Алгоритм посева и интерпретация результатов санитарно микробиологического исследования
Добавил пользователь Алексей Ф. Обновлено: 19.09.2024
В таблице приведен перечень материалов для микробиологического исследования при различной инфекционной патологии. При наличии системных проявлений инфекции посев из очага дополняют посевом крови на стерильность.
Нозология
Основной материал
Мокрота или бронхоальвеолярный лаваж (предпочтительно)
Катетер-ассоциированная инфекция кровотока
Посев крови синхронно из катетера и периферической вены
Посев крови, посев из очага(ов)
Техника взятия и транспортировки материала для исследования
Материал
Техника забора
Примечания
Отделяемое зева
Отделяемое с задней стенки глотки, миндалин собирают с помощью стерильного тампона, не касаясь слизистых щек и языка. Материал необходимо доставить в лабораторию в течение 1 часа, при больших сроках следует использовать транспортные среды.
Не следует полоскать рот или использовать местные дезинфицирующие средства как минимум за 6 часов до забора.
Мокрота
Утреннюю мокроту, выделяющуюся во время приступа кашля, собирают в стерильную чашку Петри. Перед откашливанием больной чистит зубы и полощет рот теплой кипяченой водой. Мокроту следует доставить в лабораторию сразу же, но не позднее чем через 2 часа.
Отделение мокроты можно стимулировать ингаляцией изотонического раствора хлорида натрия или муколитическими средствами.
Бронхиальный секрет
Секрет аспирируют через эндотрахеальный катетер или получают при бронхоскопии
Область промежности и гениталии следует тщательно промыть теплой водой с мылом.
В стерильную посуду собирают 5-10 мл средней порции утренней мочи и доставляют в лабораторию в течение 1 часа.
К забору мочи с помощью катетера прибегают в некоторых случаях при наличии постоянного катетера.
Предпочтительно использовать утреннюю порцию мочи; в противном случае забор следует осуществлять не ранее 4 часов после последнего мочеиспускания.
Кровь
Пробы крови забирают из кубитальной вены после антисептической обработки кожных покровов. При проведении венепункции используют стерильные перчатки, иглу и шприц. Берут 5-10 мл крови (у детей 2 мл). Полученную пробу вносят в специальный флакон с питательной средой
Следует избегать забора крови из катетеров (кроме случаев, когда необходимо исключить катетер-ассоциированную инфекцию).
Кровь забирается до назначения антибиотиков, в крайнем случае – непосредственно перед введением очередной дозы препарата.
Для получения оптимальных результатов следует забирать как минимум 3 пробы в течение 24 часов, а лучше 5-6 раз в течение 48 часов.
Ликвор
После антисептической обработки отбирают 2 мл спинномозговой жидкости. Ликвор вносят над спиртовкой в стерильную пробирку с герметичной крышкой из шприца без иглы. Пробы в лабораторию доставляют немедленно (в течение 5-10 мин).
Не допускать охлаждения проб.
Плевральная, перитонеальная, перикардиальная жидкость
После обработки кожи в области пункции отбирают 5 мл жидкости. Пробы жидкости доставляются в шприце, надев на наконечник стерильную иглу, закрытую колпачком. При большом количестве жидкости можно производить посев непосредственно во флаконы со средой для гемокультур (в объемном соотношении 1:10). Пробы доставляются в лабораторию незамедлительно.
Избегать охлаждения проб до посева.
Раневое отделяемое
Кожу вокруг раны предварительно обрабатывают стерильным тампоном, смоченным в спирте или антисептике. Некротические массы, детрит, гной удаляют стерильной салфеткой. Взятие материала производят стерильным тампоном круговыми вращательными движениями от центра к периферии раны. При наличии дренажей раневое отделяемое аспирируют шприцем. Материал для микроскопии берут отдельным тампоном.
Запрещается доставка материала в открытом виде.
Отделяемое конъюнктивы
Образцы берут кончиком стерильного, предварительно увлажненного ватного тампона вращательными движениями со всей поверхности конъюнктивы.
Для каждого глаза используют отдельный тампон.
Отделяемое из наружного слухового прохода
При поражении наружного уха проводят обработку кожи 70% спиртом с последующим промыванием физиологическим раствором. Отделяемое из очага собирают стерильным ватным тампоном.
Тест на прокальцитонин
В пробирку с EDTA или литиевым гепарином набрать не менее 1 мл венозной крови. Образец стабилен при комнетной температуре в течение 12 часов.
Бактериологический (культуральный) метод исследования заключается в выявлении патогенных микроорганизмов и определении их чувствительности к антибиотикам. Процесс выявления микроорганизмов состоит из нескольких этапов:
- 1. Посев материала на питательные среды.
- 2. Получение чистых культур микроорганизмов.
- 3. Идентификация микроорганизмов.
- 4. Определение чувствительности к антибиотикам, антимикотиков.
Первый и второй этапы бактериологического исследования одинаковы и для классического, и для автоматического бактериологического методов.
Первый этап
Биологический материал высевают на питательные среды. Для каждого вида биологического материала используется определенный набор питательных сред. Это связано с тем, что в разных видах биологического материала находятся различные виды микроорганизмов и необходимо, чтобы выросли максимально все. Используются питательные среды общего назначения - на них растет подавляющее большинство микроорганизмов - кровяной агар, шоколадный агар; дифференциальные среды - позволяют отличать разные виды микроорганизмов - среда Эндо для энтеробактерий, селективные среды - растут только отдельные виды бактерий - энтерококагар для выявления энтерококков, маннитол-солевой агар для обнаружения стафилококков.
Посев делают таким образом, чтобы получить отдельные изолированные колонии.
Посевы помещают в термостат, как правило, на 24 ч при 37С. Некоторые посевы инкубируют при 28С, а некоторые в течение 48 часов. Посевы для выявления грибов рода Candida до 5 суток, мицелиальных грибов - до 30 суток.
Второй этап
Просматривают посевы на питательных средах. По внешнему виду колоний (размер, цвет, форма), определёнными быстрыми тестами и микроскопией определяют возможный вид микроорганизмов и их значение в конкретном случае. Избранные колонии отсеивают на универсальные питательные среды для накопления чистой культуры микроорганизмов. В случае роста колоний только одного вида можно проводить идентификацию и определение чувствительности без этапа накопления чистой культуры.
Третий этап
В зависимости от вида микроорганизма проводят его идентификацию (определение биохимических и антигенных свойств) с помощью фиксированного набора субстратов и сывороток. Субстратами являются углеводы, аминокислоты и другие сложные соединения. По результатам устанавливают род и вид микроорганизма.
Для установления вида некоторых микроорганизмов может потребоваться серологическая идентификация.
Все среды для идентификации и определения чувствительности к антибиотикам готовятся и стерилизуются отдельно. Такая процедура очень трудоемкая, то есть требует много ручного труда и времени, дополнительного оборудования. Таким образом у данного метода низкий уровень стандартизации.
Для идентификации некоторых требовательных клинически значимых видов микроорганизмов необходимы сложные и дорогие субстраты, которые в рутинной практике трудно готовить и использовать. Из-за этого спектр микроорганизмов, которые можно было бы идентифицировать, сужается по сравнению с возможностями автоматического анализатора.
Четвертый этап
Определение чувствительности к антибиотикам проводится с учетом результатов идентификации и вида биологического материала.
При использовании классического бактериологического метода, определение чувствительности к антибиотикам происходит диско-диффузным методом. Этот метод базируется на изучении зон задержки роста микроорганизма вокруг бумажного диска, который пропитан антибиотиком. В зависимости от зон задержки роста определяют устойчивые, умеренно-стойкие и чувствительные штаммы микроорганизмов к тому или иному антибиотику. Данный метод является наиболее распространенным для изучения чувствительности, а также дешевым и простым в исполнении. Однако он также плохо поддается стандартизации, поскольку требует много ручного труда.
Кроме того, согласно рекомендациям международных организаций, которые занимаются совершенствованием существующих методик и разработкой новых (EUCAST - Европейский комитет по определению чувствительности к антибиотикам, CLSI - Институт клинических лабораторных стандартов), чувствительность к некоторым антибиотикам НЕЛЬЗЯ определять диско-диффузным методом, поскольку не определены критерии оценки полученных результатов.
- 1. колистином - кишечная палочка, клебсиелла и другие энтробактерии, синегнойная палочка, ацинетобактер;
- 2. бета-лактамы (пенициллины, цефалоспорины, карбапенемы), гликопептиды (ванкомицин, тейкопланин), даптомицином, фосфомицин – стафилококки;
- 3. даптомицином - стрептококки групп А, В, С и G;
- 4. меропенем - пневмококки при менингитах;
- 5. бета-лактамы (пенициллины, цефалоспорины, карбапенемы) – пневмококки.
Кроме того существуют микроорганизмы, чувствительность которых к антибиотикам вообще нельзя определять диско-диффузным методом: Neisseria gonorrhoea, Neisseria meningitidis, все анаэробные микроорганизмы, Helicobacter pylori, Candida spp., Aspergilus spp. и другие мицелиальные грибы.
В настоящее время проведения микробиологических исследований является важной и актуальной деятельностью в биологии и медицине, так как они позволяют с высокой степенью точности и достоверности подтвердить или опровергнуть факт присутствия в организме человека возбудителей инфекционных заболеваний. Классический бактериологический метод исследования решает задачи выделения чистой культуры возбудителя с его последующей идентификацией. Благодаря микробиологическим методам исследования можно установить возбудителей тех или иных инфекционных заболеваний и подобрать рациональное лечение этого заболевания.
Преимущества автоматического метода
1. Скорость получения результата. Результат наших исследований является максимально быстрым. Уже на 3 сутки Вы получаете название микроорганизма, который был обнаружен в исследуемом образце, а также его чувствительность к антибиотикам. (!) Срок исследований в автоматическом методе продлен до 5 суток за счет длительного роста грибов рода Candida.
2. Точность. Автоматический анализатор дает возможность быстро и очень точно определить какой именно из 400 микроорганизмов есть в биоматериале.
3. Большой спектр антибиотиков к которым определяется чувствительность позволяет врачу назначить наиболее рациональную антибиотикотерапию с учетом характера заболевания и особенностей пациента. К тому же определение чувствительности таким методом является максимально быстрым и точным по сравнению с классическим.
Важно! В результате микробиологического исследования проведенного автоматическим методом антибиотикочувствительность издается с показателем МИК * (минимальная ингибирующая концентрация)
Автор: Д.Уразбаева - Доктор медицинских наук, заместитель исполнительного директора Hak medical по вопросам лаборатории г.Алматы, Виткаускиене А.
В настоящее время остро встает вопрос о качестве медицинской помощи, в том числе диагностического лабораторного анализа. Для достижения достоверного качественного результата нужна стандартизация всех процессов исследования. Имеющаяся в Республике Казахстан нормативная база, касающаяся бактериологической диагностики, далека от совершенства, не учитывает современного развития технологий и не устраивает клинических микробиологов. Поэтому с позиций доказательной медицины актуальным является разработка стандартных процедур подготовки и проведения исследования.
Инфекции мочевого тракта занимают по распространенности одно из ведущих мест, встречаются у людей различного возраста, нередко приводят к осложнениям и хронизации. Эту патологию могут вызывать различные микроорганизмы. В норме моча является стерильной жидкостью, однако в дистальную часть уретры могут попадать бактерии с кожи, из половых органов и кишечника, что осложняет постановку правильного диагноза.
Инфекции мочевыводящих путей могут вызывать стафилококки, энтерококки, энтеробактерии, псевдомонады, микобактерии, микоплазмы, а иногда Candida albicans (1, 2, 3, 4).
Микробиологическое исследование является достаточно сложным, предъявляя строгие требования к сбору, хранению, транспортировке, выполнению исследования.
Пробы мочи могут быть получены с помощью цистоскопии, надлобковой пункции мочевого пузыря или катетеризации. Самым точным является второй способ, который подходит для младенцев и больных, которым нельзя объяснить, каким образом собирать мочу. Катетеризация мочевого пузыря может привести к заносу инфекции, поэтому необходимо избегать этого метода забора материала.
Чаще всего исследованию подлежит средняя порция утренней мочи. Существуют специальные рекомендации забора для избегания загрязнения пробы мочи микрофлорой кожи, уретры или влагалища. Биологический материал собирается в одноразовые контейнеры для мочи, срочно отправляется в лабораторию (в течение 1 часа после сбора).
Основными этапами исследования является:
1. Микроскопия
Фазово-контрастная или световая микроскопия окрашенного по Граму мазка. Определяется количество микроорганизмов, лейкоцитов и клеток плоского эпителия, оцениваются тинкториальные свойства микроорганизмов.
Ориентировочное соответствие первичной микроскопии и бактериурии (при использовании увеличения в 1000 раз):
1-3 микроорганизма в поле зрения – 105 микр/мл;
10-30 микроорганизмов в поле зрения – 106 микр/мл;
> 30 микроорганизмов в поле зрения - >106 микр/мл. Подчеркнем, что в мазке мочи здорового человека допускается наличие лишь нескольких бактериальных клеток или лейкоцитов. В мазках мочи, взятой у женщин, большое число слущенного эпителия независимо от того, обнаружены или не обнаружены бактерии, свидетельствует о контаминации мочи влагалищной микрофлорой, в связи с чем необходимо повторение анализа (1).
2. Бактериологическое исследование
Для рассева используются стандартные стерильные петли из полистирола 1 мкл и 10 мкл. Среды выбираются, исходя из результатов микроскопии.
Техника рассева мочи:
1. Петлю 1 мкл погрузить в контейнер с мочой, перемешать и одну каплю поместить на чашку Петри с 5% кровяным агаром, прочертив ею весь диаметр чашки.
2. Поперечными движениями рассеять мочу по всей чашке.
3. Повторно взять каплю мочи и тем же методом рассеять ее на половину чашки Петри с агаром Endo или MacConkey.
4. Вторую половину среды с агаром Endo или MacConkey рассеять петлей 10 мкл.
Инкубировать при температуре 35°С.
Если результаты посева не соответствуют результатом первичной микроскопии или моча взята методом инвазивных процедур, инкубация продлевается до 48 часов.
Государственное бюджетное учреждение здравоохранения
Тюменской области "Областная клиническая больница №1"
Нам доверяют самое ценное!
Отбор материала для микробиологического исследования (требования на преаналитическом этапе).
24 Августа 2016
Что такое микробиологическая диагностика (исследования)?
Цель микробиологических исследований - установить наличие или отсутствие возбудителя (бактерии, грибов, вирусов и др.) в организме пациента при гнойно-воспалительных инфекциях и на объектах окружающей среды; определить их количество (по показаниям). Есть ли агенты воспаления и сколько их?
Несмотря на то, что проведение микробиологических исследований относится к компетенции бактериологов (микробиологов), каждый врач, имеющий дело с инфекционными заболеваниями, должен знать, как и когда необходимо отбирать материал для исследований, на какие исследования его направлять и как интерпретировать полученные результаты.
Отбор материала для микробиологического исследования (требования на преаналитическом этапе).
Для проведения качественного микробиологического исследования важно правильно и грамотно выбрать материал для исследования.
При поражениях отдельных органов и систем целесообразно отбирать материал соответствующей локализации с учётом клинической картины заболевания и доступности материала для исследования.
Так, при лихорадке неясного генеза первоначально проводят посев крови; затем, при появлении симптомов более конкретных проявлений, например пневмонии, проводят взятие мокроты.
Выбор материала для микробиологического исследования должен соответствовать характеру инфекционного процесса. Так, например, при установлении возбудителя пневмонии материалом должна быть мокрота, а не слюна; при раневых инфекциях - отделяемое из глубины раны, а не с её поверхности; при инфекциях мочевыводящих путей – накопительная (ночная) средняя порция мочи.
Образцы материала для микробиологического исследования следует забирать до назначения антимикробной терапии, с соблюдением правил асептики для предупреждения загрязнения исследуемого материала в стерильные пробоотборники.
Читайте также: