Посев производят в над пламенем горелки платиновой петлей

Добавил пользователь Евгений Кузнецов
Обновлено: 19.09.2024

При необходимости полученный патологический мате­риал доставляют в лабораторию в специальной таре или металлических биксах. Поступивший в лабораторию материал исследуют в течение 1 ч после взятия при хранении в условиях комнатной температуры или не более чем через 3 ч при хранении в холодильнике при температуре 4 °С.

В запаянных пробирках или пипетках жидкий патологи­ческий материал сохраняется до высыхания довольно долго, грибы в волосах и чешуйках, завернутые в бумажные пакеты (типа аптечных порошков), могут сохраняться месяцы и да­же годы.

Кровь для исследования на грибы берут из локтевой вены в количестве 5 – 10 мл и вносят сразу с колбочку с жидкой питательной средой или равным количеством цитрата натрия.

При необходимости исследования на грибы биопсийного материала его помещают в стерильную чашечку Петри и используют для микроскопии, посевов на питательные среды и приготовления гистологических препаратов.

МИКРОСКОПИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ Микроскопическое исследование патологического мате­риала на грибы производят в нативных и окрашенных препаратах. Для приготовления неокрашенных препаратов по­лученный материал размельчают при помощи скальпеля или препаровальной иглы и помещают на середину предметного стекла. Для более четкого выявления элементов гриба производят просветление (мацерацию) материала. С этой целью прибегают к помощи различных веществ, чаще всего едкой щелочи (КОН, NaOH), которые растворяют эпидермальные чешуйки, слизь, гной, просветляют пигмент волоса и тем са­мым делают грибы доступными для исследования.

На размягченные чешуйки кожи или ногтя, которые по­мещают на середину предметного стекла, наносят 13 капли 20 30% раствора КОН (NaOH). Исследуемый материал в каплях щелочи осторожно подогревают над пламенем спир­товки до появления нежного белого ободка из кристаллов щелочи по периферии капли. Подогревать до кипячения не следует. После подогревания каплю накрывают покровным стеклом, избегая попадания пузырьков воздуха. Подогрева­ние препаратов после наложения покровного стекла не реко­мендуется. Приготовленные препараты длительному хране­нию не подлежат. Их лучше всего исследовать в течение 2 ч с момента приготовления, так как после этого наступает глу­бокое разрушение тканей или выпадают кристаллы щелочи. Р. А. Аравийский и Г. И. Горшкова (1995) рекомендуют про­светленные и накрытые покровным стеклом препараты кож­ных чешуек и волос оставлять на 5 10 мин, а ногтевых пластинок – на 30 40 мин до микроскопирования.

Просветление препаратов можно проводить без подогре­вания, для этого их оставляют в 20% растворе КОН на 30 60 мин или используют другие методы просветления патоло­гического материала: хлораллактофенолом по Аману; лактофенолом; раствором, содержащим по 15% диметилсульфоксида и КОН в воде. Хорошие результаты получают пос­ле просветления ногтевых пластинок, помещенных в 5% рас­твор КОН на 24 ч, подогревания в этом случае не требуется.

Микроскопическое исследование производят на обычном лабораторном микроскопе без иммерсии. Конденсор микроскопа должен быть опущен, диафрагма сужена. В начале препарат находят на стекле при малом увеличении (40х), последующее исследование производят при большем увели­чении (100х); детально препарат изучают при увеличении 400х. Необходимо исследовать несколько препаратов с тем, чтобы увеличить надежность анализа и избежать ложноположительных результатов.

Ошибки в микроскопической диагностике грибов могут возникнуть в связи как с дефектами приготовления препара­та, так и с недостаточной опытностью лаборанта.

Дефекты изготовления прежде всего бывают связаны с перегреванием препарата, что может привести к выпадению кристаллов щелочи, разрушению волоса и появлению мелко­зернистого распада в патологическом материале. Линейное расположение удлиненных ровных кристаллов щелочи весь­ма напоминает нити септированного мицелия даже на чис­том стекле без патологического материала. Кроме того, оби­лие кристаллов щелочи препятствует выявлению гриба в глубоко лежащих слоях патологического материала. Диф­ференциальнодиагностическими признаками являются ис­ключительное однообразие кристаллов, их стекловидная про­зрачность, многогранность краев и отсутствие неразрывной связи одного элемента с другим. В сомнительных случаях рекомендуется добавить к препарату капельки слегка подо­гретой дистиллированной воды, которые быстро растворяют кристаллы щелочи.

Липиды кожных покровов, жировой распад клеток и зер­на кератогиалина, особенно имеющие правильную форму, могут напоминать отдельные споры гриба. Но разнообразие формы и, главное, размеров, отсутствие внутренней структуры образований (вакуоли, оболочки) говорят против грибковой природы данных элементов. Липиды также могут попасть в препарат при взятии патологического материала с недоста­точно очищенного очага поражения.

Пузырьки воздуха могут напоминать споры дрожжеподобных клеток, но в отличие от последних они окружены плотной темной оболочкой, и даже самые маленькие пузырь­ки воздуха всегда больше клеток гриба.

Нити от ткани носков, одежды и т. п. обычно лежат от­дельно от патологического материала, они всегда больше гифов, грубее и не септированы.

В некоторых лабораториях просветление препаратов для микроскопического исследования проводят 15 30% раство­ром КОН, в который добавляют 5 10% коммерческих тем­носиних чернил фирмы Паркер (Parker's Superchrome BlueBlack Ink). При этой окраске гифы и споры окрашива­ются в голубой цвет.

КУЛЬТУРАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ Культуральное исследование является высокочувстви­тельным и специфическим методом лабораторной диагности­ки микозов. Его необходимо производить независимо от ре­зультатов микроскопии, так как культуральный метод позво­ляет иногда выявлять возбудителя при отрицательных данных микроскопии; он дает возможность определять род и вид возбудителя и, следовательно, проводить адекватную те­рапию и профилактику заболевания. Особенно полезен культуральный метод для диагностики латентных форм ми­козов, носительства дерматофитов здоровыми людьми.

Перед посевом патологического материала его расщепля­ют на предметном стекле на мелкие кусочки, 5 6 из них переносят на поверхность косого агара и располагают на расстоянии 1 2 см один от другого. Материалом одной про­бы засевают не менее 2 3 пробирок (волосы) или 4 5 про­бирок (кожные и ногтевые чешуйки). Для первичной изоля­ции дерматофитов лучше всего пригодны стандартная агаризированная среда Сабуро с 2 4% глюкозы или суслоагар, содержащие антибиотики (пенициллин 50 мкг/мл + стреп­томицин или биомицин (50 мкг/мл и 200 мкг/мл соответст­венно) и антидрожжевой антибиотик актидон (циклогексамид) 0,1 0,5 мг/мл. Актидон не влияет на рост дермато­фитов и подавляет многие плесневые грибы, а также виды Candida и Cryptococcus [Аравийский Р. А., Горшкова Г. И., 1995].

Посев производят в боксе над пламенем газовой или спиртовой горелки платиновой петлей, микологическим крючком или лопаточкой из нихрома. Держа пробирку в ле­вой руке, охватывают ее над пламенем горелки, захватывая пробку мизинцем правой руки, которой одновременно дер­жат петлю. Прокаленную докрасна петлю остужают и одно­временно увлажняют прикосновением к поверхности среды в стороне от места предполагаемого посева. Затем берут час­тицу материала и наносят на поверхность агара. Пробирку закрывают пробкой, предварительно обожженной над пламе­нем. Так же производят пересев из пробирки в пробирку.

Аналогичным образом производят посев на чашку Пет­ри. Необходимо, чтобы имеющаяся в ней среда как можно меньше соприкасалась с окружающим воздухом, поэтому крышку следует приподнимать настолько, чтобы в нее сво­бодно могла пройти только петля с патологическим материа­лом.

Посевы инкубируют при 22 30 °С (лучше всего 28 °С). Появление роста дерматофитов отмечается с 4го по 12й день инкубации в точках посева по краям внесенного мате­риала. При отсутствии роста в течение 30 дней результаты культивирования считаются отрицательными. В оптимальных условиях первичные культуры многих дерматофитов можно идентифицировать на 7 10й день после посева, но следить за посевами нужно в течение 20 30 дней. Первич­ные культуры растут сравнительно медленно, при появлении роста в первичным посеве необходимо произвести отсев от края колонии на свежую дифференциальную среду для по­лучения чистой культуры, которая будет служить материа­лом для идентификации выделенного дерматофита.

ЛЮМИНЕСЦЕНТНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ В 1925 г. Margaret и Deveze обнаружили, что волосы, по­раженные некоторыми дерматофитами, дают характерное свечение в ультрафиолетовых лучах, пропущенных через фильтр Byда. Стекло Byда состоит из сульфата бария, со­держит около 9% окиси никеля; оно пропускает лучи дли­ной 365 нм. В качестве источника ультрафиолетовых лучей можно использовать различные приборы. Природа свечения точно не установлена. Волос продолжает светиться после ги­бели гриба и после попыток экстрагировать флюоресцирую­щий материал горячей водой или холодным раствором бро­мида натрия. Интенсивность и характер свечения зависят от рН раствора. Полагают, что флюоресцирующая субстанция появляется в процессе взаимодействия гриба и растущего во­лоса.

Свечение в ультрафиолетовых лучах, пропущенных че­рез фильтр Вуда, характерно только для волос, пораженных грибами рода Microsporum (M. canis, M. audouinii, M. ferrugineum, M. distortium, изредка M. gypseum и M. nanum), a также Trichophyton schonleinii. Волосы, пораженные микроспорумами, особенно M. canis и M. audouinii, дают наиболее яркое свечение; волосы, пораженные Т. schonleinii, имеют тусклую зеленоватую флюоресценцию.

Свечение наблюдается только в полностью пораженных грибом волосах. Его может не быть в свежих очагах пораже­ния. В этих случаях следует эпилировать волосы из краевой, наиболее активной зоны, и свечение можно обнаружить в корневой части волос.

Люминесцентный метод можно использовать как для диагностики и контроля за эффективностью лечения у от­дельных больных, так и в эпидемиологических очагах. Ком­пактные передвижные установки удобны для обследования контактных людей в школах, детских садах и т. п.

Люминесцентное обследование необходимо производить в затемненной комнате, очаги поражения должны быть предварительно очищены от корок, остатков мази и т. п. Люми­несцентный метод можно использовать для диагностики отрубевидного лишая, особенно при локализации очагов пора­жения на волосистой части головы. Очаги поражения при этом заболевании имеют красноватожелтое или бурое свече­ние. Это свечение, однако, не является строго специфичным, так как может наблюдаться при наличии перхоти на воло­систой части головы и даже у здоровых людей в области устьев волосяных фолликулов на лице и верхней части ту­ловища. Выявленные с помощью люминесцентного метода пораженные волосы должны обязательно подвергаться мик­роскопическому исследованию.

ИММУНОЛОГИЧЕСКОЕ И БИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Иммунологические методы исследования используют для выявления специфической перестройки организма и серологической диагностики грибковых заболеваний. Для об­наружения специфических антител в сыворотке пробы проводят следующие серологические реакции: агглютинации, преципитации, связывания комплемента, иммунофлюоресценции с соответствующими антигенами.

Аллергическое состояние организма больного выявляют с помощью аллергических кожных проб. Аллергены наносят на скарифицированную кожу по Пирке или втиранием в ко­жу по Моро, внутрикожно по Манту, а также уколом в кожу. С помощью этих проб выявляют аллергические реакции как немедленного, так и замедленного типа, что позволяет оце­нить состояние гуморального и клеточного иммунитета.

Для выявления специфической сенсибилизации лимфо­цитов используют реакции дегрануляции базофилов, агломе­рации и альтерации, тест бластной трансформации, подавле­ния миграции макрофагов и т. п.

Сопоставление результатов серологических и аллерги­ческих реакций оказывается полезным как для диагностики, так и для прогноза течения микозов.

Биологический метод. Используется для лабораторной диагностики глубоких и особо опасных микозов. Основан на заражении животных патологическим материалом от боль­ного или культурой исследуемого гриба. Осуществляется в специальных лабораториях.

Культуральное исследование является высокочувстви­тельным и специфическим методом лабораторной диагности­ки микозов. Его необходимо производить независимо от ре­зультатов микроскопии, так как культуральный метод позво­ляет иногда выявлять возбудителя при отрицательных данных микроскопии; он дает возможность определять род и вид возбудителя и, следовательно, проводить адекватную те­рапию и профилактику заболевания.

Особенно полезен культуральный метод для диагностики латентных форм ми­козов, носительства дерматофитов здоровыми людьми.

Перед посевом патологического материала его расщепля­ют на предметном стекле на мелкие кусочки, 5 - 6 из них переносят на поверхность косого агара и располагают на расстоянии 1 - 2 см один от другого. Материалом одной про­бы засевают не менее 2 - 3 пробирок (волосы) или 4 - 5 про­бирок (кожные и ногтевые чешуйки). Для первичной изоля­ции дерматофитов лучше всего пригодны стандартная агари-зированная среда Сабуро с 2 - 4% глюкозы или сусло-агар, содержащие антибиотики (пенициллин 50 мкг/мл + стреп­томицин или биомицин (50 мкг/мл и 200 мкг/мл соответст­венно) и антидрожжевой антибиотик актидон (циклогексамид) 0,1 - 0,5 мг/мл. Актидон не влияет на рост дермато­фитов и подавляет многие плесневые грибы, а также виды Candida и Cryptococcus [Аравийский Р. А., Горшкова Г. И., 1995].

Посев производят в боксе над пламенем газовой или спиртовой горелки платиновой петлей, микологическим крючком или лопаточкой из нихрома. Держа пробирку в ле­вой руке, охватывают ее над пламенем горелки, захватывая пробку мизинцем правой руки, которой одновременно дер­жат петлю. Прокаленную докрасна петлю остужают и одно­временно увлажняют прикосновением к поверхности среды в стороне от места предполагаемого посева. Затем берут час­тицу материала и наносят на поверхность агара. Пробирку закрывают пробкой, предварительно обожженной над пламе­нем. Так же производят пересев из пробирки в пробирку.

Аналогичным образом производят посев на чашку Пет­ри. Необходимо, чтобы имеющаяся в ней среда как можно меньше соприкасалась с окружающим воздухом, поэтому крышку следует приподнимать настолько, чтобы в нее сво­бодно могла пройти только петля с патологическим материа­лом.

Посевы инкубируют при 22 - 30 °С (лучше всего 28 °С). Появление роста дерматофитов отмечается с 4-го по 12-й день инкубации в точках посева по краям внесенного мате­риала. При отсутствии роста в течение 30 дней результаты культивирования считаются отрицательными. В оптимальных условиях первичные культуры многих дерматофитов можно идентифицировать на 7 - 10-й день после посева, но следить за посевами нужно в течение 20 - 30 дней. Первич­ные культуры растут сравнительно медленно, при появлении роста в первичным посеве необходимо произвести отсев от края колонии на свежую дифференциальную среду для по­лучения чистой культуры, которая будет служить материа­лом для идентификации выделенного дерматофита.








В основу современной классификации грибковых заболеваний человека положена родовая и видовая принадлежность грибов, глубина их проникновения в пораженные ткани и ответная реакция этих тканей, отношение грибов к придаткам кожи (волосам и ногтям), преимущественная локализация микоза. Однако до настоящего времени еще не создана классификация, вполне удовлетворяющая запросы практикующего врача. В России наибольшим признанием пользуется классификация Н.Д.Шеклакова, предложенная им в 1976 году. Микроспория вошла в группу микозов – дерматофитий, поражающих кожу (обычно в пределах эпидермиса) и ее придатки (волосы и ногти).

Возбудители микроспории, как и другие дерматофиты, является грибами. Это бесхлорофилловые растения, которые не в состоянии использовать углекислый газ из воздуха и для своего питания нуждаются в органических веществах. Клетки гриба Microsporum, имеющие разнообразную величину и форму, состоят из оболочки, цитоплазмы, ядра, вакуолей и ряда других включений. В световом микроскопе они представляются в виде спор или мицелия, нитевидных образований с общей оболочкой (стенкой) и поперечными перегородками; размножаются путем простого деления и почкования; при неблагоприятных условиях и в старых культурах образуются так называемые споры хранения, из которых в дальнейшем могут вновь развиться клеточные формы грибов. Грибы рода Microsporum являются аэробами. Оптимальным питательным субстратом для них служит кератин, чем, видимо, можно объяснить их тропизм к кератинсодержащим образованиям.


  • Антропофильная группа – M. ferrugineum, M. audouinii, M. rivalieri, M. langeronii.

  • Зооантропофильная группа – M. canis, M. distortum, M. nanum, M. persicolor.

  • Геофильная группа – M. gypseum, M. cookeii, Keratynomyces ajelloii.

Основная роль в патогенезе микроспории принадлежит недостаточности естественной резистентности, включающей барьерно-защитную функцию кожи, медиаторы воспаления, цитокины клеток Лангерганса, крови, кератиноцитов. Имеет место недостаточная функциональная активность клеток крови: снижение хемотаксиса, адгезии, фагоцитоза (становится незавершенным из-за недостаточной выработки ферментов и метаболитов окисления, витаминов, микроэлементов, особенно кальция, цинка, меди и железа).

Приуроченность очагов микроспории к тем или иным участкам кожного покрова определяется микротравмами, недостаточным сало - и потоотделением, местными нервно-сосудистыми нарушениям.
^

КЛИНИЧЕСКИЕ ПРОЯВЛЕНИЯ МИКРОСПОРИИ

После инкубационного периода, который при зоонозной микроспории составляет 5-7 дней, а при зооантропонозной он может растягиваться до 4-6 недель, на гладкой коже и волосистой части головы появляются очаги. Клиническая картина микроспории имеет особенности в зависимости от вида возбудителя, сопротивляемости организма больного, его возраста, локализации очагов поражения и глубины проникновения возбудителя. Различают микроспорию гладкой кожи и микроспорию волосистой части головы.

^ Микроспория гладкой кожи

Очаги высыпания могут приобретать эритематозно-отечную форму более характерную для новорожденных и детей раннего возраста, а также у молодых женщин. При этой форме микроспории отмечают выраженные воспалительные явления и незначительное шелушение.

^ Папулезно-сквамозная форма микроспории наблюдается у взрослых, редко в детском возрасте. Высыпания располагаются на лице, груди, спине, так называемых себорейных участках кожи. Очаги поражения инфильтрированы и интенсивно шелушатся. Это напоминает клиническую картину псориаза.

^ Глубокая форма микроспории гладкой кожи чаще встречается у женщин в области голеней и представлена фолликулярно-узловатыми элементами диаметром 2-3 см.

^ Микроспория волосистой части головы

Наряду с типичной клинической симптоматикой зооантропонозной микроспории в последние годы нередко наблюдаются атипичные ее варианты. К ним относят инфильтративную, нагноительную (глубокую), экссудативную, трихофитоидную и себорейную формы

При инфильтративной форме микроспории очаг на волосистой части головы несколько возвышается над окружающей кожей, гиперемирован, волосы чаще обломаны на уровне 3-4 мм. Слабо выражен чехлик из спор гриба у корня обломанных волос.

При нагноительной (глубокой форме) микроспории очаг поражения обычно значительно возвышается над поверхностью кожи. Это происходит за счет резко выраженной инфильтрации и образования пустул. При надавливании сквозь фолликулярные отверстия выделяется гной. Разряженные волосы склеены гнойными и гнойно-геморрагическими корками. Корки и расплавленные волосы легко удаляются, обнажая зияющие устья волосяных фолликулов, из которых, как из сот, выделяется светло-желтого цвета гной. Такое проявление нагноительной формы микроспории имитирует инфильтративно-нагноительную трихофитию типа керион Цельси (медовые соты Цельсия), глубокие формы пиодермии, красную волчанку, эозинофильную гранулему лица, лимфоцитарную инфильтрацию; при локализации на голени – гранулему Майокки.

За счет всасывания продуктов распада грибов, и нередко присоединяющихся бактерий, наблюдается интоксикация организма заболевших, что проявляется недомоганием, головными болями, лихорадочным состоянием. Увеличиваются и становятся болезненными регионарные шейные лимфатические узлы.

Формированию инфильтративной и нагноительной форм микроспории способствуют нерациональная (обычно местная) терапия, серьезные сопутствующие заболевания, а также позднее обращение к врачу.

^ Экссудативная форма микроспории характеризуется выраженной гиперемией и отечностью, с располагающимися на этом фоне мелкими пузырьками. Вследствие постоянного пропитывания чешуек серозным экссудатом и склеивания их между собой образуются плотные корки, при удалении которых обнажается влажная эрозированная поверхность очага.

При трихофитоидной форме микроспории, процесс поражения может охватить всю поверхность волосистой части головы. Очаги многочисленные мелкие, со слабым отрубевидным шелушением. Границы очагов не четкие, островоспалительные явления отсутствуют. Эта, в основном остро протекающая форма микоза, может приобретать хроническое вялое течение, продолжаясь от 4-6 месяцев до 2 лет. Волос разряжен или имеются участки очагового облысения.

При себорейной форме микроспории волосистой части головы отмечается главным образом разряженность волос. Очаги разряжения обильно покрыты желтоватыми чешуйками, при удалении которых можно обнаружить незначительное количество обломанных волос. Воспалительные явления в очагах минимальны, границы поражения нечетки.

К редким разновидностям микроспории относятся поражение кожи кистей (стоп) и микроспорийные онихомикозы. Чаще всего возбудителем является M. canis. По данным Рукавишниковой В.М. (1999), в отечественной литературе за 35 лет (с 1963 по 1998 г.) было обнаружено лишь 7 публикаций о микроспорийном онихомикозе. Началу заболевания нередко предшествует травма. У детей причиной травмирования может стать онихофагия и сопровождающие ее заусеницы, у взрослых – производственная травма.

Для микроспорийного онихомикоза типично одинаковое изменение ногтей как правой, так и левой кисти. Характерно изолированное поражение ногтя, обычно его проксимальной части или проксимально-боковой. Сначала появляется пятно, которое может трансформироваться в поперечную борозду. Пятно четко ограничивается полоской застойного воспаления. Поверхность ногтя над пятном либо не изменяется, либо тускнеет. Ноготь в этом месте становиться мягче и прогибается при надавливании, а впоследствии может разрушиться по типу онихолизиса. При обследовании пораженного ногтя под лампой Вуда обнаруживается ярко-зеленое свечение. Не диагностированный вовремя микроспорийный онихомикоз может служить причиной реинфекции и дальнейшего распространения заболевания среди окружающих. При попадании гриба в подногтевое пространство ноготь изменяется по типу дистального онихолизиса, т.е. отделяется от ногтевого ложа со свободного края. Сам ноготь становится тусклым, желтоватым, приподнимается в дистальной части за счет нерезко выраженного гиперкератоза.
^

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА

(Микробиологические методы и люминесцентное исследование)

Люминесцентное исследование.

Исследование проводят в затемненной комнате люминесцентной лампой Вуда. Очаги поражения предварительно очищают от корок, мази и других наслоений. Наблюдается ярко-зеленое свечение длинных и пушковых волос (или корневой части волоса после его удаления из свежего очага) пораженных грибами рода Microsporum. При гибели гриба свечение в волосе сохраняется.

Микроскопическое исследование.

Исследуют патологический материал (волосы, чешуйки кожи) на наличие патогенного гриба Microsporum в нативных препаратах. Полученный материал размягчают при помощи скальпеля и помещают на середину предметного стекла. Для более четкого выявления элементов гриба производят просветление (мацерацию) материала нанося 1-3 капли 20% раствора едкой щелочи KaOH (которая растворяла эпидермальные чешуйки, просветляя пигмент волоса). Исследуемый материал в каплях щелочи подогревают над пламенем спиртовки до появления белого ободка из кристаллов щелочи по периферии капли. После подогревания каплю накрывают покровным стеклом. В соответствии с рекомендациями Р.А.Аравийского и Г.И.Горшковой (1995), препараты кожных чешуек и волос оставляют на 10 минут до микроскопирования. Микроскопическое исследование производят на обычном лабораторном микроскопе без иммерсии с опущенным конденсором и суженной диафрагмой.

Суждение о присутствии патогенного гриба Microsporum в изучаемом материале выносят на основании обнаружения спор и нитей мицелия гриба.

При микроскопическом изучении пораженного волоса при зоонозной и антропонозной микроспории на его поверхности выявляется множество мелких спор, расположенных не упорядоченно – цепочками, а хаотично или мозаично. Границы волоса вследствие его поражения выглядят как бы размытыми. При геофильной микроспории (она встречается казуистически редко) споры гриба располагаются также мозаично по типу ectothrix, однако в отличие от возбудителей зоо - и антропонозной форм имеют крупные размеры (megasporon).

Вопрос о виде возбудителя микроспории, как и вопрос выявления возбудителя заболевания при отрицательных результатах микроскопии, решают при помощи культуральной диагностики.

Культуральное исследование

Перед посевом патологический материал расщепляют на предметном стекле на мелкие кусочки, затем переносят на поверхность косого агара и располагают на расстоянии 1-2 см друг от друга. Материалом одной пробы засевают две пробирки (волосы) и четыре пробирки (кожные чешуйки). Используют стандартную агаризированную среду Сабуро с 2- 4% глюкозы. Посев производят над пламенем спиртовой горелки платиновой петлей. После нанесения частицы материала на поверхность агара пробирку закрывают обожженной над пламенем пробкой. Можно использовать для посева чашку Петри. Посев инкубируют при температуре 28ºС.

^ Microsporum canis. Рост колонии (основного возбудителя микроспории) отмечается на 3-ий день после посева. К 10-му дню колония достигает диаметра 4-5 см и представлена плоским диском с радиальными бороздами, покрытыми беловатым, нежным пушком. Обратная сторона колонии имеет желтую окраску. При росте в пробирке колония лучиками стелется по ее стенкам.

При микроскопическом исследовании мицелий длинный, прямой, много веретенообразных толстостенных макроконидий с пятью и более камерами. Микроконидии, напротив, не многочисленны и располагаются вдоль нитей мицелия.

^ Microsporum ferrugineum. Колония формируется к 10-му дню и представлена округлым плоским диском с немногочисленными радиальными бороздами, серовато-белого или бледно-кремового цвета. Поверхность колонии пушистая. Иногда имеется центральное возвышение. Окраска обратной стороны варьирует от коричневой до оранжевой.

Посев на жидкую питательную среду. Пробирку с исследуемым материалом и пробирку с питательной средой держат слегка наклонно в левой руке между большим и указательным пальцами так, чтобы края пробирок были на одном уровне (пробирка с исследуемым материалом должна быть первой по отношению к работающему). В правую руку берут бактериологическую петлю (иглу или пипетку) как писчее перо. Пробки от пробирок прижимают мизинцем к ладонной поверхности правой кисти, в зоне пламени горелки пробирки открывают, края пробирок обжигают. Петлю вертикально прокаливают в пламени горелки. Простерилизованную петлю (иглу, пипетку) вводят через пламя горелки в пробирку с посевным материалом. Петлю охлаждают, забирают небольшое количество материала, переносят в пробирку со стерильной питательной средой. Материал стряхивают в среду или, слегка погружая в жидкость петлю, растирают посевной материал по стенке пробирки не касаясь среды держателем, после чего смывают его средой. Края пробирок и пробки вновь проводят над пламенем горелки, закрывают пробирки пробками, стерилизуют петлю и ставят ее в штатив или стакан. При посеве материала с помощью пипетки использованную пипетку опускают вниз концом в банку с дезинфицирующим раствором.

Посев на плотную питательную среду. Посевы выполняют разными способами. Эти способы основаны на том, что микроорганизмы иммобилизуются на поверхности или в глубине плотной среды.

Посев в пробирку. Материал, забранный петлей, опускают до дна пробирки со скошенным агаром, погружают в конденсационную жидкость и зигзагообразными движением петлей проводят снизу вверх, слегка касаясь поверхности среды (посев штрихом). При посеве материала уколом в столбик среды, петлей с материалом или иглой прокалывают вертикально по центру пробирки питательную среду, петлю или иглу вынимают, прожигают. (Правила работы с пробирками и петлей при посеве в пробирку с плотной средой аналогичны правилам при посеве на жидкие питательные среды).

Посев на чашку Петри. Чашку берут в левую руку, большим пальцем левой руки слегка приподнимают крышку, чтобы в об­разовавшуюся щель свободно проходили петля или шпатель, обжигают на пламени горелки края чашки в зоне щели, вносят посевной материал на поверхность питательной среды, затем растирают его при помощи стеклянного шпателя или бактериологической петли.

Посев петлей:

1.Посев штрихом. Посевной материал втирают петлей в поверхность среды у края чашки, избыток снимают, проколов агар. Оставшийся материал растирают параллельными штрихами по поверхности среды.

2. Посев петлей на секторы: дно чашки расчерчивают на секторы, посев производят зигзагообразными движениями от края чашки к центру так, чтобы штрихи с одного сектора не переходили на другой.

3. Дробный посев: бактериологической петлей с посевным материалом несколько раз делают параллельные штрихи в одном секторе чашки Петри, петлю прожигают в пламени горелки, дают остыть и часть материала из первого сектора (А) распределяют во втором секторе (В) аналогичным способом, затем в третьем (С) и четвертом (Д) секторах.

Посев шпателем. Материал наносят на поверхность среды петлей или пипеткой, затем стеклянным или металлическим шпателем тщательно втирают по всей поверхности агара, вращая полуоткрытую чашку. После посева стеклянный шпатель помещают в дезинфицирующий раствор, металлический – прокаливают в пламени горелки.

Посев тампоном. Тампон с исследуемым материалом вносят в чашку и круговыми движениями втирают его содержимое в поверхность среды, одновременно вращая тампон и чашку.

Посев газоном. 1 мл исследуемого материала (жидкая бульонная культура или взвесь микробов в физиологическом растворе) наносят пипеткой на поверхность среды и тщательно распределяют жидкость по всей поверхности чашки. Избыток материала отсасывают пипеткой и вместе с ней помещают в дезинфицирующий раствор.

Посев уколом. Посев уколом в агар столбиком (прямой агар) при­меняется для выращивания анаэробов или выявления характерного признака микроба, так как рост по уколу типичен для ряда бактерий. Посев уко­лом в полужидкий агар практикуется также с целью длительного хра­нения культур. При посеве уколом в столбик желатина наблюдается разжижение ее бактериями, обладающими протеолитическим ферментом. Посев уколом в столбик питательной среды производят в пробирку со средой, застывшей в виде столбика. Пробир­ку берут в левую руку, как обычно, вынимают пробку и обжигают край пробирки, и в центре столбика питательной среды сверху вниз почти до самого дна пробирки вкалывают петлю с находящимся на ней мате­риалом.

Читайте также: