Посевы проб пищевых продуктов в среде кесслер инкубируют при температуре
Обновлено: 07.07.2024
1.1. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов, осуществляющих функции по контролю и надзору в сфере обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия населения, организаций и учреждений Роспотребнадзора, лечебно-профилактических и других организаций независимо от организационно-правовой формы и формы собственности.
1.2. Методические указания устанавливают методы санитарно-бактериологических исследований в учреждениях здравоохранения, других организациях лечебного профиля. Объектами санитарно-бактериологических исследований, на которые распространяются настоящие методические указания, являются:
· объекты окружающей среды, в т.ч. изделия медицинского назначения, зонды, катетеры, бужи, резиновые перчатки и другие изделия из резин и металлов, шовный материал, подготовленный к использованию, и прочее, спецодежда;
1.3. Номенклатура, кратность и объем санитарно-бактериологических исследований устанавливается действующими нормативно-методическими документами с учетом санитарно-эпидемиологической обстановки.
1.4. Для санитарно-бактериологических исследований объектов окружающей среды, воздуха и контроля стерильности изделий медицинского назначения в учреждениях здравоохранения и других организациях лечебного профиля могут быть использованы питательные среды лабораторного и промышленного приготовления, расходные материалы, биологические препараты, указанные в настоящих методических указаниях. Применение других коммерческих питательных сред (расходных материалов, биологических препаратов) допускается при наличии методик исследования, утвержденных и разрешенных к применению в установленном порядке.
3.1. Исследования бактериальной обсемененности воздушной среды
3.1.1. Исследования бактериальной обсемененности воздушной среды проводят в помещениях лечебных организаций в зависимости от их функционального назначения на санитарно-микробиологические показатели:
общее количество микроорганизмов в 1 м 3 воздуха (КОЕ/м 3 );
количество колоний S . aureus в 1 м 3 воздуха (КОЕ/м 3 );
количество плесневых и дрожжевых грибов в 1 м 3 воздуха.
3.1.2. Пробы воздуха отбирают аспирационным методом с помощью аппаратов и устройств, разрешенных к применению в установленном порядке.
Количество пропущенного воздуха должно составлять 100 дм 3 для определения общего количества микроорганизмов, дрожжевых и плесневых грибов и 250 дм 3 для определения S. aureus . Исследование воздуха седиментационным методом не допускается.
3.1.3. Для определения общего количества микроорганизмов в 1 м 3 воздуха забор проб проводят на питательный агар типа МПА, СПА, ГРМ-агар и другие, приготовленные согласно инструкций по применению. Посевы инкубируют при температуре 37 °С в течение (48 ± 2) ч, подсчитывают количество выросших колоний и производят перерасчет на 1 м 3 воздуха. При наличии роста колоний дрожжевых и плесневых грибов, их подсчитывают и делают пересчет на 1 м 3 воздуха. В протоколе количество дрожжевых и плесневых грибов указывают отдельно.
Примечание : При переносе аппаратов и устройств для отбора проб воздуха из одного помещения в другое их поверхность обрабатывают раствором дезинфицирующего средства. Столик, внутренние стыки, крышку и прочие части прибора с внутренней и внешней стороны протирают спиртом (70 %).
Для определения наличия S. aureus забор проб проводят на желточно-солевые среды на основе сред: элективно-солевой агар, стафилококк-агар, маннитолагар или среда № 10 по ГФ XII, агар Байд-Паркер. Чашки с посевами инкубируют в термостате при 37 °С (48 ± 2) ч.
2. Второй-третий день.
На вышеуказанных средах стафилококк растет в виде круглых, блестящих, маслянистых, выпуклых, пигментированных колоний. Следует учитывать, что стафилококки, выделенные от человека, дают положительную лецитовителлазную реакцию в 60 - 70 % случаев. Отвивка на скошенный агар для дальнейшего исследования не менее 2 колоний, подозрительных на стафилококк. Для исследования отвивают прежде всего колонии, дающие положительную лецитовителлазную реакцию (образование радужного венчика). При отсутствии на чашках таких колоний дальнейшему исследованию подвергаются пигментированные колонии, схожие по морфологии со стафилококком. При одновременном наличии на чашках колоний стафилококка, отличающихся по пигменту, следует отвивать не менее двух колоний различного вида. Пробирки с посевом помещают в термостат при 37 °С на (24 ± 2) ч.
3. Четвертый день.
После инкубации у выделенных штаммов проверяют морфологию, тинкториальные свойства (окраска по Граму) и наличие плазмокоагулирующей активности в реакции плазмокоагуляции (РПК).
Если культура обладает только плазмокоагулирующей или только лецитовителлазной активностью, то для окончательного ответа требуется учитывать другие признаки, позволяющие определить принадлежность штамма к виду S. aureus (ферментация маннита, гемолитическая активность).
При необходимости, после выделения чистой культуры, проводят определение чувствительности/устойчивости к антибиотикам, дезинфицирующим средствам, бактериофагам.
Учет результатов дополнительных тестов. Окончательная выдача ответа.
3.2. Исследования микробной обсемененности объектов внешней среды
3.2.1. Бактериологическое исследование микробной обсемененности объектов внешней среды предусматривает определение стафилококков, бактерий группы кишечных палочек, сальмонелл, синегнойной палочки. Отбор проб с поверхностей различных объектов осуществляют методом смывов. По эпидемиологическим показаниям номенклатура исследований микробной обсемененности объектов внешней среды может быть расширена.
3.2.2. Взятие смывов производят стерильными ватными тампонами, вмонтированными в пробирки. Для увлажнения тампонов в пробирки наливают по 2,0 мл стерильной 0,1 % пептонной воды с добавлением нейтрализаторов дезинфицирующих средств.
3.2.3. При контроле мелких предметов смывы забирают с поверхности всего предмета. При контроле предметов с большой поверхностью смывы проводят в нескольких местах исследуемого предмета общей площадью примерно 100 см 2 .
3.2.4. Для обнаружения стафилококков делают высев 0,2 - 0,3 мл смывной жидкости в пробирку с 5,0 мл 6,5 % солевого бульона. Засеянные пробирки инкубируют при 37 °С в течение (24 ± 2) ч, после чего делают высев на желточно-солевые среды на основе сред: элективно-солевой агар, стафилококкагар, манитолагар или среда № 10 по ГФ XII, агар Байд-Паркер. Дальнейшие исследования выделенных культур стафилококков проводят по п. 3.1.4.
3.2.5. Для обнаружения бактерий группы кишечных палочек делают высев 0,2 - 0,3 мл смывной жидкости в пробирку с 5,0 мл среды Кесслера. Засеянные пробирки инкубируют при 37 °С в течение (24 ± 2) ч и делают пересев на среду Эндо. Выросшие колонии на среде Эндо подвергают дальнейшему изучению для установления их возможной принадлежности к патогенным энтеробактериям.
3.2.6. Для обнаружения сальмонелл делают высев 0,2 - 0,3 мл смывной жидкости в пробирку с 5,0 мл одной из сред обогащения (магниевая, селенитовая или среда Раппапорта-Вассилиадиса). Засеянные пробирки инкубируют при 37 °С в течение 18 - 20 ч, делают пересев на среду Эндо и висмут-сульфит агар с последующим отбором подозрительных колоний и их идентификацией.
3.2.7. Для обнаружения синегнойной палочки делают высев на среду № 8 (бульон для накопления стафилококков и синегнойной палочки) и среду № 9 (для определения синегнойной палочки по наличию пигмента пиоцианина) или питательные среды в соответствии с ГФ XII. Колонии, подозрительные на синегнойную палочку (колонии с ровными или слегка волнистыми краями, гладкой блестящей поверхностью с характерным запахом и пигментом, однако, следует учесть, что запах и пигмент могут сильно варьировать или вообще отсутствовать), пересевают на скошенный агар.
P. aeruginosa - грамотрицательная, подвижная, оксидазоположительная палочка, окисляющая, но не ферментирующая глюкозу, дающая рост при 42 °С.
3.2.8. Ориентировочный перечень объектов, подлежащих санитарно-бактериологическому контролю методом смывов:
А. Операционный блок:
· маска наркозного аппарата;
· тройник наркозного аппарата;
· емкости и приспособления для мытья и обработки рук;
· фартуки (клеенчатые или полиэтиленовые);
· шланг вакуум-отсоса, внутренняя часть емкости;
· шланг кислородной подводки;
· стоики для введения лекарственных средств и вспомогательные приспособления;
· ручка бестеневой лампы;
· руки персонала, участвующего в операции;
· медицинские изделия многократного применения;
Б. Послеоперационные палаты, отделения, палаты реанимации и интенсивной терапии:
· кровать и постельное белье, подготовленные для больного;
· полотенца и приспособления для обработки рук персонала;
· шланг кислородной подводки;
· запасная наркозная аппаратура (набор реанимационной укладки);
· шланг вакуум-отсоса, внутренняя часть емкости;
· внутренняя поверхность шкафов и холодильников (для хранения лекарственных средств, градусников);
· медицинские изделия многоразового использования;
В. Перевязочные, процедурные:
· кушетка и приспособления для перевязок;
· полотенца и приспособления для обработки рук персонала;
· мебель (медицинские столы, тумбочки);
· оборудование для химической стерилизации (стойки, чехлы для хранения стерильных эндоскопов, емкости с крышкой для химической стерилизации);
· гибкая часть эндоскопов и оптика;
· внутренняя поверхность шкафов и холодильников для хранения лекарственных препаратов и изделий медицинского назначения;
· внутренняя и наружная поверхности бактерицидных камер для хранения простерилизованных изделий медицинского назначения.
4.1. Отбор проб на стерильность производит специалист после прохождения инструктажа по технике выполнения отбора проб для микробиологического анализа.
4.2. Все изделия медицинского назначения, подлежащие контролю, направляют в микробиологическую лабораторию в упаковке, в которой осуществляли их стерилизацию, дополнительно заворачивают в стерильную простыню или помещают в стерильную наволочку.
При стерилизации изделий в неупакованном виде в отделении отбор проб проводят в стерильные емкости, соблюдая правила асептики.
Контроль стерильности проводят путем прямого посева (погружения) изделий целиком (при их небольших размерах) или отдельных деталей (разъемные изделия) и фрагментов (отрезанные стерильными ножницами кусочки шовного, перевязочного материала и т.п.) в питательные среды. При посеве изделия или его части непосредственно в питательную среду количество среды в пробирке (колбе, флаконе и т.д.) должно быть достаточным для полного погружения изделия или его части.
При проверке стерильности более крупных изделий проводят отбор проб методом смывов с различных участков поверхности изделий: с помощью стерильного пинцета (корнцанга) каждый участок тщательно протирают марлевой салфеткой (размер салфетки 5 ´ 5 см), увлажненной стерильной питьевой водой. Каждую салфетку помещают в отдельную пробирку (колбу, флакон) с питательной средой.
У изделий, имеющих функциональные каналы, рабочий конец опускают в пробирку с питательной средой и с помощью стерильного шприца или пипетки 1 - 2 раза промывают канал этой средой.
Контроль стерильности проводят путем прямого посева (погружения) изделий целиком (при их небольших размерах) или отдельных деталей (разъемные изделия) и фрагментов (отрезанные стерильными ножницами кусочки шовного, перевязочного материала и т.п.) в питательные среды.
4.3. Для контроля стерильности используют следующие питательные среды: тиогликолевую, бульон Сабуро (с ингибитором посторонней микрофлоры - теллурит калия или левомицетин).
При контроле изделий каждого наименования обязателен одновременный посев на обе указанные питательные среды.
На каждый вид исследуемого материала используют по две пробирки каждой среды.
При посеве изделия или его части непосредственно в питательную среду количество среды в пробирке (колбе, флаконе и т.д.) должно быть достаточным для полного погружения изделия или его части.
4.4. Посевы в тиогликолевой среде выдерживают в термостате при температуре 32 °С. Посевы в бульоне Сабуро - при температуре 20 - 22 °С в течение 14 суток при контроле изделий, простерилизованных растворами химических средств и газовым методом, в течение 7 суток - простерилизованных физическими методами (паровой, воздушный).
4.5. Учет результатов исследования на стерильность.
При отсутствии роста микроорганизмов во всех пробирках (колбах, флаконах) делают заключение о стерильности изделий. Материал не стерилен при росте микрофлоры.
5.1. Смывы с рук персонала производят стерильными марлевыми салфетками размером 5 ´ 5 см, смоченной в нейтрализаторе. Марлевой салфеткой тщательно протирают ладони, околоногтевые и межпальцевые пространства обеих рук. После отбора проб марлевую салфетку помещают в широкогорлые пробирки или колбы с физиологическим раствором и стеклянными бусами, встряхивают в течение 10 мин. Жидкость засевают глубинным способом на 2 чашки Петри с мясопептонным агаром (по 0,5 мл) и в 2 пробирки с 0,5 %-м сахарным бульоном (по 1 мл). Посевы инкубируют при температуре 37 °С в течение 48 ч.
5.2. Учет результатов.
Отсутствие роста патогенных и условно патогенных бактерий.
6.1. Требования к помещению для посева на стерильность
6.1.1. Контроль стерильности изделий проводят с соблюдением асептических условий, исключающих возможность вторичной контаминации изделий микроорганизмами.
Контроль стерильности изделий проводят в боксах с ламинарным потоком воздуха. При отсутствии боксов с ламинарным потоком воздуха контроль стерильности проводят в боксированных помещениях (бокс с предбоксником).
6.1.2. В боксированном помещении поверхность пола, стен, потолка, мебели должна быть гладкой, без щелей, устойчивой к многократному действию моющих и дезинфицирующих средств. Полы должны быть нескользкими, иметь гидроизоляцию. Поверхность столов не должна иметь швов и трещин.
6.1.3. Боксы оборудуют приточно-вытяжной вентиляцией (с преобладанием притока над вытяжкой) с подачей в них воздуха через бактериальные фильтры. В боксе и предбокснике устанавливают бактерицидные облучатели в соответствии с нормами, предусмотренными действующими нормативно-методическими документами.
6.2. Подготовка бокса, инструментов и персонала к работе
6.2.1. Перед проведением работы поверхности в помещениях бокса и предбоксника (стены, пол, оборудование и др.), а также внутренние поверхности бокса с ламинарным потоком воздуха обрабатывают раствором дезинфицирующего средства, разрешенного к применению в установленном порядке.
6.2.2. Через 45 - 60 мин после обработки в бокс вносят все необходимые для работы материалы и инструменты, кроме образцов изделий.
6.2.3. Перед началом работ бокс с ламинарным потоком воздуха включают на время, достаточное для обеспечения полного обмена воздуха, а затем помещают в него необходимый для работы материал.
6.2.4. В боксе и предбокснике перед работой включают бактерицидные облучатели.
6.2.5. Инструменты, посуду и спецодежду, используемые в работе, предварительно стерилизуют при следующем режиме: температура 32 °С, время стерилизационной выдержки - 90 мин; изделия из резин (перчатки и т.д.) - при температуре 120 °С в течение 60 мин.
6.2.6. Перед посевом исследуемый материал вносят в предбоксник, предварительно снимая наружную мягкую упаковку. В предбокснике пакеты, биксы протирают снаружи с помощью стерильного пинцета (корнцанга) стерильной салфеткой (ватным тампоном), обильно смоченной раствором дезинфицирующего средства, обладающего спороцидными свойствами, разрешенного к применению в установленном порядке, и оставляют на 30 мин. При поступлении изделий, упакованных в два слоя (бумага, перманганаты, ткани), первый слой снимают в предбокснике и изделия во внутренней упаковке сразу переносят в бокс.
6.2.7. Перед входом в бокс работники лаборатории тщательно моют руки теплой водой с мылом, вытирают их стерильным полотенцем (салфеткой), надевают в предбокснике бахилы, стерильные халаты, 4-слойные маски, шапочки и стерильные перчатки.
6.2.8. В процессе посева в боксе проверяют обсемененность воздуха. Для этого на рабочий стол ставят 2 чашки с мясопептонным агаром (МПА), открывая их на 15 мин, затем чашки помещают в термостат при температуре 37 °С на (48 ± 2) ч. Допускается рост не более трех колоний неспорообразующих сапрофитов.
Для контроля стерильности питательные среды после изготовления и стерилизации помещают в термостат при температуре 37 °С на (48 ± 2) ч.
Бульон Сабуро контролируют полностью (всю приготовленную серию пробирок или колб).
Для тиогликолевой среды термостатируют 1 % от общего числа приготовленных пробирок или колб каждой серии. Для проведения исследований материала на стерильность эту часть сред не используют.
При исследовании воды централизованного водоснабжения учету подлежат индикаторные микроорганизмы, КРОМЕ:
а) общие колиформные бактерии
б) клостридии
в) энтерококки (+)
г) термотолерантные колиформные бактерии
д) коли-фаги
В качестве среды накопления для выявления колиформных бактерий в питьевой воде используют:
а) 1% пептонную воду
б) селенитовый бульон
в) глюкозопептонную среду (+)
г) магниевую среду
д) глицериновую среду
Оптимальные условия инкубирования посевов воды для выявления термотолерантных колиформных бактерий:
а) 24 часа при 37 градусов С
б) 48 часов при 37 градусов С
в) 48 часов при 25 градусов С
г) 24 часа при 44 градусов С (+)
д) 48 часов при 44 градусов С
Для определения спор сульфитредуцирующих клостридий в консервах необходима пробоподготовка:
а) прогрев при 45 градусов С 20 минут
б) прогрев при 80 градусов С 20 минут (+)
в) прогрев при 37 градусов С 30 минут
г) прогрев при 80 градусов С 60 минут
д) прогрев при 100 градусов С 30 минут
Оптимальные условия доставки в лабораторию проб питьевой воды:
а) 10 часов при температуре +10-15 градусов С
б) 6 часов при температуре +4-10 градусов С (+)
в) 12 часов при температуре +4-10 градусов С
г) 6 часов без охлаждения
д) 24 часа без охлаждения
Подготовка среды Вильсона-Блер к посеву включает:
а) прогревание в течение 40 минут при 80 градусов С
б) прогревание в течение 40 минут при 80 градусов С с последующим резким охлаждением (+)
в) нагрев до 44 градусов С в течение 1 часа
г) прогревание в течение суток при 37 градусов С
д) охлаждение среды в течение 1 часа
Основную бактериальную обсемененность пищевых продуктов обеспечивают:
а) специфическая и неспецифическая микрофлора (+)
б) молочнокислые бактерии
в) дрожжи
г) энтеробактерии
д) споры клостридий
Основным отличительным признаком Рseudomonas aеruginosа является:
а) полупрозрачные или белые колонии
б) отрицательная окраска по Граму
в) наличие жгутиков
г) наличие сине-зеленого пигмента (+)
д) запах земляничного мыла
Clostridium perfringens образует в среде Вильсона-Блера колонии:
а) белого цвета
б) желтого цвета
в) черного цвета (+)
г) бесцветные
д) разноцветные
Энтерококки определяют в питьевой воде:
а) постоянно
б) только в воде нецентрализованного водоснабжения
в) только в воде централизованного водоснабжения
г) только в воде из подземных водоисточников
д) любого происхождения при подозрении на фекальное загрязнение (+)
Микробиологический контроль стерильности проводится медицинскими учреждениями:
а) 1 раз в месяц
б) 2 раза в месяц
в) 1 раз в 10 дней (+)
г) 1 раз в неделю
д) ежедневно
Время инкубирования посевов питьевой воды на лактозопептонной среде:
а) 24-48 часов (+)
б) 24 часа
в) 72 часа
г) 6-8 часов
д) 18 часов
При бактериологическом анализе питьевой воды на колиформные бактерии засевают объемы:
а) 2 объема по 200 мл воды
б) 3 объема по 100 мл воды (+)
в) 5 объемов по 50 мл воды
г) 1 объем 50 мл
д) 2 объема по 100 мл воды
Микроорганизмы, свидетельствующие об антропогенном загрязнении прибрежной морской воды, КРОМЕ:
а) колиформные бактерии
б) энтерококки
в) актиномицеты (+)
г) золотистый стафилококк
д) сальмонеллы
При исследовании мороженого срок термостатирования посевов составляет:
а) 72 часа
б) 48 часов (+)
в) 24 часа
г) 12 часов
Основным индикатором санитарного неблагополучия на пищевых предприятиях являются:
а) колиформные бактерии (+)
б) стафилококки
в) грибы и дрожжи
г) стафилококки
д) стрептококки
Для расчета наиболее вероятного числа бактерий в 100 мл питьевой воды засевают объемы:
а) 2 по 100 мл, 2 по 10 мл, 2 по 1 мл
б) 4 по 100 мл, 4 по 10 мл, 4 по 1 мл
в) 5 по 50 мл, 5 по 10 мл, 5 по 1 мл
г) 3 по 100 мл, 3 по 10 мл, 3 по 1 мл (+)
д) 3 по 200 мл, 3 по 20 мл, 3 по 2 мл
Микроорганизмы, относящиеся к клостридиям, представляют собой:
а) грамположительные неспорообразующие аэробные палочки
б) грамотрицательные спорообразующие анаэробные палочки
в) грамположительные неспорообразующие анаэробные палочки
г) грамположительные спорообразующие аэробные палочки
д) грамположительные спорообразующие анаэробные палочки (+)
Оптимальные условия инкубирования посевов воды для выявления общих колиформных бактерий:
а) 24 часа при 37 градусов С (+)
б) 48 часов при 37 градусов С
в) 48 часов при 25 градусов С
г) 24 часа при 44 градусов С
д) 48 часов при 44 градусов С
Методом микробиологического исследования воздуха является:
а) аспирационный (+)
б) титрационный
в) фильтрационный
г) посев в полужидкий агар
д) газонный метод
Для выделения грибов и дрожжей используют среду:
а) Вильсона - Блера
б) полужидкий агар
в) Сабуро (+)
г) Эндо
д) кровяной агар
Исследование консервов на термотолерантные бактерии проводят при температуре:
а) 37 градусов С
б) 44 градусов С (+)
в) 60 градусов С
г) 22 градусов С
д) 50 градусов С
При исследовании на стерильность медицинского инструментария большого размера:
а) берут смывы тампоном, увлажненным соответствующей питательной средой
б) изделия заливают питательной средой, а затем отсасывают пипеткой
в) берут смыв тампоном с физ. раствором (+)
г) смывы не берут
д) отправляют инструментарий в бак. лабораторию
Посевы на колифаги инкубируют в следующих условиях:
а) 24 часа при 37 градусов С (+)
б) 48 часов при 37 градусов С
в) 48 часов при 25 градусов С
г) 24 часа при 44 градусов С
д) 48 часов при 44 градусов С
Результат анализа питьевой воды на клостридии выражают в следующих единицах:
а) БОЕ в 20 мл воды
б) БОЕ в 100 мл воды
в) ОМЧ в 20 мл воды
г) КОЕ в 20 мл воды (+)
д) КОЕ в 100 мл воды
Методом мембранных фильтров колиформные бактерии выделяют на среде:
а) Вильсона - Блера
б) полужидкий агар
в) Сабуро
г) Эндо (+)
д) кровяной агар
Для выявления анаэробной микрофлоры в консервах применяют питательную среду:
а) Китт-Тароцци (+)
б) тиогликолевая
в) мясо-пептонный бульон
г) Сабуро
д) Эндо
Объектами исследования при бактериологическом контроле в медицинских учреждениях являются:
а) воздушная среда
б) шовный материал
в) хирургический инструментарий
г) стерильный перевязочный материал
д) все перечисленное (+)
Щелочно-полимиксиновая среда используется для обнаружения:
а) сальмонелл
б) энтерококков (+)
в) клостридий
г) колиформных бактерий
д) стафилококков
При исследовании питьевой воды на колиформные бактерии на среде Эндо учитывают колонии:
а) желтые
б) бесцветные
в) роящиеся
г) розовые
д) темно-красные с металлическим блеском (+)
Рост протеев при посеве по Шукевичу обнаруживают в виде:
а) ползучей пленки на поверхности МПА (+)
б) помутнения в конденсате МПА
в) выпуклых белых колоний
г) мелких прозрачных колоний
д) матовой сморщенной пленки
Критериями оценки качества питьевой воды являются все показатели, КРОМЕ:
а) МАФАМ
б) общие колиформные бактерии
в) золотистый стафилококк (+)
г) термотолерантные колиформные бактерии
д) клостридии
Основные группы микроорганизмов, подлежащих учету при исследовании воды плавательных бассейнов:
а) общие колиформные бактерии, клостридии
б) общие колиформные бактерии, золотистый стафилококк (+)
в) золотистый стафилококк, коли-фаги
г) клостридии, золотистый стафилококк
д) общие колиформные бактерии, золотистый стафилококк, клостридии
Минимальная партия изделий одного наименования для исследования на стерильность:
а) 1 штука
б) 2 штуки
в) 3 штуки (+)
г) 5 штук
д) 10 штук
Бактериологическое исследование воздушной среды в медицинских учреждениях предусматривает определение:
а) количество стрептококков и стафилококков
б) общее количество бактерий и золотистый стафилококк (+)
в) энтеропатогенные бактерии
г) энтерококки
д) синегнойная палочка
Аутохтонная микрофлора воды поверхности водоемов представлена всеми группами бактерий, КРОМЕ:
а) бациллы
б) извитые формы
в) микроскопические водоросли
г) патогенные энтеробактерии (+)
д) грибки и актиномицеты
Санитарно-бактериологическое исследование вареных колбас предусматривает определение следующих бактерий:
а) колиформы
б) золотистый стафилококк
в) колиформы, золотистый стафилококк
г) колиформы, клостридии
д) колиформы, золотистый стафилококк, клостридии (+)
Режим термостатирования при исследовании на стерильность на среде Сабуро:
а) 20-22 градусов С - 7 сут
б) 35-37 градусов С - 7 сут
в) 20-22 градусов С - 14 сут (+)
г) 35-37 градусов С - 14 сут
д) 44 градусов С - 7 сут
Для выделения Bacillus cereus в пищевых продуктах используют среду:
а) солевой полимиксиновый агар (+)
б) висмут-сульфит агар
в) шоколадный агар
г) щелочно-полимиксиновую среду
д) щелочной агар
Оптимальные условия инкубирования посевов на золотистый стафилококк:
а) 48 часов при 37 градусов С
б) 24 часа при 37 градусов С (+)
в) 48 часов при 25 градусов С
г) 24 часа при 44 градусов С
д) 48 часов при 44 градусов С
Для определения в консервах мезофильных аэробов используют жидкую питательную среду:
а) лактозопептонная среда
б) желчный бульон
в) селенитовый бульон
г) бульон Сабуро
д) мясо-пептонный бульон с 1% глюкозы (+)
Объемы питьевой воды, засеваемые для выявления спор сульфит-редуцирующих клостридий:
а) 1 мл
б) 10 мл
в) 20 мл (+)
г) 50 мл
д) 100 мл
Золотистый стафилококк является индикаторным микроорганизмом для:
а) питьевой воды
б) воды бассейнов (+)
в) воды природных водоемов
г) пива и кваса
д) минеральной воды
Для определения присутствия дрожжей, вызывающих порчу продуктов, используют среду:
а) мясо-пептонный агар
б) Сабуро (+)
в) мясо-пептонный бульон
г) магниевая
д) глюкозопептонная
При посеве по Шукевичу материал вносят:
а) на поверхность МПА в чашке Петри
б) на поверхность скошенного МПА
в) в столбик скошенного МПА.
г) в конденсат скошенного МПА (+)
д) в глубину МПА в чашке Петри
Жидкие пищевые продукты, явившиеся причиной пищевого отравления, засевают:
а) без разведения (+)
б) разведенными 1:2
в) разведенными 1:5
г) разведенными 1:10
д) разведенными 1:100
Условия инкубирования посевов по Шукевичу:
а) 37 градусов С - 48 часов (+)
б) 22 градусов С - 18 часов
в) 43 градусов С - 24 часа
г) 43 градусов С - 48 часов
д) 37 градусов С - 24 часа
При исследовании бочкового пива, кваса не определяют:
а) общие колиформные бактерии
б) коли-титр
в) общая обсемененность (+)
г) дрожжевые и плесневые грибы
д) термотолерантные колиформные бактерии
Запах земляничного мыла является специфичным для:
а) колиформных бактерий
б) протея
в) стафилококка
г) синегнойной палочки (+)
д) лактобацилл
Средой накопления для выявления сальмонелл в воде водоемов является:
а) 1% пептонная вода
б) среда Кесслер
в) магниевая среда (+)
г) селенитовая среда
д) глюкозопептонная среда
Для определения коли-титра в пищевых продуктах используется среда накопления:
а) Кесслер (+)
б) селенитовая
в) мясо-пептонный бульон
г) магниевая
д) глюкозопептонная
Для определения МАФАМ подсчитывают колонии следующего варианта:
а) мелкие колонии на поверхности агара
б) крупные колонии на поверхности агара
в) мелкие колонии в глубине агара
г) крупные колонии в глубине агара
д) все колонии на поверхности и в глубине агара (+)
Пробы, доставляемые на исследование по поводу пищевого отравления:
а) исследуются в любом количестве (+)
б) исследуется 200 г продукта
в) исследуется 500 г продукта
г) исследуется 50 г продукта
д) исследуется 100 г продукта
При определении коли-фагов в воде для освобождения от бактерий применяют:
а) хлорамин
б) теллурит калия
в) хлороформ (+)
г) ультрафильтрацию
д) центрифугирование
Для выделения Васillus cereus применяется среда:
а) Донована (+)
б) Плоскирева
в) Серова
г) Эндо
д) кровяной агар
Метод посева по Шукевичу используют для обнаружения:
а) стафилококков
б) протеев (+)
в) клебсиелл
г) колиформных бактерий
д) стафилококка
Для выделения Clostridium perfringens используется среда:
а) Вильсона - Блера (+)
б) полужидкий агар
в) полимиксиновая
г) Эндо
д) кровяной агар
Методы санитарно-микробиологического исследования микрофлоры продуктов питания и лекарственных средств.
Микрофлора пищевых продуктов
Многие пищевые продукты являются благоприятной средой для сохранения и размножения микроорганизмов. Микрофлору пищевых продуктов условно делят на специфическую (штаммы микроорганизмов, применяющиеся в технологическом процессе) и неспецифическую (случайные микроорганизмы, попадающие в пищевые продукты при их заготовке, доставке, переработке и хранении). Инфицирование пищевых продуктов микроорганизмами может приводить к возникновению у людей пищевых токсикоинфекций и других заболеваний.
Микробиологические критерии безопасности пищевых продуктов:
1) санитарно-показательные микроорганизмы (бактерии группы кишечной палочки – представители родов Escherichia, Klebsiella, Citrobacter, Enterobacter, Serratia);
2) потенциально-патогенные микроорганизмы (коагулазоположительные стафилококки, бактерии рода Proteus,сульфитредуцирующие клостридии, Bacillus cereus)
3) патогенные микроорганизмы (сальмонеллы и др.);
4) показатели микробиологической стабильности продукта (дрожжи, плесневые грибки).
Санитарно-бактериологическое исследование пищевых продуктов проводят в несколько этапов.
1. Отбор проб проводят стерильными инструментами в стерильную посуду.
2. Определение ОМЧ (общего количества микроорганизмов, содержащихся в 1 г или 1 см 3 продукта). Для его определения используют методы кратных и продольных разведений:
- метод кратных разведений. Плотные субстраты измельчают и готовят исходную взвесь в разведении 1:1. Из полученной взвеси или исходного жидкого субстрата готовят ряд последующих разведений в физиологическом растворе с таким расчетом, чтобы при посеве двух последних разведений на чашке Петри выросло 50–300 колоний. Из двух последних разведений по 1 см 3 вносят в чашки Петри и заливают 10–15 мл расплавленного и остуженного питательного агара. Чашки инкубируют при 37ºС 48 часов, затем подсчитывают число выросших колоний и рассчитывают ОМЧ с учетом разведения исследуемого материала.
- метод предельных разведений (титр). Из исходного жидкого субстрата готовят ряд десятикратных разведений до тех пор, пока в последней пробирке можно будет предположить наличие одной бактериальной клетки. Посев делают в жидкую элективную среду с последующим выделением микроорганизмов на плотной среде и изучением их характеристики. За титр принимают то наименьшее количество субстрата, в котором обнаружена одна клетка исследуемого микроорганизма.
3. Определение санитарно-показательных микроорганизмов, которые характеризуют продукт с точки зрения эпидемической опасности. В основном это бактерии группы кишечной палочки (БГКП), для их количественного учета используют методы определения наиболее вероятного числа (НВЧ) и титра БГКП.
- Для определения НВЧ из исследуемого продукта делают разведения 10–1, 10–2, 10–3, из которых по 1 см 3 засевают в три пробирки со средой Кесслера (для каждого разведения). Через 24 часа инкубации при 37ºС в пробирках регистрируется изменение цвета седы и газообразование. В зависимости от числа проросших пробирок определяют НВЧ колиформных бактерий.
- Для определения титра БГКП готовят десятикратные разведения анализируемого материала и высевают на среду Кесслера для выявления наименьшего количества продукта, в котором присутствуют колиформные бактерии. Посевы термостатируют при 43ºС в течение 18–24 часов. Из каждой пробирки производят высев на чашки Петри со средой Эндо так, чтобы получить рост в виде изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37ºС 18–24 часа, после чего из выросших колоний делают мазки, окрашивают по Граму. При выявлении в мазках грамотрицательных палочек материал колоний пересеваю на среды Гисса с глюкозой. При наличии газообразования в пробирках с посевами констатируют присутствие БГКП. Титр устанавливают по наименьшему количеству продукта, в котором обнаружены БГКП, или по стандатным таблицам.
4. Обнаружение патогенных и условно-патогенных микроорганизмов (сальмонелл, стафилококка, протея, патогенных грибков). Для этого взвеси исследуемых продуктов засевают на среды накопления (селенитовый, хлористо-магниевый бульоны). После суточной инкубации при 37ºС производят пересев на плотные элективные среды (Эндо, Левина, Плоскирева, висмутсульфитный и желточно-солевой агар). Далее материал колоний индентифицируют путем учета особенностей роста на средах Гисса, Ресселя, Олькеницкого и в реакциях агглютинации с моновалентными сыворотками.
Микрофлора лекарственного сырья и готовых лекарств
Лекарственное растительное сырье (ЛРС) может обсеменяться микроорганизмами на всех этапах заготовки, переработки и хранения. Внешние проявления микробной порчи ЛРС – изменение цвета и консистенции, загнивание, плесневение, появление несвойственного запаха. При этом резко снижается содержание биологически активных веществ, использование такого сырья становится бесполезным. Состав микроорганизмов зависит от вида ЛРС, его структуры и химического состава. Преобладают грибки (Mucor, Penicillum, Aspergillus, Candida), актиномицеты и спорообразующие бактерии (Bacillus subtilis, B. megaterium).
Микробной порче подвергаются также и готовые лекарственные формы (ЛФ). Лекарства с повышенной обсемененностью микробами могут вызывать инфекционные заболевания, размножение микроорганизмов в лекарственных средствах приводит к изменению их физических и органолептических свойств, а в отдельных случаях и к превращению лекарств в токсический продукт.
Предупреждение микробной порчи готовых лекарственных препаратов возможно при соблюдении условий, исключающих их микробное загразнение: соблюдение правил личной гигиены сотрудниками аптек и фармацевтических производств, правильная обработка посуды и оборудования, обеззараживание воздуха; при необходимости – изготовление ЛФ в асептичесикх условиях.
Инъекционные препараты, глазные капли и мази должны быть стерильными. Остальные ЛФ являются нестерильными и легко подвергаются обсеменению микроорганизмами.
Бактериологический контроль ЛФ и ЛРС проводят также в несколько этапов по методикам, приведенным выше:
1) определение ОМЧ (общей обсемененности в 1г или 1мл препарата);
2) определение БГКП;
3) определение дрожжевых и плесневых грибов;
4) определение условно-патогенных и патогенных микроорганизмов (по специальным показателям).
В соответствии с требованиями Государственной фармакопея XI издания приняты критерии оценки микробной обсемененности лекарственных средств, приведенные в таблице 5.
Нормативы предельно допустимого содержания непатогенных
микроорганизмов в лекарственных формах
Прозоркина H. В., Рубашкина П. А. - Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии
6. Санитарно-вирусологическое исследование почвы.
Основные методы определения микробиологических показателей, характеризующих фекальное загрязнение почв
Определение кишечных палочек в почве титра1щонным методом
Из первого разведения почвенной суспензии (1 : 10) берут 10 мл и засевают во флаконы с 50 мл жидких сред (Кес-слера или лактозного бульона с трифенилтетразолием хлорида ТТХ). Посев меньших количеств (0,1 г, 0,01 гит. д.) делают по 1 мл из соответствующих разведений почвенной суспензии в пробирки с 9 мл тех же сред.
Перед посевом в каждую пробирку с лактозным бульоном прибавляют по 0,3 мл 2% водного раствора ТТХ, а в каждый флакон— по 1,5 мл. Методика с использованием ТТХ основана на способности кишечной палочки восстанавливать бесцветное соединение ТТХ с трифенилформазаном, выпадающим в виде осадка и придающим среде коричневато-красный цвет. Кишечная палочка устойчива к действию формазана, в то время как развитие другой микрофлоры тормозится.
Посевы на среде Кесслера выращивают 48 часов при 43 °С или 37°С. Отсутствие через 48 часов газообразования и помутнения в бродильных сосудах дает окончательный отрицательный ответ на наличие бактерий группы кишечных палочек. Отрицательный ответ на лактозном бульоне с ТТХ дается через 24 часа в том случае, если в пробирках и флаконах цвет среды не изменился.
При наличии в сосудах со средой Кесслера газообразования и помутнения или только помутнения производят высев на среду Эндо. Чашки с посевами помещают в термостат на 24 часа при температуре 37°С.
Отсутствие роста на чашках дает окончательный отрицательный ответ.
При наличии на поверхности среды Эндо розовых или красных колоний грамотрицательных палочек с отрицательной оксидазной активностью, их подсчитывают и причисляют к бактериям группы кишечных палочек после подтверждения ферментации глюкозы. Для этого засевают 2—3 колонии каждого типа в полужидкую среду с глюкозой. Учет производят через 4—5 и 18 часов инкубации при 37°С. Если за это время в среде происходит образование кислоты и газа, то это подтверждает наличие кишечных палочек в исследуемом разведении почвы. Результаты анализа выражают коли-титром.
Определение в почве общего количества бактерий
Для характеристики в почве общего микробного загрязнения фекального происхождения используют определение численности микроорганизмов, преимущественно бактерий, присущих на мясопептонном агаре при 37°С. При этом производят посев почвенных разведений в 1,5% мясопептонный агар. Из каждой пробы почвы для посева должно быть использовано не менее двух различных разведений. Берут 1 мл суспензии и переносят на дно стерильной чашки. Из каждого разведения посев производят минимум на 2 параллельные чашки. После в каждую чашку вливают предварительно расплавленный и остуженный до 45 °С питательный агар в количестве 15—20 мл. Чашки Петри с расплавленным агаром хорошо перемешивают с имеющейся там почвенной суспензией. Затем чашки помещают на строго горизонтальную поверхность до затвердевания среды.
После застывания агара чашки с посевом в перевернутом виде помещают в термостат при 37°С на 24 часа.
После инкубации подсчитывают выросшие колонии.
Определение в почве общего количества бактерий
Для характеристики в почве общего микробного загрязнения фекального происхождения используют определение численности микроорганизмов, преимущественно бактерий, растущих на мясопептонном агаре при 37 °С. При этом производят посев почвенных разведений в 1,5 % мясопептонный агар. Из каждой пробы почвы должно быть использовано для посева не менее двух различных разведений. После тщательного перемешивания берут по 1 мл суспензии и переносят на дно двух стерильных чашек Петри. В каждую чашку вливают питательный агар в количестве 15—20 мл расплавленного и остуженного до 45°С. Затем чашки помещают на строго горизонтальную поверхность до затвердевания среды.
После инкубации при температуре 37 °С 24 часа подсчитывают выросшие колонии.
Определение клостридиум перфрингенс в почве
Из всех приготовленных почвенных разведений (до 1 : 1000 000) по 1 мл переносится в два параллельных ряда пробирок. Один ряд пробирок прогревают при температуре 80°С в течение 15 минут или при 90°С — 10 минут. Затем во все пробирки наливают по 9—10 мл среды Вильсон—Блер. Инкубация посевов производится при 37° С в течение 24 часов.
Cl. perfringens образуют колонии черного цвета, в мазках — грамположительные палочки.
Определение в почве нитрифицирующих бактерий
Нитрифицирующие бактерии завершают цикл превращения в почве азотсодержащих соединений, окисляя аммиак до нитритов и нитратов. Поэтому численность этих микроорганизмов довольно четко указывает на степень органического загрязнения, скорости и окончания распада органики в почве.
Определение нитрификаторов можно производить посевом разведений почвенной суспензии на плотных или жидких средах. Чаще всего для этих целей применяется среда Виноградского. Для этого производят посев почвенных разведений во флаконы со средой, разлитой тонким слоем. В опыт рекомендуется включать два незараженных флакона со средой, служащей контролем на чистоту среды. Посевы инкубируют при 28°С в течение 14—15 суток.
При развитии нитрифицирующих бактерий в среде постепенно образуются азотистая и азотная кислоты. Образование окисных соединений азота рекомендуется проверять на 5—7-й день после посева и вторично на 14—15-й день. Титр нитрифицирующих бактерий чаще всего устанавливают с помощью качественной пробы с дифенилаланином; в присутствии азотистой и азотной кислот этот реактив дает синее окрашивание. Для этого пипеткой несколько капель среды из каждого флакона, не взмучивая осадок, переносятся на стеклянную пластинку. Затем добавляют несколько капель раствора дифениламина в концентрированной серной кислоте. Появление синего окрашивания указывает на присутствие в среде нитратов, как результат размножения нитрифицирующих бактерий. Среда контрольных флаконов не должна давать изменения окраски.
ВОПРОСЫ для самоконтроля
1. Какова нормальная микрофлора почвы ?
2. Какие факторы влияют на качественный и количественный состав почвы ?
3. Что вы знаете о процессах самоочищения в почве?
4. В каких случаях проводят санитарно-бактериологичес-кое исследование почвы ?
5. Назовите основные правила отбора проб почвы для бактериологического анализа.
6. Какие исследования проводят при полном санитарно-мик-робиологическом анализе почвы ?
7. Какие сведения содержит паспорт обследуемого участка земли и сопроводительный талон?
8. Назовите критерии оценки санитарного состояния почвы.
9. Какие показатели характеризуют фекальное загрязнение почвы ?
10. Какова цель определения в почве нитрифицирующих бактерий?
1. Приготовить образец почвы для санитарно-бактериоло-гкческого исследования.
2. Произвести разведение почвы 1:10 и ряд последовательных разведений 1:100; 1:1000; 1:10000.
3. Определить бактерии группы кишечной палочки в почве титрационным методом.
4. Определение микробного числа почвы: пользуясь демонpaHHOHHbiMH посевами на МПА различных разведений почвенной суспензии, подсчитать микробное число и про-микроскопировать материал из отдельных колоний.
5. Изучение посевов почвы на срезах Кесслера и Эндо: обратить внимание на характерный рост кишечной палочки.
6. Изучение характера роста на Cl. perfringens на среде Вильсон—Б лер.
§ 6. Санитарно-микробиологическое исследование пищевых продуктов
Общая характеристика микрофлоры пищевых продуктов
Микрофлора пищевых продуктов подразделяется на специфическую и неспецифическую. К специфической относятся микроорганизмы, используемые для приготовления некоторых продуктов, формирующие продукт или специально добавляемые в него для придания определенных вкусовых и питательных качеств. Без специфической микрофлоры фактически не может существовать и сам продукт. Невозможно представить себе приготовление простокваши и кефира без молочнокислых бактерий, пива — без участия дрожжей и т.д.
Специфическая микрофлора представляет интерес для бактериологов, работающих на предприятиях пищевой промышленности. Они постоянно следят за чистотой штаммов, за сохранением их биологических свойств, от которых зависит качество выпускаемого продукта.
В производстве кисломолочных продуктов (простокваши, масла, творога и т. п.) чаще всего используется молочнокислый стрептококк и в дополнение к нему сливочный стрептококк. Молочнокислый стрептококк — это грамполо-жительные кокки, располагающиеся попарно, он сбраживает лактозу, глюкозу, галактозу с образованием кислоты и газа. Клетки сливочного стрептококка располагаются в виде цепочек, они придают продукту сметанообразную консистенцию. Иногда в кисломолочные продукты добавляют арома-тобразующие стрептококки: стрептококкус цитроворус, стреп-тококкус диацетилактис и др. Большинство молочнокислых стрептококков может расти на мясопептонном агаре, образуя при поверхностном посеве очень мелкие круглые выпуклые колонии, а при глубинном посеве — колонии в виде чечевичных зерен.
Помимо стрептококков, в приготовлении кисломолочных продуктов принимают участие и молочнокислые палочки. Некоторые кисломолочные продукты (простокваша, ацидофильное молоко и др.) готовят на чистой культуре молочнокислых палочек — это довольно крупные бесспоровые грам+ палочки. Они, как правило, не растут на МПА.
Кефир получают с помощью так называемого кефирного грибка. Основа грибка состоит из плотного войлокообраз-ного сплетения нитей (палочка стромы), среди которых находятся скопления микроорганизмов, формирующих кефир: молочнокислых стрептококков, молочнокислых палочек и дрожжеподобных грибков.
В препарате, приготовленном из суточного кефира, можно обнаружить главным образом молочнокислые стрептококки, в небольшом количестве молочнокислые палочки и не в каждом поле зрения дрожжевые клетки. В двухсуточном кефире появляется большое количество дрожжевых клеток.
Микроорганизмы молочнокислого брожения участвуют также и в таких процессах, как квашение, мочение овощей и фруктов.
Неспецифическая микрофлора попадает на продукт случайно, загрязняя его. В большинстве своем это микробы-сапрофиты, различные представители палочковидной и кокковой флоры.
Общие принципы санитарно-микробиологического исследования пищевых продуктов
Конечной целью санитарно-бактериологического контроля пищевых продуктов является профилактика пищевых отравлений.
При плановом санитарно-бактериологическом контроле пищевых продуктов подлежат исследованию:
количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (МАФАны) (общее количество микробов) (ГОСТ 10444. 15—94) (приложение № 1);
* количество бактерий группы кишечных палочек (БГКП), а в части продуктов — количество БГКП методом наиболее вероятного числа (НВЧ) (ГОСТ Р 50474—93);
* коагулазоположительные стафилококки (St. aureus) (ГОСТ 30347-97); бактерии рода Proteus;
* бактерии рода Salmonella в 25 г продукта (ГОСТ Р 50480—93).
Пищевые продукты исследуют:
а) с целью выделения различных патогенных микроорганизмов по эпидемиологическим показаниям в случаях инфекционных заболеваний и пищевых отравлений; б) с целью планового контроля за качеством сырья и продукта в процессе его приготовления; в) с целью контроля за готовой продукцией, поступающей потребителю; г) с целью определения соответствия качества продукта требованиям стандарта.
Нарастает микробное число при нарушении технологии приготовления продукта, главным образом при нарушении санитарно-гигиенических правил на предприятиях.
Нередко продукт обсеменяется различными микроорганизмами вторично в процессе транспортировки и хранения. В качестве примера могут служить студни. Технология их приготовления такова (двойная проверка), что почти исключает сохранение микроорганизмов, однако студни, поступающие в лабораторию для исследования, в значительном проценте случаев весьма обсеменены разнообразной микрофлорой. Виной тому чаще всего является неправильное хранение продукта (при температуре 6°С), удлинение сроков реализации (более 12 часов) и другие нарушения общепринятых гигиенических правил.
Важное значение имеет определение загрязненности продукта микробами группы кишечной палочки.
Следует иметь в виду, что некоторые продукты (например, молоко и молочные продукты) в силу своего происхождения неизбежно бывают загрязнены кишечными палочками, поэтому при суждении о качестве имеет значение не только факт наличия кишечной палочки, но и степень обсе-мененности ею пищевого продукта, т. е. коли-титр. Коли-титр, как правило, определяется бродильным методом. В качестве среды накопления чаще всего используется среда Кесслера.
Наличие в среде генцианвиолета дает возможность ни-гибировать постороннюю, главным образом Гр+ микрофлору, которая всегда в том или ином количестве находится в пищевых продуктах. Желчь создает благоприятные условия для развития микробов группы кишечной палочки.
Помимо группы кишечной палочки, для некоторых продуктов известное санитарно-показательное значение имеют и другие микроорганизмы. Так, для кремовых изделий, которые нередко являются источниками стафилококковых интоксикаций, определенное значение имеет исследование с целью выделения коагулазоположительных стафилококков. Мясные продукты, например, студни, колбасы, исследуются также на наличие микробов группы протея, способных вызвать порчу продуктов, а иногда и пищевое отравление.
На некоторые продукты имеются общесоюзные стандарты (ГОСТы) в отношении методики их исследования, а также нормирования качества продукта по бактериальным показателям. Унификация санитарно-бактериологических методик необходима для того, чтобы получать однородные результаты.
Пищевые отравления бактериальной этиологии подразделяются на пищевые токсикоинфекции и пищевые токсикозы, а также отравления смешанной этиологии.
К пищевым токсикоинфекциям относятся острые кишечные заболевания, возникающие при употреблении в пищу продуктов, в которых произошло массивное размножение микроба-возбудителя и накопление токсинов.
К возбудителям пищевых токсикоинфекции относятся представители семейства энтеробактерий — протеи, цитро-бактер, гафния, клебсиелла; семейства стрептококков, семейства бациллярных и семейства псевдомонад.
К пищевым токсикозам относятся бактериальные токсикозы: ботулизм, стафилококковая пищевая интоксикация и микотоксикозы.
Методы лабораторной диагностики пищевых отравлений:
1) бактериологический — выделение чистой культуры и ее идентификация до серовара и фаговара;
2) серологический — обнаружение антител в сыворотке заболевших;
3) биологический — заражение лабораторных животных, в основном при расшифровке токсикозов (стафилококкового, ботулизма).
Исследование проб пищевых продуктов, предположительно послуживших причиной отравления, целесообразно проводить на соответствие ГОСТов, таких как ГОСТ Р 50474—93 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий) (приложение № 2); ГОСТ Р 50480—93 Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella (приложение № 4) и др.
§ 7. Отбор, направление и подготовка проб для лабораторного исследования
Отбор проб для бактериологического исследования следует производить в стерильные широкогорлые банки, зак- рываемые пергаментной бумагой и обвязанные бечевкой. Остатки консервов направляются на исследование непосредственно в той банке, из которой они использовались в пищу.
Мясо берут для анализа в количестве 500 г, при этом пробу отбирают из различных мест туши с обязательным взятием мезентериальных лимфатических узлов, а также участков трубчатой кости.
Мелкую рыбу отбирают в количестве 2—3 штук, от крупной рыбы — 2—3 куска, в том числе из спинки, ближе к голове и из участков вблизи анального отверстия.
Соленые продукты, находящиеся в бочечной таре, берут сверху, из середины и со дна бочки. В отдельную посуду набирают 100—200 мл рассола.
Пробы жидких, полужидких объектов (супы, соусы, кремы, молочные продукты) отбирают после тщательного перемешивания в количестве около 200 г.
Пробы испражнений отбирают из последней более жидкой порции, поступающей из верхних отделов кишечника. При наличии в испражнениях гноя, слизи, крови, их необходимо включить в отбираемый материал.
Рвотные массы отбирают в количестве 50—100 мл, промывные воды — 100—200 мл, до применения каких-либо лекарственных средств.
Кровь у заболевших забирают в стерильную сухую пробирку в количестве 8—10 мл.
Пробу мочи на исследование берут в количестве 20— 30мл.
Желчь и содержимое 12-перстной кишки берут на исследование при помощи дуоденального зонда.
Спинномозговую жидкость отбирают в стерильную пробирку в количестве 5—10 мл.
Отбор проб воды производят в количестве не менее 1,5 литров.
Пробы секционного материала забирают в количестве 50— 60 г каждого органа или ткани.
В лабораторию пробы доставляют в опечатанном виде.
В сопроводительном документе к материалам от заболевших (умершего)указывается: Ф.И.О., возраст, адрес, место работы, должность, дата заболевания, дата и время сбора материала, фамилия и должность лица, направившего материал.
Исследование материалов, доставленных в лабораторию в процессе расследования пищевого отравления, производится немедленно по их получении.
Исследование материалов от пострадавших:
кровь засевают в питательную среду (Раппопорт или желчный бульон) в соотношении 1 : 10 (5 мл на 45 мл среды). Термостатируют 10 дней при 37°С, делая высев на среду Эндо через 18—24 часа, на 3, 4, 6, 10-е сутки. При наличии роста работают по общепринятой методике.
Желчь засевают в количестве 5 мл на 45—50 мл мясо-пептонного бульона (1 : 10), помещают на 7 суток в термостат при 37°С и делают высевы через 18—20 часов и 3, 5, 7 суток на среду Эндо. При наличии подозрительного роста работают по общепринятой методике.
Читайте также: