего крика, 1р36, Прадера-Вилли, Ангельмана, ДиДжорджи.

БЕЗОПАСНОСТЬ

Немаловажным преимуществом является и то, что неинвазивная диагностика является еще и самым безопасным способом диагностировать хромосомные нарушения плода. В отличие от различных инвазивных методов, таких как кордоцентез, амниоцентез и аспирация ворсин хориона, этот тест делается по крови матери и является абсолютно безопасным как для ее здоровья, так и для здоровья будущего ребенка.

КАК ЭТО РАБОТАЕТ

Для проведения теста производится забор венозной крови у мамы и анализируется ДНК плода, которая попадает в кровоток беременной из плаценты. Тест выявляет наличие нарушения числа хромосом (анеуплоидий) плода. Анеуплоидии являются причинами врожденных генетических заболеваний ребенка, которые могут оказывать существенное влияние на его физическое здоровье и умственные способности.

ИСТОРИЯ В ДЕТАЛЯХ

КОМУ НУЖЕН ЭТОТ ТЕСТ?

Поскольку неинвазивный генетический тест является абсолютно безопасным методом диагностики, сделать его может любая беременная женщина, желающая получить наиболее полную информацию о здоровье своего будущего ребенка и развеять лишние сомнения и страхи.

ПОКАЗАНИЯ ДЛЯ НЕИНВАЗИВНОГО ТЕСТА:

Тест можно сдавать с 10 недель беременности, но ведущие генетики рекомендуют сначала пройти УЗИ-скрининг I триместра в 11 недель и при хорошем результате не идти на биохимию крови, а вместо него сделать НИПТ.

ОБРАТИТЕ ВНИМАНИЕ!

Кровь для тестирования сдается не натощак. Желательно перед сдачей крови на проведение исследования съесть что-нибудь сладкое. На анализ не влияют принимаемые во время беременности препараты, лекарства или витамины.

ВЗЯТИЕ КРОВИ

При сдаче крови на тест фракция фетальной ДНК (количество ДНК плода, циркулирующей в материнской крови) должна составлять не менее 4%. В случае сниженного количества (менее 4%) может потребоваться перезабор крови. Также вторая попытка вероятна при повышенной массе тела беременной.

ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ ДЛЯ НИПТ:

1. Наличие УЗИ-маркеров хромосомной патологии (таких как расширение толщины воротникового пространства, неиммунная водянка, гипоплазия носовой кости, укорочение длины трубчатых костей) или пороков развития.

3. Наличие в семье ребенка с генетической патологией. Во всех этих случаях необходима консультация генетика и кариотипирование плода.

Раньше нельзя было делать НИПТ при двойне, суррогатном материнстве, использовании донорских программ, а также после лечения стволовыми клетками или пересадки костно- го мозга. Но наука шагнула вперед, и все это больше не является противопоказанием.

Многие родители, да чего скрывать, почти все, хотят знать пол своего будущего малыша. Это дает время подготовиться к появлению младенца, придумать имя, купить одежду и обставить комнату. Ранее использовали народные методы определения пола ребенка: день зачатия, время года и даже гадания. Медицинские методы ультразвукового исследования тоже на всегда дают точный результат и вывить пол ребенка по средствам УЗИ можно уже на более поздних сроках, начиная с 12-13 недели. Генетика не стоит на месте и благодаря современным технологиям можно узнать кто полонит семью мальчик или девочка уже с 7-ой эмбриональной (9-й акушерской) недели. Это возможно благодаря тому, что в крови матери к 9-ой неделе достигается необходимая концентрация внеклеточной ДНК ребенка, которую можно выделить и исследовать.

Процедура ДНК тест на установления пола ребенка

Методика является неинвазивной и полностью безопасна для мамы и будущего малыша и не требует вторжения в брюшную полость и биопсии. Анализ проводится по венозной крови матери. Беременная женщина записывается на прием для сдачи крови, рекомендаций и противопоказаний нет. Из вены у мамы берется 20 мл крови и помещается в специальную пробирку, обработанную с внутренней стороны специальным составом. Далее и крови выделяется ДНК ребенка и начинается процесс исследования. ДНК тест на определение пола ребенка определяет мужскую половую Y-хромосому, которой у мамы не может быть от природы. Если такая хромосома находится, значит плод – мальчик. Если она отсутствует, значит плод – девочка.

Точность анализа

Сроки проведения ДНК теста на пол плода

Установить пол ребенка, используя ДНК анализ можно на раннем сроке беременности, уже на 9-ой акушерской неделе. К этому сроку в крови матери концентрация ДНК ребенка достигает порядка 10%. После сдачи крови, которую можно сдать в любой консультации или поликлинике, используя наш специальный набор, кровь попадает в ДНК лабораторию. Пройдет каких-то 4-5 дней и Вы получите красивое заключение с указанием пола Вашего будущего малыша. Стоимость теста не высокая, поэтому ее могут позволить люди даже с небольшим достатком. Ведь так хочется узнать заранее кто же станет новым членом семьи!

1. Буяновская О.А. Молекулярно-генетические методы в пренатальной диагностике хромосомных аномалий / О.А. Буяновская и др. // Акушерство и гинекология. – 2012. – № 8. – С. 3-9.

2. Мельниченко Г.А. Синдром Клайнфельтера / Г.А. Мельниченко, С.Ю. Калинченко, Д.А. Гусакова. – Москва: Практическая Медицина, 2007. – С. 5-7.

3. Пантюх К.С. Неинвазивная пренатальная диагностика анеуплоидий плода, основанная на секвенировании внеклеточной ДНК крови беременной женщины / К.С. Пантюх, Е.С. Шубина // Акушерство и гинекология. – 2015. – № 8. – С. 5-11.

4. Сухих Г.Т. Неинвазивная пренатальная диагностика анеуплоидий методом высокопроизводительного секвенирования (NGS) группе женщин высокого риска / Г.Т. Сухих и др. // Акушерство и гинекология. – 2015. – № 4. – С. 5-11.

5. Breman A.M. Evidence for feasibility of fetal trophoblastic cell-based noninvasive prenatal testing / A.M. Breman et al. // Prenat Diagn. – 2016. – Vol. 36, № 11. – P. 1009-1019.

6. Brigham N. The Gale Encyclopedia of Genetic Disorders / N. Brigham – Farmington Hills: Thomson Gale, 2005. – Vol. 2. – С. 1369-1371.

7. Emad A. Rapid aneuploidy detection of chromosomes 13, 18, 21, X and y using quantitative fluorescent polymerase chain reaction with few microdissected fetal cells / A. Emad et al. // Fetal Diagnosis and Therapy. – 2015. – Vol. 38, № 20. – P. 65-76.

8. Gudkov G.V. Early diagnostics of fetal aneuploidies by analyzing the polymorphisms of microsatellite DNA of trophoblasts circulating in the maternal bloodstream. / G.V. Gudkov et al. // European Journal of Biomedical and Life Sciences. – 2017. – № 1. – P. 69-73.

10. Megan A. Non-invasive prenatal testing: a review of international implementation and challenges / A. Megan et al. // Int J Womens Health. – 2015. – № 7. – P. 113-126.

12. Nicolaides K.H. Validation of targeted sequencing of single-nucleotide polymorphisms for non-invasive prenatal detection of aneuploidy of chromosomes 13, 18, 21, X, and Y / K.H. Nicolaides et al. // Prenatal Diagnosis. – 2013. – Vol.33, № 6. – Р. 575-579.

13. Purwosunu Y. Clinical potential for noninvasive prenatal diagnosis through detection of fetal cells in maternal blood / Y. Purwosunu et al. // Taiwanese journal of obstetrics & gynecology. – 2006. – Vol. 45, № 1. – P. 10-20.

14. Tartaglia N.R. A review of trisomy X (47, XXX) / N.R. Tartaglia et al. // Orphanet J Rare Dis. – 2010. – Vol. 5, № 8. – С. 5=8.

Основным методом диагностики пола плода в медицинской практике на данный момент является УЗИ диагностика, самый ранний срок определения пола по УЗИ – 11–12 недель, но точным данный метод может считаться только на 18 неделе. В то же время определение пола плода необходимо не только для удовлетворения любопытства родителей, но также и для определения наличия трисомий, моносомий и прочих аберраций числа половых хромосом, имеющих довольно высокую частоту в популяции: Синдром Шерешевского – Тёрнера 1:1500; Синдром Клайнфельтера 1:500; Синдром де ля Шапеля 1:20000 XYY-синдром 1:1000, ХХХ – 1:1000 и другие [2, 6, 14, 15].

Существующие методы инвазивной пренатальной диагностики позволяют определить пол плода на ранних стадиях гестации, но из-за недостатков: угроза прерывания беременности, развитие кровотечения и т.д., не целесообразно применять их без серьезных медицинских показаний [1, 10]. Поэтому использование методов неинвазивной пренатальной диагностики, для которых исследуемым материалом является кровь матери, может быть как ранней альтернативой УЗИ, так и безопасной альтернативой существующим инвазивным методам [3, 4].

Один из перспективных неинвазивных методов: захват трофобластов, циркулирующих в крови матери – генетический материал трофобластов при должном уровне обогащения и захвата может служить источником фетальной ДНК для пренатального генетического анализа начиная с 9-й недели гестации [9,11]. В то же время низкое содержание трофобластов в материнском кровотоке делает необходимым совершенствование протоколов молекулярной диагностики амплифицированного генетического материала, полученного из единичной клетки [12, 13].

Для определения пола можно использовать STR анализ, для этого библиотека амплифицированных фрагментов должна репрезентативно отражать геном единичной клетки и давать воспроизводимые результаты в ходе фрагментного STR анализа микросателлитной ДНК [5, 7, 8].

Цель исследования заключалась в ранней диагностике пола плода и аберраций числа половых хромосом, на основе STR анализа локусов половых хромосом на основе ДНК трофобластов, циркулирующих в кровотоке матери.

Материал и методы

В работе были исследованы 15 образцов периферической крови, полученные от женщин с одноплодной беременностью в сроках гестации 8–13 недель. Средний возраст обследованных женщин составил 28 лет (от 23 до 37 лет). У 8 (53,3 %) настоящая беременность была первой, у остальных – повторные.

Периферическую гепаринизированную венозную кровь беременных разбавляли фосфатно-солевым буфером и выделяли мононуклеары центрифугированием на градиенте Histopaque-1077 (плотность 1.077 г/мл). Полученный образец мононуклеарных клеток (~ 2×107 клеток в 800 мкл) подвергали негативной иммуномагнитной сепарации по маркерам зрелых линейно дифференцированных клеток (набор BD Human Lineage Cell Depletion Set). Клетки окрашивали антителами против HLA-G, Trop-2, и CD45, ядра окрашивали Hoechst 33342. Сортировку трофобластов выполняли на BD FACS AriaIII (BD Biosciences, США). Полногеномную амплификацию ДНК отсортированных клеток проводили с набором PicoPLEX™ WGA Kit (Rubicon Genomics, США) на амплификаторе С-1000 (Bio-Rad Laboratories, Inc., США) с электрофоретическим контролем на Agilent 2200 TapeStation (Agilent Technologies, США). Амплифицированную ДНК использовали для количественной флуоресцентной ПЦР с реагентами Aneufast Multiplex QF-PCR Kit (Genomed, United Kingdom), содержащими STR маркеры к микросателлитной ДНК половых хромосом. Фрагментный анализ продуктов количественной флуоресцентной ПЦР выполняли на генетическом анализаторе ABI PRISM ABI ABI 3500xL (Applied Biosystems, США) с размерным стандартом GeneScan™ 600 LIZ® Size Standard v2.0 и программным обеспечением GeneMapper® Software v5.0.

Результаты

Центрифугирование в градиенте плотности с последующей магнитной сепарацией позволило получить взвесь клеток, максимально обогащенную трофобластами. Средняя концентрация выделенных клеток после негативной сепарации составила ~ 4,72×105 клеток/мл, степень истощения превышала 90 % (93,1±2,14 %).

Негативную фракцию клеток подвергали специфическому иммуно-окрашиванию для выявления популяции трофобластов. Внутри гейта живых ядросодержащих клеток, негативных по панлейкоцитарному маркеру (CD45), выделяли двойной позитивный гейт HLA-G+Trop-2+, который использовали для дальнейшей сортировки (рис. 1).

Рис. 1. Выделение гейта сортировки трофобластов (Trop-2 + HLA-G + ) среди популяции клеток негативных по CD45

Число клеток-кандидатов, удовлетворяющих критериям сортировки CD45–HLA-G+Trop-2+, составило 34,4±10,3 клеток. Далее отсортированные в пробирки единичные клетки-кандидаты подвергали полногеномной амплификации. Электрофоретический контроль во всех образцах был положительным со средней концентрацией ДНК после очистки 56,8±10,1 нг/мкл.

На основе полногеномной амплификации получали библиотеку амплифицированных фрагментов ДНК единичных клеток для последующей мультиплексной количественной флуоресцентной ПЦР с использованием флуоресцентно-меченных праймеров, специфичных к индивидуальным STR последовательностям, с последующим разделением фрагментов капиллярным электрофорезом для сравнения числа пиков и их высоты для каждого STR маркера.

Наибольшая плотность длин фрагментов ДНК, полученных в ходе полногеномной амплификации, приходилась на диапазон 400–700 п.н., в связи с этим для определения пола были отобраны наиболее короткие STR маркеры (длиной менее 300 п.н.) для половых хромосом (табл. 1).

STR маркеры, использованные для определения полиморфизмов гоноосом (указаны максимальные диапазоны длин аллелей)

Неинвазивный Пренатальный Тест (НИПТ) - это метод выделения из крови беременной женщины ДНК плода и её анализа с помощью новейшей технологии, которая позволяет определить ряд тяжёлых и наиболее распространённых хромосомных синдромов (Дауна, Эдвардса, Патау, Тернера и мн. др.) и определить пол плода.

До настоящего времени не существовало способа провести скрининг на микроделеции и другие генетические отклонения, вызванные дополнительными или отсутствующими хромосомами в ДНК ребёнка.

УЗИ не обладает достаточной надёжностью, особенно в первом триместре беременности. Единственным способом удостовериться является инвазивная процедура, несущая небольшой риск выкидыша. Неинвазивный пренатальный тест Panorama – безопасный и точный способ скрининга микроделеций.

Теперь определение хромосомных синдромов возможно на ранних сроках беременности по анализу крови будущей мамы!

Микроделеция – это отсутствие небольшого участка хромосомы. Известно, что некоторые микроделеции вызывают определённые генетические синдромы с большим негативным влиянием на здоровье ребёнка, в том числе умственное расстройство, проблемы с сердцем, дыханием, с иммунной системой, нарушением питания и др. Все они могут потребовать немедленного врачебного вмешательства сразу после рождения ребёнка.

Во время беременности небольшое количество ДНК ребёнка циркулирует в кровотоке матери. Такая ДНК несёт генетическую информацию о ребёнке и его хромосомах. Это даёт возможность провести очень тонкий анализ хромосом будущего ребёнка и найти определённые нарушения, которые могут повлиять на его здоровье.

Неинвазивный Пренатальный Генетический Тест может быть рекомендован женщинам любого возраста. В отличие от синдрома Дауна и некоторых других состояний, риск возникновения которых повышается с возрастом матери, риск микроделеций в 20 лет точно такой же, как и в 40-45 лет.

Точность Неинвазивного Пренатального Теста достигает 99,9%.

Где сделать этот тест? Тест разработан и выполняется в лаборатории компании Igenomix Испания. Сроки выполнения – до 10 рабочих дней. А сдать кровь можно у нас, в ВитроКлиник. После того, как в Америке будет проведён неинвазивный пренатальный тест и результаты поступят к нам, мы сразу же пришлём их на вашу электронную почту.

Неинвазивный Пренатальный ДНК Тест:

безопасен для матери и плода: не требует инвазивных процедур, госпитализации, длительной подготовки и т.д.
достаточно всего 10 мл венозной крови матери (не амниотической жидкости, как при амниоцентезе и не крови плода, как при кордоцентезе)
высокая точность метода (по исследованиям компании Natera точность неинвазивного пренатального теста достигает 99,9%)
может выполняться с 9-ой недели беременности;
сроки выполнения – 12 рабочих дней;
результат приходит на электронную почту;
можно делать по желанию женщины (не требуется направление от врача генетика).

Показания для проведения НИПТ:

подозрение на хромосомную аномалию плода по данным проведённого ультразвукового исследования;
риск анеуплоидии по результатам биохимического скрининга в первом и/или втором триместре беременности;
невынашивание беременности в анамнезе;
наличие в роду наследственных заболеваний или ребёнка с хромосомным синдромом;
бесплодие в анамнезе;
мертворождение или рождение ребёнка с пороками развития в анамнезе;
применение вспомогательных репродуктивных технологий (ЭКО) при данной беременности;
возраст беременной женщины старше 35 лет.

Известно, что по большей части анеуплоидии плода никак не проявляются во время беременности. Поэтому НИПТ может быть рекомендовано всем женщинам, желающим получить дополнительную информацию о здоровье своего будущего ребёнка.

Когда проходить неинвазивную диагностику плода?

Неинвазивную пренатальную диагностику можно проводить не ранее 9-й недели беременности. Это связано с тем, что в более ранние сроки в крови матери может оказаться слишком мало ДНК плода для достоверного результата.

После 9-ти недель беременности НИПТ можно проводить на любом сроке. Однако не стоит забывать, что в сроки после 25 недель беременности остаётся не так много времени, чтобы провести дополнительные исследования при наличии высокого риска патологии (например, амниоцентез).

Как проводится анализ на генетическую патологию плода?

Неинвазивная пренатальная диагностика проводится по желанию женщины или по показанию лечащего врача.

На анализ кровь сдаётся из вены и независимо от приёма пищи. За 20 минут рекомендовано съесть что-нибудь сладкое (шоколад, сладкий сок). Это повышает концентрацию ДНК плода в крови матери.

Перед сдачей анализа женщине необходима консультация врача акушера-гинеколога. Врач подтверждает наличие прогрессирующей беременности, срок которой превышает 9-ти недель. А также заполняет и выдаёт Вам на руки направление в лабораторию. С собой на консультацию необходимо иметь результат УЗИ (до 1-й недели сроком давности).

В случае выявления высокого риска хромосомной патологии рекомендована консультация врача-генетика, который объяснит полученные результаты и поможет принять правильное решение.

Виды Неинвазивного Пренатального ДНК Теста:

НИПТ Lifecodexx для двойни

Тест позволяет определить ряд тяжёлых и наиболее распространённых хромосомных синдромов (Дауна, Эдвардса, Патау). Возможно определение пола плода при двойне.

НИПТ Prenetix-тест позволяет провести исследование при многоплодной беременности (не более 2-х плодов), донорских программах и в случае суррогатного материнства.

Внимание!Данный тест не проводится при:

POC analysis

Молекулярное кариотипирование клеток абортивного материала при неразвивающейся беременности с помощью технологии высокопроизводительного секвенирования. POC analysis

Технология исследования — NGS

Тип биологического образца:

образец абортивного материала физиологическом растворе;
образец венозной крови матери (4 мл).

НИПТ NACE 5 – ДНК тест на 7 синдромов, можно определить аномалии 13, 18, 21 и выявить аномалии половых хромосом X и Y. Дополнительно определит пол будущего плода.

Синдром Дауна (дополнительная 21 хромосома)
Синдромы Эдвардса и Патау (дополнительная 18 и 13 хромосомы соответственно)
Синдром Клайнфельтера (дополнительная Х хромосома) – наблюдается у мальчиков
Синдром Тернера (недостающая Х хромосома) - наблюдается у девочек
Синдром Якобса (дополнительная Y хромосома) – наблюдается у мальчиков
Трисомия Х хромосомы (дополнительная X хромосома) наблюдается у девочек

Универсальный тест, его выполнение возможно, как при одноплодной естественной беременности, так и при беременности двойней, при носительстве донорской яйцеклетки, суррогатным матерям и в том случае, когда один плод в двойне редуцирован.

При двойне возможно посмотреть синдром Дауна, синдромы Эдвардса и Патау + определить пол будущего плода. Информативен при ЭКО, донорской яйцеклетке, суррогатном материнстве и сложных комбинациях (двойня у суррогатной матери, двойня с донорской яйцеклеткой).

НИПТ NACE 24 – полногеномный НИПТ включает определение вышеперечисленных синдромов (скрининг 13, 18, 21, Х, Y хромосом плода (числовое нарушение половых хромосом)) и еще 19 хромосомных аномалий. Видит дупликации и делеции более 7 МБ (несбалансированные перестройки). Дополнительно определит пол будущего плода.

NACE 24 при ЭКО с донорской яйцеклеткой и суррогатном материнстве информативен. При двуплодной беременности не назначается.

НИПТ NACE 5 и NACE 24:

Проводится с 10-ти недель беременности по УЗИ.
Допустим при ЭКО, ИКСИ, суррогатном материнстве, донорской яйцеклетке – дополнительно обсудите вопрос с нашим генетиком по выбору теста. Это абсолютно.
Метод – секвенирование нового поколения - NGS.
Разрешен при редукции одного из эмбрионов. После редукции должно пройти не менее 4 недель.
Срок проведения исследования до 10 рабочих дней (с момента поступления биоматериала в лабораторию в Москву).
Исследования проходит в Испании.
Точность исследования выше 99%

Анализы на НИПТ в нашей клинике принимаются по дням:

Понедельник-четверг – с 8.00 до 15.00
В пятницу, субботу и воскресенье – анализы на НИПТ не принимаются!

На анализ можно взять с собой заграничный паспорт (если имеется). Для заполнения бланка анализа нужно точно знать, как пишется Ваше Ф.И.О. латинскими буквами. Российский паспорт понадобится для оформления договора на услугу.

Читайте также: