Исследования посевов крови в анализаторах автоматах дают более быстрый результат за счет

Добавил пользователь Дмитрий К.
Обновлено: 19.09.2024

уровня оксигенации тканей;
адекватности альвеолярной вентиляции;
состояния кислотно-основного баланса;
состояния водно-электролитного баланса;
ряда метаболических процессов.

рО₂ — парциальное давление кислорода в крови. Отражает адекватность поглощения кислорода в легких;
рСО₂ — парциальное давление углекислого газа в крови. Накопление или уменьшение СО2 существенно влияют на кислотно-основное состояние;
tHb — концентрация общего гемоглобина в крови;
FО2Hb — фракция оксигемоглобина. Отражает процент оксигенированного гемоглобина относительно всех присутствующих в крови гемоглобинов, включая дисгемоглобины;
FСОHb — фракция карбоксигемоглобина, является отношением между концентрацией карбоксигемоглобина и общего гемоглобина;
FMetHb — фракция метгемоглобина, является отношением между концентрацией метгемоглобина и общего гемоглобина;
FHHb — фракция восстановленного гемоглобина, является отношением между восстановленным гемоглобином и общим гемоглобином;
FHbF — фракция фетального гемоглобина, является отношением между фетальным и общим гемоглобином;
рН — отрицательный десятичный логарифм молярной концентрации ионов Н + . Это основной показатель, который отражает кислотно-основное состояние крови;
К + — концентрация ионов калия в крови;
Cl - — концентрация ионов хлора в крови;
Ca 2+ — концентрация ионов кальция в крови;
Na + — концентрация ионов натрия в крови;
Glu — концентрация глюкозы;
Lac — концентрация лактата. Повышенная концентрация лактата отражает неадекватное потребление кислорода клетками организма;

Расчетные параметры:

sО₂ — насыщение кислородом крови и определяется как отношение между концентрацией О₂Hb и НHb+ О2Hb;
сtО₂ (а) — общее содержание кислорода в артериальной крови;
р50 — парциальное давление кислорода при 50% насыщении крови. По этому параметру можно оценить сродство гемоглобина к кислороду;
Рх — показатель, характеризующий экстракцию кислорода в тканях;
сНСО₃ — концентрация бикарбоната (гидроксикарбоната) в крови. Параметр необходим для диагностики метаболических нарушений кислотно-основного равновесия — ацидоза/алкалоза;
ВЕ — характеризует избыток оснований. Показатель характеризует буферную способность крови.

Исследование системы гемостаза

Цель исследования гемостаза – диагностика расстройств системы свертывания и фибринолиза, мониторинг терапии. В последние годы благодаря совершенствованию кардиохирургии значительно расширился объем оперативных вмешательств при операциях на сердце и сосудах. Диагностика гемостазиологических проблем (кровотечение, тромбоз, синдром ДВС), возникающих во время операции и в послеоперационном периоде, требуют применения самых современных и информативных экспресс-методов.

В лаборатории экспресс-диагностики имеется возможность выполнить исследования:
1. Коагулограмма, показатели которой анализируются на автоматическом коагулометре ELITE (Instrumentation Laboratory).

Когаулограмма включает следующие параметры.
a. АЧТВ – активированное частично тромбопластиновое время. Тест характеризует внутренний путь активации свертывания, используется при мониторинге терапии нефракционированным гепарином.
b. МНО – международное нормализированное отношение протромбинового времени плазмы больного к нормальной плазме. Тест характеризует факторы протромбинового комплекса. МНО – основной тест для контроля терапии оральными антикоагулянтами (варфарин, синкумар и др.)
c. Количество фибриногена, I фактора свертывания.
d. Тромбиновое и рептилазное время характеризуют конечный этап свертывания, фибринолиз.
e. РФМК - растворимые фибринмономерные комплексы. Тест является маркером тромбинемии, дисфириногенемии.
f. Д-димеры - продукты деградации фибрина. Важный маркер для диагностики тромботических и тромбоэмболических осложнений, ДВС- синдрома, фибринолиза.
g. Активность антитромбина III, который входит в состав противосвертывающей системы, имеет значение для оценки адекватности гепаринотерапии, тромбофилических состояний.
2. Тромбоэластограмма с графической записью динамики образования сгутка крови, определяя время начала свертывания, скорость свертывания, амплитуду сгуска, время его лизиса. На тромбоэластографе ROTEM имеется возможность проводить исследования с активацией свертывания по внутреннему и внешнему пути, в присутствии гепариназы.

3. Активированное время свертывания. Тест незаменим при мониторинге терапии гепарином. Исследование выполняется на приборе I-Stat.

Биохимические и иммунохимические исследования

Выполняются на современных сертифицированных анализаторах OLYMPUS MU400 и ELECSYS 2010. Приборы отличаются высоким уровнем автоматизации процесса выполнения анализов, калибровок, контроля. Для обеспечения качественного выполнения биохимических и иммунохимических исследований в анализаторах имеются встроенные программы контроля качества, применяются одноразовые измерительные кюветы в ELECSYS 2010 и специальные проточные кюветы в OLYMPUS MU400 в комплекте с водоочистной станцией, раздельные системы дозирования для проб и реагентов и другие технологии.

Показатели углеводного обмена
• Глюкоза

Субстраты
• Билирубин общий
• Билирубин прямой

Биохимические показатели воспаления
• СРБ – С-реактивный белок
• ПСТ – прокальцитонин

Большая часть ферментов попадают в сыворотку крови при разрушении клеток (повреждении клеточных мембран) или секреции.
• α-амилаза, маркер повреждения поджелудочной железы
• АЛТ – аланинаминотрансфераза, маркер повреждения клеток печени
• АСТ – аспартатаминотрансфераза, маркер повреждения сердечной и скелетных мышц, печени
• ГГТ – гамма-глутамилтранспептидаза, наибольшая активность того фермента обнаруживается в почках, печени, поджелудочной железы, селезенке и тонком кишечнике.
• ЩФ – щелочная фосфатаза. В сыворотке, в основном костного или печеночного происхождения
• КК – креатинкиназа, фермент, локализованный, главным образом, в поперечнополосатых мышцах, мышце сердца, матке и мозге.

Маркеры повреждения миокарда, диагностика и контроль терапии при инфаркте миокарда, остром коронарном синдроме.
• Тропонин Т
• МВ-КК
• Миоглобин

Гематологические и общеклинические исследования

• Гематологические показатели: гемоглобин, гематокрит, количество эритроцитов, среднее содержание гемоглобина в одном эритроците, средний объем эритроцитов, тромбоциты, лейкоциты. Анализ выполняется на автоматических гематологических анализаторах Cell-Dyn 1700 и Emerald (Abbott).
• Клинический анализ крови с подсчетом лейкоцитарной формулы.
• Исследования выпотных жидкостей с дифференцировкой клеточного состава.
• Клинический анализ мочи с микроскопией осадка.
• Индивидуальный подбор донорской крови реципиенту (тестирование крови донора и реципиента по 5 антигенам, реакция Кумбса)

В настоящее время в клинической лабораторной диагностике широко используются современные биохимические и иммунохимические методы. С целью совершенствования и ускорения проведения исследований применяются полуавто- и автоанализаторы, а так же большое количество лабораторно-диагностических наборов и тест-систем. Биохимический анализатор – это прибор для биохимических исследований различных веществ: электролитов, ферментов, гормонов и прочее. Он способен определить концентрацию и наличие этих веществ практически в любых видах биологического материала. Биохимический анализатор обеспечивает выполнение различных тестов и анализов: от срочных до традиционных клинико-биохимических. Данные аппараты делят на автоматические и полуавтоматические. Автоматические выполняют большой спектр операций: отбор материалов и реагентов, их смешивание и нагрев, анализ, обработка и печать полученной информации, автоматическое промывание прибора. Исследования с использованием биохимических анализаторов являются более быстрыми и точными по сравнению с ручными методами. К ценным достоинствам современных анализаторов относится высокий уровень стандартизации процесса, постоянство количества и химического состава расходных материалов. Применение идентичных реагентов и реактивов способствует сопоставимости результатов, полученных в разное время в разных лабораториях. В данной статье раскрывается актуальность использования современных биохимических анализаторов и основные принципы их работы.

1. Скворцова Р.Г. Современные подходы к организации клинико-диагностической лаборатории // Сибирский медицинский журнал. – 2013. – № 6. – С. 170–174.

2. Судаков И.А., Сахабиева Э.В. Биохимический анализатор как инструмент современной медицинской диагностики // Аллея науки. – 2018. – № 6(22). – С. 396–399.

4. Sadiqov R.V. Тhe value of immunological and biochemical analyses in carrying out medical and biology researches // Anzbajndan Medical Journal. – 2012. – № 2. – С. 155–158.

5. Spasov A.A., Bugaeva L.I., Bukatin M.V., Kuzubova E.A., Rebrova D.N. The influence of a new antioxidatic preparation on the reproductive function of male-rats // European Journal of Natural History. – 2007. – № 1. – С. 115–116.

Биохимические анализаторы являются важным и необходимым шагом в развитии современных клинико-биохимических исследований. Диагностические исследования, проводимые с непосредственным участием лаборанта, могут значительно отклоняться от действительности из-за неизбежных ошибок при работе с большим числом образцов. Исследования с использованием анализаторов отличаются от стандартных ручных методов высокой надёжностью, большей точностью, экономичностью и эффективностью, что обеспечивает возможность быстрой постановки правильного диагноза [1].

Первым толчком к развитию биохимических анализаторов послужило создание фотометров и спектрофотометров с контролируемой температурой кюветы. Это позволило осуществить на практике принцип кинетического исследования субстратов и ферментов. В дальнейшем в устройства была заложена электронная функция автоматического перевода регистрируемых значений в показатели концентрации или активности. Исключение из процесса оператора позволило проводить исследования в режимах:

• фиксированного времени (измерение результата через определенный интервал времени после начала реакции);

• кинетики (ряд измерений с определенным интервалом времени и расчетом активности фермента по средней величине изменения абсорбции за этот интервал времени);

• дифференциальном (расчет концентрации по разности абсорбции опытного и контрольного образцов);

• бихроматическом (расчет концентрации по разности абсорбции, измеренной на двух длинах волн).

Биохимический анализатор может обеспечивать выполнение различных тестов и анализов: от срочных до традиционных клинико-биохимических. Данные аппараты делят на автоматические, полуавтоматические и спектрофотометры. Автоматические выполняют большой спектр операций: отбор материалов и реагентов, их смешивание и нагрев, анализ, обработку и печать полученной информации, автоматическое промывание прибора. На полуавтоматических анализаторах процесс подготовки анализируемых веществ оператор производит вручную, что крайне неудобно для крупных лабораторий. Для более быстрой и удобной работы системы биохимические анализаторы могут быть оснащены: автоматическими манипуляторами, центрифугами для пробирок, специальным программным обеспечением для обработки результатов пациентов.

Закрытый тип анализаторов предполагает применение ограниченного числа реагентов, предусмотренных разработчиком. В систему изначально добавлены контрольные и калибровочные данные, а информация о применяемых реагентах в данном конкретном исследовании заносится в прибор посредством считывания штрих-кода с их упаковки. Ограниченность выбора реагентов является минусом данного анализатора. Как правило, заявленные производителем реагенты достаточно дорогостоящие, заменить их более дешевыми аналогами нельзя, так как это может привести к некорректной работе самого анализатора. К плюсам анализатора данного типа можно отнести стабильность результатов калибрования.

Открытый тип анализаторов предполагает возможность применения реагентов практически любого производителя благодаря встроенному набору светофильтров для выполнения наиболее распространенных методик анализа. В целом работа систем открытого и закрытого типа одинакова. Стоит отметить, что не все системы открытого типа полностью похожи. Каждый производитель разрабатывает свои уникальные механизмы – блоки реагентов, блоки анализируемых образцов и т. д.

В основу работы лабораторного анализатора положен спектрофотометрический метод – изучение биологических жидкостей с помощью химических реакций и спектральных измерений. Точность, объективность анализов в сочетании с высокой производительностью – основные достоинства этого метода.

Автоматические биохимические анализаторы проводят весь процесс работы без вмешательств лаборанта: дозировку проб и реагентов; фотометрию, выведение данных на монитор компьютера и их перенесение на бумагу; промыв системы тоже происходит автоматически [2].

Из этого следует, что автоматические биохимические анализаторы выгодно отличаются от остальных типов: своей производительностью до 800 тестов/час; скоростью замера и обработки результатов: время одного замера составляет от 3 до 30 сек; минимальным расходом реагентов; точностью результатов.

Плюсы использования автоматического биохимического анализатора:

1. Требуют минимального участия оператора. Оператор выбирает профиль работы прибора в соответствии с порядком определения параметров и количеством анализируемых проб. Все остальные действия по подготовке пробы осуществляются в автоматическом режиме.

2. Высокая производительность, быстрота в обработке проб и результатов анализов.

3. Экономическая выгодность и быстрая окупаемость за счет минимального потребления реагентов, исследуемых материалов, электроэнергии за счёт автоматического смешивания, подачи реагентов и промывки системы.

4. Управление автоматическим биохимическим анализатором осуществляется посредством самого современного компьютерного оборудования, которое в зависимости от модели может являться неотъемлемой частью прибора, либо анализатор имеет возможность подключения к внешнему мощному компьютеру. Программное обеспечение адаптировано под работу с операционными системами Windows и DOS [3].

Все методы биохимического анализа имеют чёткие правила, выполнение которых позволяет определить правильный диагноз и увеличить производительность, что немаловажно. К ним относится правило минимального объема проб, которое позволяет повысить экономичность биохимического анализатора в целом. Кроме того, существует такой нюанс работы рассматриваемых приборов, как минимальный шаг дозирования, который также способен оказывать серьезное влияние на расход реагентов, а значит и экономическую эффективность анализатора. Более точная (с меньшим шагом) дозировка реагентов и образцов позволяет выдержать заданный регламент анализа, используя меньшее количество препаратов. В автоматизированных анализаторах присутствует проточная кювета, исключившая ошибки, связанные с постановкой кюветы в измерительный модуль и ее термостатированием, и позволяющей экономнее расходовать реактивы, поскольку при толщине поглощающего слоя 1 см объем кюветы составляет не более 100 мкл. С учетом объемов подводящих трубок и необходимости несколько раз менять реакционную смесь в кювете до начала измерения объем раствора, требуемый для проведения измерений, составляет 0,5–1,0 мл [4].

Принцип действия биохимического анализатора – с двух сторон отверстия находятся два независимых друг от друга электрода, когда клетка проходит через апертуру, появляется электрический импульс, регистрируемый специальным датчиком. Для установления степени концентрации тестируемых клеток через апертуру прогоняют через канал нужный объем пробы и производят подсчет образованных при этом импульсов. В некоторых случаях при подсчете импульсов осуществляется сбой и устройство выдает ошибочный результат. Это происходит, например, когда в одно и то же время в апертуре находится сразу две клетки. В этом случае анализатор фиксирует их как один электрический импульс. Чтобы не совершить подобной ошибки, делают разведение тестируемой пробы при помощи изотонического раствора определенной концентрации. Это позволяет достигнуть присутствия в канале устройства в нужный момент только одной клетки. Тем не менее, при недостаточном перемешивании дозы крови перед тестированием ошибка не исключается даже при верном разведении пробы. Данные анализа, выдаются в виде цифровых значений и дополнительного графического изображения.

Практически все современные анализаторы могут проводить исследования по конечной точке, а также регистрировать динамику фермент-субстратного взаимодействия, точно определять другие параметры, используя изначально заложенные или составленные в ходе исследования калибровочные кривые [5].

Помимо этого, некоторые модели анализирующих устройств открытого типа также оборудованы сканером штрих-кода, что позволяет таким же образом считывать информацию об используемых реагентах.

Таким образом, биохимический анализатор остается наиболее востребованной и неотъемлемой частью не только современной клиники, но экспериментальной биологической лаборатории.

Вывод: биохимические анализаторы абсолютно необходимы при проведении клинической диагностики, поскольку эффективность их работы в разы превышает эффективность диагностики, проводимой вручную. Стоит отметить такие моменты, как качество самих анализаторов, которое может значительно варьировать, связанную с качеством оборудования стоимость и необходимость правильного обслуживания аппаратуры. Эти критерии выступают как ограничители, препятствующие распространению как высококачественных анализаторов, так и аппаратуры такого рода в принципе. Опыт применения типовых анализаторов для лабораторий показал, что их введение имеет положительное значение, но зачастую эффективность оказывается ниже необходимого. Следовательно, выбор анализатора должен производиться с учётом специфики самого медицинского или исследовательского учреждения, а также условий, влияющих на его работу.

В этой статье мы ищем простой ответ на простой вопрос, который сейчас в топе поиска на просторах интернета, - “как выбрать метод исследования, чтобы сдать тест на коронавирус”. Информации в сети очень много, она сложная, потому что написана в основном врачами и лабораториями. А еще потому что не все пока понятно про коронавирус в принципе, и поэтому очень много обтекаемых фраз. А это не помогает пациенту разобраться.

Нас интересуют 2 простых вопроса:

Как понять, болею ли я в данный момент/заразен ли я в данный момент?
Как узнать, переболел ли я в прошлом/есть ли у меня иммунитет?

Мы коротко описали основные виды тестов на коронавирус, которые сейчас предлагают клиники и лаборатории. Совсем без специфической терминологии не обойтись, но мы постарались описать их максимально понятно. И что самое ценное, рассказали, какие виды тестов показательны в какой период заболевания, что означают положительные и отрицательные результаты того или иного метода и в каких случаях придется пройти повторное тестирование.

Молекулярная диагностика коронавируса (ПЦР)

Важнейшим лабораторным методом является ПЦР в биоматериале, взятом из дыхательных путей (мазок из носа и ротоглотки).

Суть метода ПЦР заключается в том, что генетическая информация вируса (РНК) многократно копируется в лабораторных условиях специальным прибором – амплификатором, увеличивая свою концентрацию в два раза в каждом цикле копирования. Это дает возможность выявить вирус или бактерию даже в тех случаях, когда его количество составляет лишь сотню клеток в миллилитре крови. Если генетическая информация тестируемой бактерии или вируса в пробе отсутствует, то она не копируется и не определяется.

Анализ методом ПЦР обычно проводится тем, у кого есть симптомы респираторного заболевания или тем, кто имел контакты с возможным источником инфекции.

Отсутствие генетического материала возбудителя (отрицательный результат) означает, что человек не инфицирован на момент взятия анализа. Для подтверждения или исключения наличия инфекции тест выполняется повторно через определенные промежутки времени.

ПЦР-диагностика используется для установления факта заболевания коронавирусом. Вирус можно обнаружить сразу после заражения, даже если у пациента еще нет проявлений болезни. Анализ уместно сделать, если вы контактировали с носителем инфекции или находились там, где было возможно заражение. Он также используется для подтверждения диагноза.

Однако молекулярные РНК-тесты не являются абсолютно надежными и могут у значительной части в действительности инфицированных пациентов дать отрицательный результат. Это зависит от достаточности содержания вируса в материале выбранной локализации на той или иной стадии инфекции, качества взятия материала, предела чувствительности теста, присутствия ингибиторов ПЦР и пр. Поэтому в диагностике особое значение придается характерной картине КТ. В дополнение к этим исследованиям и клинической оценке могут быть полезны исследования, направленные на выявление в крови специфических антител, вырабатываемых организмом против SARS-CoV-2.

Нет, мы не хотим вас запутать. Если тест отрицательный, но симптомы присутствуют, не надо читать статьи, нужно обратиться к врачу. Специфику течения любой инфекции никто не отменял. Врач будет использовать дополнительные методы исследования и ставить диагноз. Не занимайтесь самодиагностикой. Для этого нужно было закончить медицинский ВУЗ.

У нас в клинике вы можете пройти исследование РНК коронавирусов SARS-CoV-2 (COVID-19), SARS-CoV и MERS-CoV методом ПЦР (качественное определение). Тест-система разработана в ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора. Чувствительность используемой тест-системы составляет 103 копии плазмид на миллилитр (10*3).

Тестирование на наличие антител к коронавирусу COVID-19

Аналогично другим вирусным инфекциям, Коронавирус стимулирует гуморальный и клеточный иммунный ответ (IgM и IgG) . После вторжения вируса в организм, в крови больного начинают появляться сначала иммуноглобулин класса M (IgM), позднее – иммуноглобулин класса G (IgG), после чего активируется иммунитет и клетки иммунной системы атакуют собственные клетки, зараженные вирусом.

Для получения ответа на вопрос инфицирован ли пациент в данный момент, подвергался ли человек воздействию вируса и развился ли у него иммунный ответ, необходимо применение тестов на выявление антител (Ig G, Ig M, Ig A) к конкретному вирусу. В основе таких тестов лежат методы иммуноферментного анализа (ИФА), иммунохроматографии (ИХА) и их аналогов.

Антитела класса М появляются в острой фазе заболевания и снижаются после выздоровления. Антитела класса G появляются на 7 сутки от начала заболевания и держатся длительное время, продолжительность этого времени еще неизвестна.

По наличию и уровню IgM антител в крови можно судить о текущей или недавно перенесенной инфекции. Антитела IgM появляются уже через несколько дней после первых проявлений болезни (на 2-3 сутки от начала заболевания), их концентрация достигает максимума на 7-10 сутки от начала заболевания и определяются в крови 1- 1,5 месяца. IgM первым вырабатывается среди всех иммуноглобулинов при контакте организма с инфекцией, поэтому их называют иммуноглобулинами первичного иммунного ответа. Их присутствие в крови свидетельствует об острой стадии инфекционного процесса.

Специфические IgG антитела обычно присутствуют в крови длительное время и после выздоровления и могут выполнять защитную роль. Поэтому исследование уровня специфических IgG к SARS-CoV-2 может помочь для прогноза вероятного наличия иммунной защиты в результате перенесенной инфекции. Таким образом, определение IgG не используется при ранней диагностике инфекции – он обнаруживается в крови через две недели от начала заболевания, пик его определяется через месяц и продолжительность определения его пока неизвестна. IgG определяет появление иммунитета в дальнейшем.

Для первичного прохождения исследования на антитела, рекомендуется выявление в крови одновременно IgM и IgG антител.

У нас в клинике вы можете пройти экспресс-тестирование за 15 минут методом ИХА или сдать кровь на анализ на антитела методом ИФА. Мы работаем только с аккредитованными Роспотребнадзором лабораториями.

Экспресс тест на коронавирус (ИХА)

Экспресс-тесты - это качественные или полуколичественные способы диагностики, которые дают ответ лишь на вопрос, имеются ли признаки присутствия коронавируса в организме пациента и, фактически, не дают возможность оценить количество возбудителя.

Экспресс тесты проводятся методом иммунохроматографии (ИХА), не требуют использования специального оборудования, но требуют присутствие медсестры, так как забор крови производится из пальца. Продолжительность процедуры анализа находится в пределах 10-30 минут

Положительный результат такого теста требует обязательной проверки методом ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Существует два типа быстрых тестов на COVID-19:

тесты непосредственного выявления антигена SARS-CoV-2, которые установят наличие компонентов самого вируса (например, белковой оболочки)
тесты выявления антител (они наиболее распространенные в экспресс-диагностике) - это непрямые тесты по выявлению иммуноглобулинов в крови - IgM и IgG.

Процедура анализа чрезвычайно проста:

Собрать в пробирку пробу крови или плазмы или сыворотки.
Добавить каплю пробы в специальное углубление на панели с тестовой лентой.
Капнуть в углубление 2-3 капли буферного раствора.
Через 15 минут получаем результат - это появление окрашенных участков на тестовой ленте. Участки показывают или отрицательный результат, или наличие иммуноглобулинов IgM и IgG, как отдельно, так и обоих вместе.

Анализ на антитела к коронавирусу (ИФА)

Непрямой иммуноферментный анализ (ИФА) – полуколичественный анализ, им определяется количество выявленных антител IgM и IgG. Берется венозная кровь, а для исследования используется сыворотка крови.

Показания для назначения анализа на антитела к коронавирусу COVID-19:

Диагностика заболевания.
Определение иммунитета.
Получение информации о перенесенном заболевании с бессимптомным течением.
Отбор доноров для переливания крови пациентам с тяжелой формой заболевания.
Определение стадии заболевания, периода заразности для окружающих.

В двух словах, чем отличается ИФА и ИХА? В каком случае достаточно эксперсс теста (ИХА), а когда нужно точно делать количественный (ИФА)?

Это сложный вопрос. Экспресс тесты - высокая специфичность (почти 100%), т.е. срабатывает только на COVID-19, но низкая чувствительность (71%). А метод ИФА более чувствительный, но менее специфичный. Это очень тонкие различия и пациенту они не нужны. Экспресс тест - это быстро, можно охватить большой коллектив, быстро получить ответ. А анализ из вены - более основательно.

Дополнительные методы диагностики

Кроме указанных выше специфических анализов, у больных коронавирусной инфекцией, и для лиц с подозрением на это заболевание, определяют газы, растворенные в крови, печеночные и почечные пробы, миоглобин, ферменты миокарда, скорость оседания эритроцитов, С-реактивный белок, общий анализ мочи и проводят другие исследования, которые позволяют уточнить состояние пациента и назначить нужное лечение.

Коротко обо всех методах диагностики коронавируса

Тест на коронавирус и антитела к нему – взаимодополняющие диагностики.

Тест на коронавирус- это определение вируса в мазке из ротоглотки методом ПЦР. Он используется для того, чтобы установить наличие коронавируса на самых ранних стадиях, даже если у вас нет никаких симптомов проявлений болезни. Но при этом используется обычно при наличие симптомов, либо при положительном анализе на антитела М.

Анализ на антитела к коронавирусу позволяет выявить как заболевших в острой стадии, так и уже переболевших коронавирусом COVID-19.

Наличие специфических антител класса M (иммуноглобулинов IgM) выявляются в крови в острой фазе заболевания и вскоре после выздоровления снижаются. Наличие специфических антител класса G (иммуноглобулинов IgG) в сыворотке крови говорит о факте инфицирования вирусом SARS-CoV-2 в прошлом и о сформированном специфическом иммунном ответе (наличие иммунитета).

Как понять, болею ли я сейчас и могу ли быть заразен?

Если нет никаких клинических симптомов, то для первичного анализа, рекомендуется выявление в крови одновременно IgM и IgG антител. Любым методом: ИФА (кровь из вены) или ИХА (экспресс тест из пальца). Достаточно сделать один тест и получить отрицательный результат. В таком случае беспокоиться не о чем.
Если вы решили пройти экспресс-тест и были выявлены антитела класса M, то обязательно нужно делать диагностику в мазке методом ПЦР, даже если нет симптомов.
Если вы сдали кровь (ИФА) и были выявлены антитела класса M, то тоже обязательно нужно делать диагностику в мазке методом ПЦР, даже если нет симптомов.
Если есть клинические симптомы, то прежде всего нужна диагностика в мазке методом ПЦР, а также желательна диагностика на антитела методом ИФА (кровь из вены).

Как понять, болел ли я в прошлом и есть ли иммунитет?

Если нет никаких клинических симптомов, то для первичного анализа мы все равно рекомендуем сдать анализ на выявление в крови одновременно IgM и IgG антител. Любым методом: ИФА (кровь из вены) или ИХА (экспресс тест из пальца),
чтобы исключить острую стадию заболевания без симптомов (отрицательный результат - отсутствие иммуноглобулинов М)
чтобы узнать о наличие у вас иммунитета после перенесенного в прошлом заболевание (положительный результат - наличие иммуноглобулинов G)

Методы исследований и интерпретация результатов

А это самый полезный и заключительный раздел статьи, в котором мы поможем вам разобраться, какие результаты дают разные методы исследований и что они означают.

Для первичного прохождения исследования на антитела, рекомендуется выявление в крови одновременно IgM и IgG антител. Почему? Потому что отдельно результаты по IgM или IgG не всегда могут дать понимание текущей ситуации.

Интерпретация результатов отдельно IgM и IgG

наличие текущей или недавней инфекции

наличие инфекции (ранний период) или отсутствие инфекции

наличие текущей или имевшей место в прошлом инфекции

наличие инфекции (ранний период),

отсутствие инфекции или выздоровление при имевшей место в отдаленном прошлом инфекции

Понятно, что ничего не понятно. Одновременно может быть все. Именно по этой причине мы рекомендуем начинать с теста на выявление в крови одновременно IgM и IgG антител. Любым методом: ИФА (кровь из вены) или ИХА (экспресс тест из пальца). При комбинации этих двух показателей все становится гораздо понятнее.

Комбинации результатов тестов на коронавирус разными методами

Может говорить об острой фазе инфекции COVID-19; не дает информации о наличие или отсутствие у пациента коронавируса; не дает информации, является ли он потенциальным распространителем вируса или нет.

Требуется проведение теста методом ПЦР.

Рекомендована самоизоляция на 2 недели.

Может говорить о поздней фазе инфекции.

Требуется повторить анализ через 2-4 недели.

Может говорить об острой фазе инфекции COVID-19 с выделением вируса и возможностью стать источником потенциального заражения.

Требуется консультация врача и самоизоляция на 2 недели.

Свидетельствует о факте контакта с вирусом в прошлом с формированием специфического иммунного ответа. Вероятность повторного заражения существенно снижена (наличие устойчивого иммунитета к коронавирусу пока не доказано). Вероятность выделения вируса минимальная. Дополнительные обследования при отсутствие симптомов не требуются.

Рекомендовано продолжать соблюдение социального дистанцирования и мер предосторожности, так как на сегодняшний день не накоплено достаточно данных, позволяющих полностью исключить возможность повторного заражения.

Нет данных о контакте этого человека с коронавирусом. При наличие симптомов рекомендовано дополнительно сдать анализ методом ПЦР, а также повторить анализ на IgM и IgG антитела через 2-4 недели

Обзор

Автор

Редакторы

Спонсором приза зрительских симпатий выступила компания BioVitrum.

Что будем исследовать?

Кровь — жидкая соединительная ткань организма, состоящая из плазмы и трех типов форменных элементов: эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов. Лейкоциты, в свою очередь, бывают с гранулами в цитоплазме — это нейтрофилы, эозинофилы и базофилы, — и без гранул — лимфоциты и моноциты. Для того чтобы отличить патологию от нормы, нужно знать, какова концентрация клеток крови, как они выглядят и какую функцию выполняют. Пришло время вспомнить, с кем мы имеем дело.

Рисунок 1. Форменные элементы крови [1–3]

Рисунок 2. На рисунке представлены: концентрации форменных элементов крови в норме; лейкоцитарная формула — процентное соотношение разных видов лейкоцитов в крови; скорость оседания эритроцитов; концентрация гемоглобина; гематокрит в норме [4].

Рисунок 3. Исследование крови: тогда и сейчас

1965 год, 8 утра, в местной поликлинике очередь на анализы. Ваша бабушка сдала кровь, и лаборант относит ряд пробирок на исследование. Проследуем за ним в лабораторию и посмотрим, что там и как. В лаборатории мы видим врачей, склонившихся над микроскопами или работающих с пробирками. Без преувеличения можно сказать, что в молодости вашей бабушки глаз специалиста и микроскоп были основными инструментами для анализа крови. Определяют следующие основные характеристики крови: концентрация каждого типа форменных элементов, количество различных видов лейкоцитов, скорость оседания эритроцитов и концентрация гемоглобина. Помимо этого, специалист рассчитывает гематокрит — отношение объема эритроцитов к общему объему крови [5].

По порядку рас-счи-тайсь!

Первым делом производится подсчет клеток и определяется их концентрация в крови. Подсчет эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов проводят в камере Горяева, названной в честь своего изобретателя. Камера Горяева — стекло с углублением и нанесенной сеткой, куда помещается разведенная в физрастворе капля крови. Для определения количества форменных элементов камеру помещают под микроскоп и считают клетки, находящиеся в больших и маленьких квадратах сетки. Для каждого типа клеток существуют свои правила подсчета и формула, по которой вычисляется их исходная концентрация с учетом разведения крови и количества квадратов сетки [6]. Изменение количества форменных элементов служит важным критерием для диагностики анемии, воспалительных и вирусных заболеваний, нарушений свертывающей системы крови и других патологических состояний [7].

Ты кто такой?

Другой этап исследования крови — дифференцировка лейкоцитов на популяции. Ей уделяется особое внимание: изменение концентрации определенного типа клеток говорит о конкретной патологии. Бактериальная инфекция, вирусы или аллергия? Лейкоциты подскажут, какой поставить диагноз и какое назначить лечение. Различение лейкоцитов доверяют только высококвалифицированному специалисту. Для начала мазок крови фиксируют в спирте и окрашивают по методу Романовского—Гимзы. Состав красителя подобран таким образом, что различные структуры клеток окрашиваются в разные цвета. Окраска зависит от способности компонентов красящей смеси связываться со структурами, содержащими кислоты или основания. Например, гемоглобин и гранулы эозинофилов приобретают красно-розовую окраску за счет эозина, а ядра форменных элементов и базофильные гранулы (имеющие сродство к основаниям) окрашиваются метиленовым синим и азуром в синий цвет [1]. Когда мазок готов, специалист в микроскоп исследует его и по внешнему виду определяет, к какому типу принадлежат разные клетки [8]. Наличие окрашенных гранул, особенности формы ядра, размер клетки — все параметры нужно держать в голове для безошибочной классификации. Обычно подсчитывали сто лейкоцитов с последующим вычислением процентного содержания, а для того чтобы не запутаться, использовали 11-клавишный счетчик [9]. Увидел в микроскоп клетку — нажми на клавишу с обозначением клетки данного типа, и в конце подсчета количество лейкоцитов каждого вида отобразится на экране счетчика [10].

Выпали в осадок

Для определения СОЭ мировое признание получил метод Вестергрена, однако в России также был распространен метод Панченкова. Принцип работы методов одинаков, различаются только типы используемых пробирок. Кровь смешивают с антикоагулянтом — цитратом натрия — и помещают в капилляр — тонкую стеклянную трубочку. Эритроциты оседают на дно пробирки в течение часа, а затем измеряется высота столбика плазмы, образовавшегося сверху [13]. Таким образом получают скорость оседания эритроцитов, выраженную в мм/ч.

На вкус и цвет

Гемоглобин — красный пигмент эритроцитов, связывающий и переносящий кислород и углекислый газ. Снижение содержания гемоглобина в эритроцитах — причина анемий, сопутствующих целому ряду болезней. Концентрацию гемоглобина определяют визуально с помощью гемометра Сали. Прибор выглядит так: по центру — пробирка для анализируемой крови, а по бокам — окрашенные эталонные пробирки. В изучаемую кровь лаборант добавляет соляную кислоту — гемоглобин превращается в гемин бурого цвета. Затем кровь разводят дистиллированной водой, пока ее цвет (по субъективному мнению лаборанта!) не совпадет с цветом эталона. Уровень жидкости, получившийся в центральной пробирке, соответствует концентрации гемоглобина [14].

Как вы уже догадались, 50 лет назад при исследовании крови совершить ошибку было очень просто. Неверное определение вида лейкоцита или сбой при подсчете форменных элементов — все это приводило к неточным результатам анализа. Что было сделано для предотвращения ошибок? Вернемся в наше время и узнаем, как изучают кровь сегодня.

Времена меняются

Изменения видны уже на этапе забора крови: если раньше врач собирал кровь в несколько пробирок с реагентами, стеклянный капилляр и делал на стекле мазок, то сейчас используются совсем небольшие объемы — от 12 до 150 мкл [15] крови достаточно, чтобы исследовать ее по всем параметрам.

Заглянем в современную гематологическую лабораторию. Ого! Все заставлено оборудованием, и лаборанта что-то не видно. Может, отошел приготовить себе кофе? Не успеет! Анализ крови будет готов за минуту, и прибор выдаст результат в виде бумажной ленты с числами и аббревиатурами, за которыми скрываются всевозможные параметры.

Современные гемоанализаторы подразделяются на несколько классов, в зависимости от того, что они умеют делать. Каждый последующий класс — новая ступень эволюции — быстрее, точнее, совершеннее. Использование комбинации технологий творит чудеса: если первые анализаторы могли определять восемь параметров крови и не различали виды лейкоцитов [16], то новейшие приборы способны дифференцировать до семи популяций лейкоцитов [17] и в общей сложности исследовать более 40 характеристик крови.

Перепись населения

Разделяй и властвуй

Дифференцировку лейкоцитов на популяции можно провести с помощью счетчика Культера, однако возникает проблема — различные виды лейкоцитов близки по объему и схожая амплитуда импульсов не всегда позволяет точно установить тип клетки. Как быть? Для решения этой загвоздки подбирают сочетания реагентов, которые изменяют размеры клеток в разной степени так, что становится возможным их разделить [15].

Выпали в осадок: 2.0

Фото на память

Для определения концентрации гемоглобина Международный комитет по стандартизации в гематологии рекомендует метгемоглобин-цианидный метод. Однако сейчас повсеместно применяется иное исследование, не использующее токсичный цианид. Знакомьтесь, SLS-метод. Назван он по основному реагенту — лауритилсульфату натрия. SLS разрушает мембраны эритроцитов, после чего связывается с группами гема и образует стабильные комплексные соединения. Они анализируется фотометрически — через пробу крови пропускают свет лазера. Комплексные соединения поглощают часть света, в результате этого интенсивность выходящего светового потока ослабевает. Затухание измеряют с помощью фотодатчика и полученные данные преобразуют в единицы концентрации гемоглобина [24].

Это не предел

Итак, в процессе нашего экскурса мы посмотрели, как осуществлялся анализ крови во времена наших бабушек и как это делается сегодня. Выяснили, что в настоящее время благодаря переходу на автоматические методы существенно повысилась скорость получения результатов, а главное, их точность! Следует отметить, что современная аппаратная диагностика позволяет решить значительно больше задач, чем это было возможно пару поколений назад, но и это — тоже не предел!

Читайте также: