Бак посев на ротавирус

Добавил пользователь Skiper
Обновлено: 18.09.2024

Заболевания у человека вызывают ротавирусы групп А, В и С. Готовые наборы реагентов имеются для выявления ротавирусов группы А, имеющих наибольшее эпидемиологическое значение. На территориях, где не применяются ротавирусные вакцины, ротавирусы являются наиболее широко распространенной причиной диарейных заболеваний у детей в возрасте до 5 лет.

Показания к обследованию

Все пациенты детского возраста при наличии диарейного синдрома;
взрослые пациенты при наличии диарейного синдрома в период сезонного подъема заболеваемости (в РФ с октября–ноября по май–июнь).

Материал для исследований

Нативные образцы фекалий, собранные в первые 72 ч от начала заболевания. Диагностическая ценность исследования мазков со слизистых верхних дыхательных путей, крови пациентов в острую фазу заболеваний малоинформативно.

Этиологическая лабораторная диагностика включает выявление АГ или РНК ротавирусов группы А в образцах фекалий.

Сравнительная характеристика методов лабораторной диагностики

Наиболее распространенные исследования – выявление АГ ротавирусов группы А в фекалиях пациентов методом ИФА, реже – латекс-агглютинации и ИХА. Меньшее распространение получило выявление РНК ротавирусов группы А с использованием ПЦР. Описанное ранее выявление РНК ротавирусов группы А с использованием электрофоретической детекции сегментированного генома в полиакриламидном геле в настоящее время находит ограниченное применение для научно- исследовательских целей.

Аналитическая чувствительность выявления РНК ротавирусов при использовании ПЦР выше, чем при выявлении их АГ, но с учетом высокой концентрации ротавирусов в фекалиях в первые дни болезни это не приводит к большим различиям в диагностической чувствительности названных исследований. Гораздо большее влияние на результат исследований может оказать низкая специфичность наборов реагентов. На территории РФ используются наборы реагентов, имеющие показатели диагностической специфичности/чувствительности по отношению к референтным тест-системам* 45/62 и 90/60 соответственно. При обследовании пациентов позже 72 ч от начала заболевания, а также лиц со стертой клинической симптоматикой для детекции ротавирусов целесообразно использовать более чувствительный метод – выявление РНК методом ПЦР.

Выделение вируса в культуре клеток в практике клинико-диагностических лабораторий не используется.

Показания к применению

Выявление РНК ротавирусов методом ПЦР экономически целесообразно при применении мультиплексных тест-систем, в рамках комплексной детекции нескольких вирусных/бактериальных патогенов и незаменимо при исследовании материала от пациентов на поздних стадиях заболевания (после 3-го дня болезни).

Особенности интерпретации результатов лабораторных исследований

Среди клинически здоровых лиц носительство ротавирусов (транзиториное и связанное с недавно перенесенным заболеванием) встречается довольно редко (дети – до 1,8%, взрослые – 0,8%). По этой причине, при использовании наборов реагентов, обладающих высокой специфичностью, интерпретация положительных результатов исследований не вызывает затруднений. Случаи сочетанного выявления ротавирусов и других возбудителей ОКИ могут быть связаны с длительностью выделения ротавирусов с фекалиями после перенесенного заболевания (при использовании высокочувствительных тест-систем вирус может быть обнаружен в течение 30–40 дн.).

Диагностика ротавирусной и аденовирусной инфекций

Показания к исследованию:

При подозрении на вирусную природу заболевания.
Обследование лиц, контактировавшим с больными вирусными гастроэнтеритами в очагах инфекций
Контроль эффективности проведенного лечения

Взятие пробы необходимо проводить на ранних этапах, до приема противовирусных препаратов, пока патогенные микроорганизмы находятся в материале в больших количествах. В соответствии с Инструкцией по сбору.

Процедура взятия биоматериала оплачивается отдельно и зависит от типа материала:

дифференциальная диагностика вирусной этиологии кишечной инфекции; обследование контактных с больным ротавирусной/аденовирусной инфекцией; оценка эффективности лечения заболевания; обследование дикретированных групп населения (по требованию эпидемиолога).

Наименование метода

Тип биоматериала/Тип пробирки/Цвет крышки

Преаналитические требования

Подготовка к исследованию:

До сбора кала предварительно помочиться в унитаз. Далее путем естественной дефекации подкладное судно собирают испражнения. Затем кал берется ложечкой в стерильный контейнер с завинчивающейся крышкой в количестве 1–3 г (1 ложка). Материал брать из участков, где обнаруживается слизь и/или кровь. Завинтить емкость крышкой и доставить кал медсестре. Написать на этикетке емкости данные пациента: Ф.И.О., дату и время сбора материала. Исследование проводится 2–3-кратно с интервалом не менее 14 дней/ Сбор материла стерильным ректальным зондом-тампоном транспортной системы Кери-Блер: вводят кончик стерильного зонда-тампона на 2,5—3,0 см за анальный сфинктер. Осторожно вращая тампон вокруг оси, собирают материал с крипт ануса и так же осторожно извлекают тампон. Примечание: следует иметь в виду, что ректальные мазки для получения необходимой информации – материал существенно худший по сравнению с пробой фекалий, даже в случае наличия трудности сбора материала у маленьких детей и стариков.

Условия хранения и транспортировки:

При Т= +18°С. +20°С – 1-2 часа (комнатная температура) При Т= +4°С. +8°С – 4 часа (холодильник)

Примечание:

материал для исследования берут до начала терапии или в интервалах между курсами лечения, но не менее двух недель после ее окончания.

Стабильность аналитов

при температуре +2°С. +8°С - стабилен 8 часов, при температуре +20°С. +25°С - стабилен 2 часа, замораживать запрещено

Клиническая информация о тесте

Комплексная иммунодиагностика (одновременное выявление в исследуемом материале ротавирусов и аденовирусов) позволяет поставить быстрый и точный этиологический диагноз заболевания, назначить адекватную терапию и решить вопрос о дальнейшем распространении инфекции. Ротавирусы — одна из наиболее частых причин диареи у детей. Для заболевания свойственно острое начало, умеренно выраженные симптомы гастроэнтерита или энтерита, частое сочетание симптомов кишечной инфекции с симптомами поражения верхних дыхательных путей. Аденовирусная инфекция вызывается аденовирусами (около 80 разновидностей) и характеризуется поражением кишечника (диарея) и верхних дыхательных путей (ринит, конъюнктивит, фарингит). Источником инфекции является больной или здоровый вирусоноситель.

Интерпретация результатов

Положительный результат: наличие антигенов ротавирусоваденовирусов свидетельствует об этиологическом факторе выделенного возбудителя в клинической картине. Отрицательный результат: отсутствие антигенов ротавирусоваденовирусов - норма

Ротавирусная инфекция - что это?

обильную диарею,
рвоту,
лихорадку,
недомогание,
в редких случаях, неврологические признаки: судороги, энцефалит или энцефалопатию.

Этиология

Передача ротавируса в основном происходит фекально-оральным путем. Кроме того, распространение может происходить через зараженные поверхности, при прикосновениях, иногда через пищу и воду. Ротавирус в больших количествах выделяется со стулом во время эпизодов диареи. Требуется сравнительно небольшое количество вирионов, чтобы вызвать заболевание.

Исследования показали, что почти все дети до достижения возраста 5 лет рано или поздно будут инфицированы ротавирусом. Пожилые люди, особенно те, кто находится в учреждениях длительного проживания, и пациенты любого возраста с ослабленным иммунитетом также подвержены инфекции с ярко проявляющимися симптомами.

В умеренном климате ротавирусные инфекции носят сезонный характер; пик их частоты приходится на зимние месяцы. Некоторые лица могут повторно заразиться ротавирусом несколько раз в течение жизни, скорее всего, разными серотипами. Развитие естественного иммунитета с течением времени снижает восприимчивость к ротавирусу и тяжесть заболевания, поэтому здоровые взрослые редко страдают от каких-либо симптомов.

Патогенез ротавирусной инфекции

Ротавирусы реплицируются в зрелых энтероцитах по всему просвету тонкой кишки. Это приводит к перемещению осмотически активного пищевого комка в толстый кишечник, что впоследствии приводит к нарушению реабсорбции воды в толстом кишечнике что, в свою очередь, вызывает типичную водянистую диарею, наблюдаемую при ротавирусных инфекциях. Другая возможная причина диареи, вызванной ротавирусом, включает усиление перистальтики кишечника. Кроме того, инфекция может привести к снижению кишечной абсорбции натрия и глюкозы и снижению уровней кишечной лактазы, щелочной фосфатазы и активности сахаразы. До двух третей детей с тяжелым ротавирусным гастроэнтеритом обнаруживают присутствие ротавирусного антигена в сыворотке (антигенемия). Клеточный иммунитет, вероятно, играет роль в защите и выздоровлении от инфекции.

Симптомы

Инкубационный период ротавируса составляет от 1 до 3 дней, после чего симптомы появляются внезапно. Они почти идентичны симптомам других желудочно-кишечных инфекций, однако ротавирусные инфекции, как правило, протекают тяжелее. Наиболее частыми симптомами являются лихорадка, диарея и рвота. Среди инфицированных пациентов наблюдается разное проявление симптомов: от кратковременной легкой диареи до тяжелой с лихорадкой и рвотой. Симптомы наиболее выражены у пациентов, первое заражение которых происходит после 3 месяцев жизни.

При ротавирусной инфекции обычно вначале часто возникает рвота, за которой следует водянистый понос. Лихорадка обнаруживается примерно у 33% инфицированных пациентов, причем температура может превышать 39 градусов. Продолжительность болезни составляет от 5 до 7 дней от начала до полного исчезновения симптомов. Результаты обследования, как правило, не позволяют четко дифференцировать ротавирус от других патогенов, которые поражают желудочно-кишечный тракт. Кроме упомянутых выше симптомов, могут наблюдаться спазмы в животе, усталость и признаки обезвоживания, такие как сухость слизистых оболочек, тахикардия, снижение диуреза. Ротавирусная инфекция у взрослых обычно протекает бессимптомно, но может вызывать диарею.

Сухость во рту и горле
Мочеиспускание реже, чем обычно
Головокружение при вставании
У детей отсутствие слез при плаче

Классификация и стадии развития ротавирусной инфекции

В настоящее время классифицировано десять различных видов ротавирусов (A – J). Ротавирусы вида A являются наиболее частой причиной детских инфекций, при этом виды B и C также вызывают меньший, но значительный процент инфекций во всем мире. Шесть штаммов ротавируса вида A обычно составляют> 90% глобально циркулирующих ротавирусов.

Выделяют три формы течения ротавирусной инфекции: легкую, среднюю и тяжелую.

При легкой стадии симптомы выражены неясно и не обнаруживается признаков обезвоживания.
При средней тяжести присутствуют как минимум два из трех типичных симптомов, а также наблюдается обезвоживание 1 или 2 степени.
При тяжелом развитии заболевания характерно полуобморочное состояние, тахикардия, падение давления.

Осложнения ротавирусной инфекции

Ротавирусная инфекция у младенцев и детей младшего возраста может привести к тяжелой диарее, обезвоживанию, электролитному дисбалансу и метаболическому ацидозу. Дети с ослабленным иммунитетом могут страдать от тяжелого или длительного ротавирусного гастроэнтерита и могут иметь признаки возникающих аномалий во многих системах органов, особенно почек и печени. Неврологические осложнения (судороги, преходящее снижение сознания, энцефалопатия) являются наиболее частыми внекишечными проявлениями гастроэнтерита. При отсутствии лечения ротавирус может вызывать тяжелый жидкостный и электролитный дисбаланс. Существуют данные о развитии септического шока и эндокардита в результате заболевания.

Лабораторная диагностика ротавирусной инфекции

Ротавирус клинически неотличим от диарейных заболеваний, вызываемых другими патогенами желудочно-кишечного тракта, такими как норовирусы, кишечные аденовирусы, астровирусы, кишечная палочка и сальмонелла. Для подтверждения ротавируса требуется лабораторное тестирование.

Ротавирус может быть обнаружен в образцах стула у детей с гастроэнтеритом с помощью нескольких методов, включая электронную микроскопию, электрофорез, обнаружение антигенов с помощью иммуноферментного анализа или иммунохроматографии, полимеразную цепную реакцию с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) и выделение вируса. Большое количество ротавирусных частиц выделяется с калом во время острой фазы инфекции. ОТ-ПЦР позволяет генотипировать вирусные изоляты, что приобретает важность в эпидемиологических исследованиях.

Другими показателями гастроэнтерита, вызванного ротавирусом, могут быть присутствие в стуле веществ, снижающих кислотность, и низкий уровень бикарбоната в сыворотке крови. Кроме того, у детей с ротавирусной болезнью наблюдались аномальные уровни ферментов, которые могут быть связаны с рвотой, обезвоживанием или некишечными патологиями, связанными с ротавирусом: например, умеренно повышенные уровни аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (АСТ) в крови иногда могут наблюдаться во время ротавирусной инфекции и могут быть связаны с легким гепатитом, индуцированным ротавирусом.

Пиковое количество вируса в кале наблюдается на 3-5 день после появления симптомов. Вирус выводится из организма инфицированного человека в течение нескольких дней после острой фазы инфекции. Образцы, собранные через 8 или более дней после появления симптомов, могут не содержать достаточного количества антигена ротавируса для получения положительного результата анализа.

Сдать анализ на ротавирус: 10.522 Ротавирус

Профилактика

Лечение ротавирусной инфекции направлено на облегчение симптомов, а также лечение и профилактику связанного с ней обезвоживания. Сегодня в России доступна вакцина от ротавируса РотаТек. Она не является обязательной, однако педиатры настоятельно рекомендуют ее для формирования стойкого иммунитета к разным видам ротавируса. Не стоит забывать и о простых правилах личной гигиены, особенно в местах повышенного риска распространения ротавирусной инфекции. Особенно высока опасность заражения ротавирусом летом на морских курортах, где высокая температура воздуха и большое количество отдыхающих способствуют его быстрому распространению. Во время отдыха необходимо тщательно мыть овощи и фрукты, правильно термически обрабатывать пищу, не хранить долго скоропортящиеся продукты, избегать попадания воды из моря и бассейна в рот и нос, стараться пить чистую воду и мыть руки после посещения пляжа.

Ротавирусная инфекция возникает остро и протекает с симптомами похожими на гастроэнтерит. Болезнь передается от зараженного человека к здоровому фекально-оральным путем. Для того чтобы правильно диагностировать патологию, необходимо сдать анализ кала ротавирус.

При помощи анализа кала на ротавирус можно выявить наличие инфекции в организме, а также обнаружить носителей патогенов, у которых острый симптомы болезни еще не проявились.

Показания к анализу

Исследование кала проводят на четвертый день после появления первых симптомов патологии. В этот период число вирусов в кале достигает своего максимума, далее их количество будет медленно уменьшаться. На девятый день возбудитель или вовсе не обнаруживается, либо его количество несущественно.

Данный вид обследования назначается при следующих симптомах:

Сильных болях в области живота;
Многократно повторяющейся рвоте;
При появлении слабости;
Жалобах пациента на боль в горле и насморк на фоне симптомов отравления;
При кале, который имеет кислый запах;
При поносе;
При потере аппетита;
При повышенной температуре на фоне рвоты и поноса.

Данный анализ очень важен в тех случаях, когда необходимо дифференцировать ротовирусную инфекцию от холеры, которая имеет схожую симптоматику. По схожему сценарию протекают эшерихиоз, сальмонеллез, пищевые отравления, дизентерия.

При этом клинические проявления при данных патологиях отличаются друг от друга незначительно и в некоторых случаях эти нюансы могут быть пропущены. Для этого и проводится анализ кала, чтобы не прошли незамеченными достаточно серьезные патологии.

Подготовка к процедуре

Для сдачи анализа требуется специальная подготовка, которая включает в себя:

Отказ от приема препаратов накануне обследования, крайне нежелателен прием антибиотиков и противовоспалительных, так как они могут исказить картину заболевания.
От забора материала до его предоставления в лабораторию должно пройти не более трех часов.
Кал помещают в специальную стерильную емкость, например, аптечный контейнер. Он не должен соприкасаться с другими предметами.
Для полноценного анализа вполне достаточно двух граммов кала.
В материал не должны попасть микробы с наружных половых органов.
Перед исследованием нельзя использовать свечи и слабительное.
На направлении указываются личные данные пациента.
При этой пробе возможно ненадолго материал поместить в холодильник, но его нахождение в холоде не должно превышать двух часов.
Накануне обследования нельзя употреблять жирную пищу, а также алкоголь.

При ротавирусной инфекции, как правило, изменяется структура каловых масс. В них появляются посторонние примеси в виде крови и слизи. Сам кал при этом значительно светлеет.

Причины ложных результатов

Результат анализа может быть изменен при несоблюдении условий стерильности, при длительном хранении материала. Изменить конечный результат может большое количество алкоголя, выпитого накануне проведения обследования. Повлиять на полученные в ходе изучения фекалий данные может прием препаратов, употребление жирной пищи.

При несоблюдении правил можно получить ложноположительный, ложноотрицательный вариант ответа. Нельзя хранить кал с применением консервантов. Недопустим контакт материала предоставляемого для анализа с ионами металлов. В обоих случаях число возбудителей значительно уменьшается.

Как проводится анализ

Инфекцию определяют с помощью микроскопа. Данный тип вирусов относится к РНК-содержащим. Их выявляют в кале при помощи иммунохроматографического анализа. Этот метод основан на том, что при попадании вируса в организм вырабатывается специальный антиген ротавирусов VP6, его и ищут во время исследования фекальных масс. Также для обнаружения возбудителя может быть проведена полимеразная цепная реакция. В этом случае в кале ищут участки ДНК кода вирусов.

При острой необходимости может быть проведен экспресс-тест, но в повседневной медицинской практике он не используется, так как реагенты для его проведения очень дороги. Его используют в случаях, когда возникает угроза для жизни.

Нормы и расшифровка результата

В случае, когда результат пробы кала отрицателен,это значит, что в кале нет никаких следов вируса. Если следы присутствия вируса совсем незначительны, анализ продолжают считать отрицательным. Анализ кала на ротавирусную инфекцию положительный. В этом случае признается, что пациент либо болен, либо является носителем вируса.

Окончательный диагноз устанавливается не только на основании данных, полученных при изучении каловых масс. Обязательно учитываются изменения, произошедшие в мочи и крови. К примеру, моча при кишечной инфекции приобретает более темные оттенки. В крови наблюдается лейкоцитоз, а при более углубленном обследовании вирус может быть обнаружен в крови. Но в случае крови, антитела появляются очень поздно, когда уже начинается выздоровление.

Данная статья размещена исключительно с целью ознакомления в познавательных целях и не является научным материалом или профессиональным медицинским советом. За диагностикой и лечением обратитесь к врачу.

Читайте также: