Посев на вирус гриппа

Обновлено: 05.07.2024

Диагностика гриппа. Лечение гриппа. Профилактика гриппа.

Материалы для исследования при гриппе — смывы и мазки из носоглотки, мазки-отпечатки из носовой полости и кровь.

Основные методы диагностики гриппа — вирусоскопические, вирусологические и серологические. К методом экспресс-диагностики гриппа относят определение Аг вируса в мазках-отпечатках из носа и смывов носоглотки в РИФ и ИФА.

Выделение возбудителя гриппа проводят заражением 10-11-суточных куриных эмбрионов или, реже, различных клеточных культур. Вирусы гриппа проявляют слабый цитопатический эффект и чаще определяют феномен гемадсорбции. Типовую принадлежность вирусов идентифицируют в РСК; подтип гемагглютинина — в РТГА (вирусы гриппа агглютинируют эритроциты человека и различных животных); подтип нейраминидазы — в реакции ингибирования активности фермента.

Лечение гриппа

Препараты выбора при лечении гриппа —- амантадин или ремантадин, ИФН и его индукторы, противогриппозный у-глобулин. Терапевтические мероприятия следует начинать как можно раньше.

Профилактика гриппа. Иммунопрофилактика гриппа.

Разработаны методы активной и пассивной иммунопрофилактики гриппа. Для пассивной иммунизации применяют противогриппозный иммуноглобулин человека, приготовленный из крови доноров, иммунизированных гриппозными вакцинами.

Для активной иммунизации против гриппа применяют живые и инактивированные вакцины. Живые аттенуироеанные вакцины проявляют большую иммуногенность. Инактивированные вакцины включают вирионные (приготовлены из высоко-очищенных культур вирусов), субвирионные или расщеплённые (получают обработкой высоко-очищенных культур вирусов детергентами), субъединичные (содержат только гемагглютинин и нейраминидазу) препараты. Вакцинацию осуществляют в периоды наибольшего риска развития эпидемий. Она в большей степени показана лицам младшего и преклонного возраста, страдающим обструктивными лёгочными и сердечно-сосудистыми заболеваниями, а также сотрудникам ЛПУ.

Применение убитых вакцин от гриппа требует ежегодной ревакцинации; их эффективность не превышает 60-70%. Поскольку антигенные вариации возбудителя наблюдают часто, то набор Аг соответствующего вируса для иммунизации может быть определён только после начала вспышки заболевания.

Инфекции, которые поражают респираторную инфекцию, которые вызваны вирусами (ОРВИ, грипп) - наиболее распространенная группа инфекционных заболеваний . Они регулярно встречаются у большинства людей, имеют характерные признаки и механизм развития. Вирусов, которые могут вызвать данную патологию - больше 200. В зависимости от вида вируса, его активности и состояния пациента, болезнь может протекать по разному: от легких до отягощенных форм. Наиболее опасным в данном плане является грипп - он может давать осложнения на различные органы и системы. Диагностика вирусных инфекций дыхательной системы крайне важна в эпидемиологическом плане, а также для подтверждения диагноза. Используются различные методы, выбор которых зависит от конкретного клинического случая.

ОРВИ и грипп имеют респираторные симптомы и общие. Их можно распознать по катаральным признакам со стороны дыхательных путей и общей симптоматике, характерной для большинства заболеваний.

Современные методы диагностики данной группы заболеваний

Различают несколько видов диагностики, которые различаются по особенностям проведения и методу выявления возбудителя. Это:

экспресс-методы;
серологическая диагностика;
вирусологическая диагностика.

Первая группа - экспресс-методики. Это быстрый способ подтвердить или исключить наличие болезни. Используется метод флюоресценции и ПЦР. Рассмотрим их подробнее.

Изучение флюоресцирующих антител - МФА. Способ основан на определении антигенов к вирусу в эпителиальных клетках носовой слизистой, на конъюнктиве (если есть глазные поражения). Антитела при действии антигена реагируют специфическим свечением, которое легко заметить при микроскопическом исследовании. Этот параметр считается маркером диагностики и является основой для подтверждения результата. Способ имеет диагностическую ценность начиная с 3 и заканчивая 5 днем заболевания. Чувствителен к таким антигенам: вирус гриппа типа А, В, вирус парагриппа, аденовирусы и возбудитель РС-инфекции. Это удобный и быстрый метод, не требующий особых ресурсов, который часто применяется в ходе диагностики.

Метод полимеразно-цепной реакции базируется на основе обнаружения участков нуклеиновых кислот генетического материала вируса и определении их групповой принадлежности по этому критерию. Методика имеет высокую диагностическую ценность, является современным и качественным способом подтверждения заболевания. Считается “золотым стандартом” диагностики, так как не дает ложных результатов и является специфическим для определения конкретных патогенов, широко применяется в стационарных и амбулаторных условиях.

Вирусологические методики основаны на чистом выделении вирусных микроорганизмов и их конкретных штаммов, за чем следует их прикрепление к клеточным культурам в лабораторных условиях. Далее следует определение вида вируса с помощью ПЦР или других реакций. Метод требует значительных ресурсов, довольно длительный и трудоемкий. Его ценность заключается в получении эпидемиологических данных и основе для научных работ. То есть, детальное изучение вируса, частоты его распространения позволяет прогнозировать эпидемическую картину, создавать вакцины. Для исследования берется мазок из носа и носоглотки. Материал пригоден в течении 3-5 дня заболевания. С помощью вирусологических методов можно определить такие возбудители:

Серологические методы диагностики - это ретроспективное исследование, которое дает точные данные относительно стадии процесса, степени активности и типа возбудителя. Используется для эпидемиологических целей.

Для анализа используется сыворотка крови, в которой необходимо определить количество и виды антител. Используется известный антиген вируса. При возникновении реакции с материалом пациента формируются иммунные комплексы антиген-антитело, что подтверждает диагноз. Для диагностики также важен прирост титра антител, для чего используются парные сыворотки.

Результат имеет высокую точность и может определиться даже если все другие методы не дали результата, так как имеет высокую чувствительность. особенно важно использование метода для стертых форм с минимальными клиническими проявлениями. Сыворотки для анализа берутся в начале болезни, а также через 10-14 дней после её завершения. Используется метод для подтверждения наличия в организме таких возбудителей: вирусы гриппа А, В, возбудители парагриппа, аденовирусы и РС-вирусы.

Наличие вируса гриппа можно подтвердить с помощью РТГА - реакции торможения геммааглютинации. Метод основан на свойстве снижения гемагглютинирующих способностях вируса, если в крови есть антитела к нему. Для этого используется кровь с эритроцитами, антиген. Препараты крови берутся парными, в начале болезни, и в период выздоровления. Метод имеет высокую диагностическую ценность, точный и чувствительный.

Виды исследуемого материала и особенности сдачи

Для диагностики используются смывы из носа, мазки из носовых ходов, носоглотки, а также препараты крови.

Забор мазка и смыва проводит медицинский персонал. Он следит за тем, чтобы препараты строго соответствовали должной локализации. Забор проходит в чистых условиях, стерильными инструментами и в стерильную тару. До того, как взять мазки пациента просят высморкаться, чтобы очистить носовые ходы от слизи. Зонд вводится легко, на глубину 2-3 см. Проводится стандартное движение по нижней части носового хода и под раковиной носа. Необходимо, чтобы забор происходит в современной клинике, где есть возможность правильно хранить и транспортировать собранный материал в короткий срок до лаборатории.

Мазок из глотки берется по похожей методике, чтобы затронуть те участки слизистой, на которой скапливается возбудитель. Перед забором необходимо легко прополоскать рот, чтобы взятый материал был чистым. Желательно забирать материал на 3-й день после начал болезни.

Нормы и отклонения от них, расшифровка результатов

Экспресс-тест дает результаты сразу после диагностики, его расшифровка не вызывает трудностей, так как определяет наличие вируса или его отсутствие в организме.

Серологические реакции более сложные и могут расшифровываться по разному: наличие антител класса М говорит об острой стадии процесса, антитела G формируются при хроническом течении.

Сроки готовности результатов

Результаты исследования готовы на 1-2 день после сдачи. Экспресс-тест дает результат сразу. Серологические методы требуют больше затрат времени для сравнения титров антител. Более быстрые методы важны для диагностического процесса, а те, что более затратны - для эпидемиологического и научного исследования.

Скорость диагностики зависит от правильности сдачи препаратов, условий лаборатории, качества реактивов.

Вовремя сданный анализ позволяет точно и быстро определить диагноз. Это - залог правильного и эффективного лечения. Если болезнь запустить, она грозит осложнениями, которые особенно опасны, если у человека грипп. Это актуально для детей, пожилых людей, беременных женщин и лиц с дефицитом иммунной системы, ведь осложнения чаще всего проявляются у них.

Лаборатория АО "СЗЦДМ" предлагает услуги, обеспечивающие комплексное и преемственное лабораторное обследование пациента

Диагностика В медицинских центрах АО "СЗЦДМ" проводят качественные диагностические исследования всего организма

Лечение Наши медицинские центры ориентированы на обслуживание пациентов в амбулаторном режиме и объединены единым подходом к обследованию и лечению пациентов.

Реабилитация Реабилитация - это действия, направленные на всестороннюю помощь больному человеку или инвалиду для достижения им максимально возможной полноценности, в том числе и социальной или экономической.

Профосмотры АО "СЗЦДМ" проводит профилактические осмотры работников, которые включают в себя - комплексы лечебных и профилактических мероприятий, проводимых для выявления отклонений в состоянии здоровья, профилактики развития и распространения заболеваний.

Среди возбудителей острых респираторных заболеваний эти наиболее многочисленны. Грипп вызывают более 2000 штаммов семейства ортомиксовирусов, различных по контагиозности и тяжести клинического течения.

Строение вирусов

У всех возбудителей строение нуклеопротеидов неизменно, но нейраминидаза и гемагглютинин регулярно мутируют. Изменчивость антигенов обеспечивает инфекции формирование новых штаммов и сохранение поражающей способности от сезона к сезону. Так называемый антигенный дрейф делает невозможным формирование длительного иммунитета от гриппа.

Обозначения штаммов содержат основную информацию о геноме:

тип нуклеопротеида: (А, В или С);

строение гемагглютинина: (буква H с числом);

строение нейраминидазы (буква N с номером).

Например, пресловутый свиной грипп обозначают как А(H1N1). Кроме того, в расширенном обозначении указывают год и регион выявления штамма.

Свойство мутировать позволяет человеческим вирусам обмениваться белками с дикими патогенами и образовывать новые формы. Это происходит приблизительно каждые 10–40 лет. Гибриды вирусов животных и людей отличаются высочайшей патогенностью и заразностью, провоцируя масштабные пандемии.

Можно ли определить вирусы гриппы по симптомам

Клиническая картина при гриппе отличается от других ОРВИ. У этой болезни очень короткий продромальный период, так как инфекция внедряется в организм и размножается стремительно. Симптомы развиваются спустя несколько часов или сутки с момента заражения. Грипп практически сразу вызывает резкий подъем температуры, мышечную слабость, сильную головную боль. Мокрый кашель и насморк для него нехарактерны, но чаще, чем при ОРЗ, возникают конъюнктивит, бронхит и пневмония.

Многие врачи ставят диагноз больным по имеющимся симптомам, однако без уточнения, какой возбудитель спровоцировал болезнь. В заключении указывают ОРВИ. Определить тип и штамм инфекции возможно только в лабораторных условиях.

Зачем нужно сдавать анализы на грипп

Специфическая диагностика необходима для выявления и изучения новых штаммов вирусов, скорости их распространения, мутирования, для прогнозирования эпидемиологической обстановки в регионах, улучшения качества лечения. Без ее проведения больным неоправдано назначение по-настоящему эффективных противовирусных медикаментов: препараты озельтамивира и занамивира. Они подавляют активность штаммов А — самого распространенного типа. Но почти не действуют при серотипах В и С. Кроме того, ослабление имммунитета часто провоцирует присоединение вторичных бактериальных инфекций, требующих дополнительного применения антибиотиков.

Назначение медикаментов вслепую затягивает время, в течение которого больному могла бы быть оказана другая помощь. По этим причинам были разработаны несколько принципиально различных видов диагностики.

Как проводят тестирование на наличие гриппа

Для исследование необходим биоматериал больного: соскобы и мазки со слизистых носоглотки. Реже РНК вируса выделяют из крови или спинномозговой жидкости. Высокую точность обеспечивает тестирование свежих проб: не позднее третьих суток с момента появления симптомов.

Для быстрого определения серотипов применяются экспресс-методы диагностики:

иммунохроматографический (ИХА): клетки биоматериала помещаются в тестовую систему с реагентами, в течение 10 минут имеющиеся ключевые антигены избирательно связываются со специфическими антителами;

прямая реакция иммунофлюоресценции: на культуры исследуемых клеток наносят люминесцентный состав, выявляющий маркеры инфекции, через 2–3 часа результат изучают в специальный микроскоп.

Культуральное исследование — посев клеток биоматериала в ткани куриных эмбрионов применяется редко. Этот вид диагностики довольно точен и доступен, но длительность получение результата — до 7 дней, делает его малорациональным.

ПЦР-диагностика (метод полимеразной цепной реакции) наиболее информативна. С ее помощью можно определить серотип и штамм вируса гриппа в течение нескольких часов. Из-за дороговизны оборудования и трудоемкости этот анализ чаще применяется в рамках изучения эпидемических возбудителей. Для качественного исследования в отдельных случаях применяют экспресс-диагностику или ИФА. Дифференциации серотипа А от В и С для врача бывает достаточно, чтобы сориентироваться в выборе медикаментов и схем лечения.

Все представленные на сайте материалы предназначены исключительно для образовательных целей и не предназначены для медицинских консультаций, диагностики или лечения. Администрация сайта, редакторы и авторы статей не несут ответственности за любые последствия и убытки, которые могут возникнуть при использовании материалов сайта.

Студент медицинского факультета УЛГУ. Интересы: современные медицинские технологии, открытия в области медицины, перспективы развития медицины в России и за рубежом.

Запись опубликована: 15.09.2020
Время чтения: 2 mins read

Вирус гриппа долгое время представляет постоянную угрозу для здоровья населения. Вспышки инфекции убивают тысячи и госпитализируют миллионы людей. В статье рассматривается этиология этой вирусной инфекции, текущая эпидемиологическая ситуация, методы, используемые для диагностики более сложных случаев.

Этиология

Вирус гриппа, принадлежащий к семейству Orthomyxoviridae , структурно делится на 3 основных типа – A, B и C. Это имеет особое эпидемиологическое значение: многие вспышки и эпидемии гриппа вызываются первыми двумя типами, последний тип чаще всего связан с легкими спорадическими инфекциями верхних дыхательных путей.

Вирус гриппа, принадлежащий к семейству Orthomyxoviridae

Этот РНК-вирус имеет оболочку, на поверхности которой обнаруживаются 2 основных гликопротеина, участвующих в патогенезе – гемагглютинин (H или HA) и нейраминидаза (N или NA).

Вирус гриппа A характеризуется 16 часто изменяющимися гемагглютининами (H1 – H16) и 9 различными нейраминидазами (N1 – N9). В зависимости от различных комбинаций этих белков вирус гриппа A делится на подтипы (например, H1N1 или H3N2). Интересно, что номенклатура этих вирусов может быть даже более подробной в зависимости от таких переменных, как местоположение или год, например, Perth / 2009 (H3N2).

Хотя структура вируса гриппа B схожа, у него нет подтипов – антигены НА и NA на сегодня в основном не изменились.

Эпидемиология

Средний мировой уровень смертности от вируса гриппа составляет 13,8 случая на 100000 случаев. С каждым годом гораздо более высокие показатели наблюдаются среди групп повышенного риска, особенно пожилых людей: в этой популяции показатели почти в 3 раза выше – 38,5 случая на 100 тыс.

Диагностика

Из-за того, что течение болезни самоограничивается, эпидемиологических и клинических данных для подтверждения многих диагнозов гриппа достаточно.

В более сложных клинических случаях могут использоваться лабораторные медицинские методы, такие как полимеразная цепная реакция (ПЦР) и быстрые тесты на грипп. Реже, если лечащий врач считает, что результаты могут быть значимыми для назначения лечения, применяется выделение вируса и рост в культуре клеток.

Диагностика гриппа методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Клиника

По клинической картине можно выделить 2 группы этого заболевания – неосложненный и осложненный грипп. Гораздо более распространенный неосложненный вариант проявляется:

острыми системными симптомами: лихорадка, головная боль, мышечные боли;
респираторными симптомами – боль в горле, непродуктивный кашель и т.д.

У детей часто также диагностируются желудочно-кишечные симптомы – рвота или диарея. Важно помнить, что не у всех инфицированных людей клинические симптомы очевидны. В сезон гриппа до 75% случаев заражения сезонным гриппом протекают бессимптомно.

В некоторых случаях заболевание может осложняться как самим вирусом гриппа, так и вторичной, обычно бактериальной, инфекцией, например, S. pneumoniae или S. aureus. Типичное клиническое проявление последнего – пневмония , но сообщалось о ряде случаев энцефалита или миокардита, часто приводящих к смерти. В случае гибели эта вирусная инфекция очень редко определяется как ведущая причина.

Пневмония

Осложнения инфекции могут возникнуть у любого пациента, но чаще всего госпитализируются пожилые люди (≥65 лет, 309 случаев на 100 тысяч) и младенцы (151 случай на 100 тысяч). Это можно объяснить неадекватностью иммунной системы: у пожилых людей снижают устойчивость к любой форме инфекции сопутствующие заболевания, а новорожденные часто еще не приобрели иммунитет к антигену.

Помимо этих факторов риска, риск осложнений увеличивается у пациентов любого возраста с множественными патологическими хроническими патологическими процессами, например, хронической почечной недостаточностью, церебральным параличом, патологическим ожирением (ИМТ> 40) и при приеме иммунодепрессантов. Беременность также может быть классифицирована как фактор относительного риска: повышенный риск госпитализации по поводу респираторного заболевания наблюдается во время беременности именно в сезон гриппа.

Экспресс-тесты на грипп

Экспресс-тесты для диагностики гриппа, основанные на обнаружении вирусных антигенов, превосходят все другие практические методы – результаты достигаются менее чем за 30 минут. Самый распространенный метод – иммунологическое исследование респираторного секрета. Это исследование довольно конкретное. Недостаток – тест может определить тип (А или В) вируса гриппа, но не подтип.

Экспресс-тест на грипп

Чувствительность этого теста очень неоднородна. По сравнению с культурой клеток – золотым стандартом лабораторной диагностики гриппа, эти значения варьируются от 4,4 до 80%, в зависимости от популяции пациентов и исследуемого вещества. Важно отметить, что чувствительность исследования также зависит от возраста – у детей она выше. Кроме того, более высокий уровень вируса в организме в начале заболевания повышает вероятность получения положительного результата теста.

Поскольку рентабельность имеет решающее значение для каждого лечебного учреждения, некоторые ученые попытались оценить эту ситуацию, которая часто возникает в системе первичной медико-санитарной помощи. Но в настоящее время общего вывода нет. Некоторые исследования показывают, что наиболее рентабельной стратегией является рутинная клиническая оценка и своевременная противовирусная терапия.

Молекулярные исследования

Поскольку список вариантов методов диагностики гриппа относительно невелик, утверждается, что молекулярное тестирование должно стать золотым стандартом для лабораторной диагностики гриппа. Хотя в настоящее время разрабатывается ряд методов амплификации генетического материала, большинство исследований, особенно в клинико-диагностических лабораториях, основываются на методе ПЦР.

Поскольку эти тесты могут обнаруживать более одного антигена за раз, в отличие от экспресс-тестов, можно определить как тип, так и подтип вируса. Кроме того, это, пожалуй, наиболее подходящее исследование динамики вируса гриппа: легко идентифицировать часто изменяющиеся и возникающие подтипы вируса гриппа А, и его важность была особенно очевидна во время пандемии гриппа 2009 г.

Преобладающее мнение в сообществе профессионалов здравоохранения – что этот метод также более чувствителен, чем культура клеток, из-за возможности обнаружения в исследуемом веществе даже нежизнеспособных форм вируса. Наиболее точные результаты дает взятие мазка из носоглотки.

Лечение

В большинстве случаев сезонного гриппа достаточно симптоматического лечения, снимающего температуру, заложенность носа, головную и мышечную боль, и отдыха дома, чтобы свести к минимуму контакт с окружающими. Важно предупредить пациентов и их родственников, что в случае ухудшения состояния необходимо повторно обратиться к врачу.

Ранние противовирусные препараты (амантадин и римантадин ) в настоящее время чаще используются в качестве антагонистов рецепторов NMDA для облегчения двигательных симптомов болезни Паркинсона и действуют исключительно как ингибиторы протонного канала M2 вируса гриппа А. С 2009 г. большинство (> 99%) вирусов гриппа А устойчивы к этим агентам, и их использование не рекомендуется.

Римантадин

В настоящее время наиболее часто назначаемые препараты для лечения и профилактики гриппа в Европе – это осельтамивир и занамивир. Они эффективны при лечении гриппа A и B. Важно отметить, что у людей со здоровой иммунной системой ингибирующие репликационные эффекты этих препаратов ограничены и не оказывают заметного эффекта.

Исследований, показывающих использование противовирусных препаратов более чем через 48 часов с момента появления симптомов нет. Но доказано, что наибольший эффект достигается при применении лекарств в течение первых 24 часов. Лечение рекомендуется как детям, так и взрослым с объективно подтвержденной вирусной инфекцией гриппа, которые соответствуют следующим критериям:

Лица из группы высокого риска с лабораторно подтвержденной или клинически подозреваемой инфекцией вируса гриппа, если клинические симптомы проявились менее чем за 48 часов до этого.
Госпитализированные пациенты, у которых диагностирована лабораторно подтвержденная или клинически подозреваемая вирусная инфекция гриппа, если клинические симптомы появляются менее чем за 48 часов до этого.
Амбулаторные пациенты из групп высокого риска, у которых клиническое состояние не улучшается самопроизвольно, или те, кто получил положительные результаты экспресс-теста на вирус гриппа через 48 часов с момента появления симптомов.

В США и Японии заболеваемость гриппом постепенно увеличивается из-за высокого уровня использования осельтамивира. Преобладающий подтип – замена бывшего A (H1N1) на A (H1N1) pdm09, впервые выявленный во время пандемии 2009-2010 гг. В Европе ситуация лучше – отмечаются единичные случаи резистентности к осельтамивиру. За этим внимательно следят органы общественного здравоохранения, а текущую устойчивость можно проверить в еженедельных обновлениях новостного портала Flu News Europe.

Профилактика – вакцинация

Ежегодная вакцинация против гриппа – наиболее эффективная часть стратегии профилактики гриппа . Из-за высокой частоты мутаций в вирусах гриппа, новые генотипические варианты которых часто легко поражают иммунную систему организма, каждый год выпускаются уникальные вакцины, основанные на глобально распространенных фенотипах вирусов.

Ежегодная вакцинация – наиболее эффективная часть стратегии профилактики гриппа

Для сезона гриппа в Северном полушарии 2019–2020 годов Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) и Центр профилактики и контроля заболеваний Европейского союза (ECDC) рекомендуют инактивированную четырехвалентную вакцину со следующим антигенным составом:

вирус, схожий с A / Brisbane / 02/2018 (H1N1) pdm09;
вирус, схожий с A / Kansas / 14/2017 (H3N2);
вирус, схожий с B / Colorado / 06/2017 (строка B / Victoria / 2/87);
вирус, схожий с B / Phuket / 3073/2013.

В 2011 году в Европейском Союзе против гриппа также были одобрены для детей и подростков живые аттенуированные вакцины. Важно помнить, что из-за большого разнообразия вариабельных антигенов вакцинация в данном случае не является максимальной защитой от инфекции.

Химиопрофилактика

Предэкспозиционная профилактика гриппа с помощью противовирусных агентов может проводиться в течение более коротких или более длительных периодов, если ожидается неизбежное воздействие, например, у медицинских работников.

Постконтактная химиопрофилактика должна основываться как на инкубационном периоде от 1 до 4 дней (следовательно, не более 10 дней), так и на индивидуальных факторах риска и продолжительности воздействия.

Средства индивидуальной защиты

Помимо вакцинации и профилактического применения противовирусных препаратов, для обеспечения здоровья населения могут использоваться средства индивидуальной защиты:

Гигиена рук: мытье водой с мылом не менее 40-60 секунд, особенно после кашля или чихания, обработка спиртовыми дезинфицирующими средствами;
Предотвращение инфекции и заражения: прикрывать рот и нос при кашле или чихании, избегать контакта с больными людьми (например, не трогать глаза, нос или рот, держаться на расстоянии не менее одного метра от пациента, избегать массовых мероприятий; если это не удается, минимизировать время воздействия);
Ранняя изоляция дома тех, у кого появились первые симптомы заражения вирусом гриппа .

Все эти методы снижают риск передачи вируса гриппа, но имеющиеся на данный момент доказательства считаются слабыми. Хотя эксперты видят преимущества этих действий, рандомизированные лабораторные исследования подтвердили, что существенной разницы добиться нельзя. Единственное исключение – ношение больных медицинских масок, которые помогают снизить риск заражения при тесном контакте.

Резюме

Из-за глобализации и экспоненциально растущего населения мира люди стали жить теснее, путешествуя на большие расстояния. Другими словами, штаммы вирусов гриппа A и B, преобладающие на одном континенте или даже в стране, могут распространиться по миру всего за несколько дней. В этих условиях возможность новой пандемии – это уже вопрос времени, а не обстоятельств.

Медицинские работники обязаны предотвратить это, сначала с помощью профилактики, а затем с помощью эффективных методов диагностики и лечения. До сих пор оставались наиболее эффективным методом профилактики вакцины. Соблюдение гигиенических норм, хотя и выглядит привлекательным способом предотвращения инфекции, не подтверждается убедительными доказательствами.

В более простых случаях для постановки диагноза достаточно точного анамнеза и клинического обследования. Для диагностики более сложных случаев можно использовать быстрые иммунологические и точные молекулярные тесты.

Поскольку ранние противовирусные препараты не рекомендуются из-за широко распространенной вирусной резистентности, в клинической практике препаратами первого ряда остаются препараты, снимающие симптомы.

ФБУН Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, Москва

Лабораторная диагностика гриппа и других ОРВИ методом полимеразной цепной реакции

ФБУН Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, Москва

БАЛ — бронхоальвеолярный лаваж

ВКО — внутренний контрольный образец

ВОЗ — Всемирная организация здравоохранения

ДНК — дезоксирибонуклеиновая кислота

кДНК — комплементарная ДНК

К– — отрицательный контроль

К+ — положительный контроль

МАНК — методы амплификации нуклеиновых кислот

МР — методические рекомендации

МУ — методические указания

НК — нуклеиновая кислота

ОКО — отрицательный контрольный образец

ОРВИ — острая респираторная вирусная инфекция

ОРЗ — острое респираторное заболевание

ОТ — обратная транскрипция

ПК — положительный контроль

ПКО — положительный контрольный образец

ПЦР — полимеразная цепная реакция

РНК — рибонуклеиновая кислота

СанПиН — санитарные правила и нормы

ТОРС — тяжелый острый респираторный синдром

УФ — ультрафиолетовое излучение

hAdv — Human Adenovirus

hBov — Human Bocavirus

hCov — Human Coronavirus

hPiv — Human Parainfluenza virus

hRSv — Human Respiratory Syncytial virus

hRv — Human Rhinovirus

MERS — Middle East Respiratory Syndrome

MMlv — название фермента для обратной транскрипции

RT — Reverse Transcrption

SARS — Severe Acute Respiratory Syndrome

Оценка уровня доказательности и значимости рекомендаций производилась в соответствии с данными, изложенными ниже.

Оценка уровня доказательности

Качество доказательности рекомендации

Уровни доказательности рекомендаций приводятся при изложении текста ниже.

В методических рекомендациях представлены современные сведения о возбудителях ОРВИ, включая эпидемиологические данные о новых видах вирусов, описанных в последнее десятилетие. Представлен общий методический подход и подробный порядок проведения лабораторного исследования методом ПЦР с целью обнаружения НК гриппа и других значимых возбудителей ОРВИ. Особое внимание уделено описанию перечня биологического материала и правил его получения, упаковки, транспортирования и хранения биологического материала от больных (умерших).

Клинические рекомендации предназначены для специалистов лабораторий, выполняющих работы c использованием методов амплификации НК при исследовании материала, содержащего (подозрительного на содержание) микроорганизмы I—IV групп патогенности (опасности), аккредитованных в установленном порядке и имеющих лицензии на данный вид деятельности в соответствии с законодательством Российской Федерации.

5. Национальный Стандарт Российской Федерации. Лаборатории медицинские. Требования безопасности. ГОСТ Р 52905−2007 (ИСО 15190:2003)

6. Национальный Стандарт Российской Федерации. Лаборатории медицинские. Частные требования к качеству и компетентности. ГОСТ Р (ИСО 15189−2009)

1. Введение

Заболеваемость острыми инфекциями верхних дыхательных путей (ОРВИ) множественной или неуточненной локализации и гриппом в России по данным официальной статистики (форма 1) в совокупности составляет 19—20 тыс. на 100 тыс. населения ежегодно, превышая в десятки раз аналогичные показатели для других инфекционных болезней, и составляет 90% всех регистрируемых случаев инфекционных и паразитарных болезней. Дети дошкольного возраста подвержены острым респираторным заболеваниям (ОРЗ), в среднем, 4—8 раз в год, школьники от 2 до 6 раз в год, взрослые 2—3 раза в год. В контингентах часто болеющих детей эпизоды ОРЗ регистрируются от 10 до 12 раз в год.

В 90% случаев ОРЗ вызывают возбудители ОРВИ, причиной которых могут являться представители 5 семейств вирусов, геном которых представлен молекулой РНК (ортомиксовирусы, пневмовирусы, парамиксовирусы, коронавирусы и пикорнавирусы) и 2 семейств вирусов, геном которых представлен молекулой ДНК (аденовирусы, парвовирусы). Ведущее место среди острых инфекций дыхательных путей занимает грипп, возбудитель которого периодически вызывает пандемии, последняя из которых наблюдалась в 2009—2010 гг. Эпидемии гриппа охватывают от 5 до 20% населения, приводят к госпитализации порядка 3 млн человек и вызывают до 250—500 тыс. летальных исходов в мире ежегодно (CDC. MMWR, 2010). У взрослых больных гриппом в 10—15% случаев развиваются осложнения, причем 80% из них приходится на пневмонию. При развитии пневмонии у детей вирусы гриппа обнаруживают в 7—22% случаев. Возбудители гриппа относятся к семейству Orthomyxoviridae, в котором выделяют три рода — Influenzavirus A, Influenzavirus В и Influenzavirus С, каждый из которых имеет по одному виду — Influenza A virus, Influenza В virus и Influenza С virus.

Вирусы гриппа, А (Influenzavirus A), широко распространены в природе, их выделяют от большинства зверей и птиц, и по этой причине, они имеют высокий пандемический потенциал, так как способны преодолевать межвидовые барьеры. Способность вирусов гриппа, А к быстрому накоплению мутаций, изменяющих их антигенные свойства, лежит в основе их высокого эпидемического потенциала. Вирусы гриппа, А в настоящее время дифференцируют (типируют) с помощью генетических методов на подтипы (или субтипы) в соответствии с генетической структурой генов гемагглютинина (HА) на 16 субтипов и нейраминидазы (NА) на 9 субтипов. В 2013 г. при скрининге у летучих мышей в Центральной Америке и Перу были обнаружены новые субтипы вирусов гриппа, обозначенные как H17N10 и H18N11. Значительную обеспокоенность вызывает циркуляция в природе патогенных для человека вирусов гриппа птиц. Регистрируются крупные эпизоотии, вызванные вирусами гриппа субтипов H7 и H9, сопровождаемые заболеванием людей (Гонконг — H9N2, 1998—1999 гг., Нидерланды-H7N7, 2003 г.), в ряде случаев с летальным исходом. С 2005 г. эпизоотии гриппа H5N1, повлекли за собой заболевания людей в десятке стран мира с летальностью 60%. В июне 2013 г. ВОЗ сообщила о 132 лабораторно подтвержденных случаях инфекции, вызванной вирусом гриппа A/H7N9, включая 37 случаев, закончившихся летально. Таким образом, на настоящее время актуален мониторинг вирусов гриппа, имеющих в геноме сегмент, кодирующий НА субтипов H5, H7 и H9.

Вирусы гриппа В выделяют только от людей. Наряду с гриппом А, они занимают значительную долю в структуре летальности при гриппе у детей. Так, в США в сезоне 2010—2011 гг. вирус гриппа В стал причиной 38% случаев летального исхода от гриппа у детей, заняв в структуре циркулирующих вирусов гриппа 26% (CDC. MMWR., 2011).

У людей вирусы гриппа С вызывают спорадические ОРЗ. Среди животных вирусы гриппа С выделяют от свиней, при экспериментальном заражении заболеванию подвержены собаки. Вирусы гриппа А, В и С дифференцируют друг от друга с помощью иммунологических и МАНК.

Помимо гриппа, причиной ОРЗ являются: пневмовирусы: респираторно-синцитиальный вирус (Human Respiratory syncytial virus) и метапневмовирус человека (Human Metapneumovirus), парамиксовирусы — 4 вида (1—4) вирусов парагриппа (Human Parainfluenza virus 14), коронавирусы (Human Coronavirus 229E, Human Coronavirus OC43, Human Coronavirus NL63, Human Coronavirus HKUI), риновирусы (Rhinovirus) виды А, В, С, относящиеся к пикорнавирусам, аденовирусы (Human mastadenovirus) виды B, C, E, бокавирус человека (Human bocavirus), относящийся к парвовирусам. Все вышеперечисленные вирусы вызывают ОРЗ среди всех возрастных групп, за исключением бокавируса человека, инфицирующего только детей. У лиц со сниженной активностью иммунной системы, причиной ОРЗ могут быть также энтеровирусы, вирусы герпеса, цитомегаловирус. Дифференциальная диагностика гриппа и других ОРВИ возможна только с помощью лабораторных методов исследования.

Респираторно-синцитиальный вирус (hRSv, РС-вирус) является основным возбудителем бронхиолитов и пневмоний у младенцев и детей младшего возраста во всем мире (Nair H., Stockman L.J.). Частота hRSv у больных внебольничной пневмонии детей колеблется от 15,7 до 31,8% в зависимости от региона эпидемического сезона и возраста и максимальна у госпитализированных детей первого года жизни (Rohde G.G.U., Harris M.). В группу риска тяжелого течения PC-инфекции входят недоношенные младенцы, дети до 2 лет, дети и взрослые с ослабленной вследствие заболеваний или лечения иммунной системой, пожилые люди (старше 65 лет). В годы эпидемической активности hRSv составляет 44% в этиологической структуре острых бронхитов у госпитализированных детей (Яцышина С.Б., 2008).

Клинико-эпидемиологические исследования инфекции, вызванной метапневмовирусом (hMPv), впервые обнаруженным в 2001 г., демонстрируют сходство клинической картины с RSv-инфекцией. Исследования специфических антител к вирусу в разных популяциях свидетельствуют о широкой распространенности hMPv, практически все дети имеют такие АТ к 5 годам жизни. MPv-инфекция составляет от 5 до 25% случаев госпитализаций с острой инфекцией нижних дыхательных путей детей младшего возраста (Edwards K.M.). Основными диагнозами hMPv-инфекции у детей являются бронхиолиты, пневмония и бронхиальная астма. У детей при пневмонии метапневмовирус обнаруживают в 8—14,5% случаев (Williams J.V., 2010; Rohde G.G.U.). hMPv, как и hRSv, могут служить причиной групповых заболеваний в домах малютки и домах престарелых, вызывая заболевания нижних дыхательных путей (до 79%) и приводя к летальным исходам (до 11%) (CDC. MMWR. 2013).

Вирусы парагриппа (hPiv) разделяют на 4 вида, относящиеся к двум родам: респировирусы (парагрипп 1 и 3) и рубулавирусы (парагрипп 2 и 4). Вирусы парагриппа часто обнаруживаются у детей младшего возраста. Ко второму году жизни каждый ребенок хотя бы один раз переболевает ОРЗ, вызванным вирусами парагриппа. hPiv 2 и 4 чаще обнаруживают у детей первого года жизни по сравнению с другими возрастными группами, где превалируют вирусы парагриппа 1 и 3. Среднегодовая частота обнаружения РНК hPiv у больных ОРЗ составляет около 5% (Яцышина С.Б., 2008, 2013, 2015). При этом в этиологической структуре тяжелых крупов у детей первых лет жизни вирусы парагриппа занимают до 40% (Fields B., 2001). Среди детей с заболеваниями нижних дыхательных путей, госпитализированных в стационары, инфицированные hPiv, составляют около 22% (Weinberg G.A.). Все это ставит вирусы парагриппа на второе место среди возбудителей ОРВИ по частоте госпитализации и тяжести заболевания после респираторно-синцитиального вируса.

Среди аденовирусов (hAdv) выделяют 7 видов: A, B, C, D, E, F, G. В зависимости от вида, аденовирусы вызывают различные инфекционные заболевания: конъюнктивиты и кератоконъюнктивиты (A, D), острые диарейные заболевания (F), гастроэнтериты (G), крупы, гриппоподобные заболевания, бронхиты и пневмонии — B, C, E. Известны случаи бессимптомного носительства hAdv в лимфоидной ткани верхних дыхательных путей на протяжении нескольких месяцев и лет, которые могут быть источником возбудителя. Будучи относительно устойчивыми к химическим и физическим воздействиям, hAdv могут длительное время сохранять стабильность в окружающей среде, и по этой причине, часто вызывают вспышки в детских дошкольных учреждения, домах ребенка, домах престарелых, и прежде всего, в воинских частях, где частота выявления hAdv достоверно превышает таковую у взрослых штатских и детей (Львов Н.И.). При этом заболевание может протекать со случаями пневмонии тяжелого течения, и даже заканчиваться летальным исходом (Яцышина С.Б., 2014).

Коронавирусы (hCov) представляют собой большую разнообразную группу вирусов, которая классифицируется как альфа-, бета-, гамма- и дельта-коронавирусы. Различные виды коронавирусов широко распространены в природе, вызывая различную инфекционную патологию у животных: гастроэнтериты и респираторные инфекции у свиней, инфекционный бронхит у кур, энтериты у собак, инфекционный перитонит у кошек. Как показали исследования последних двух лет, летучие мыши инфицированы разнообразными альфа- и бета-коронавирусами. У человека острую респираторную инфекцию вызывают 4 вида коронавирусов: 229E, OC43, NL63, HKUI, чаще протекающую с поражением верхних дыхательных путей легкой или средней тяжести (Bradburne AF), и в редких случаях — с инфекциями нижних дыхательных путей (Woo PC). Коронавирусы обнаруживаются преимущественно у детей младшего возраста с симптоматикой крупа и ларингита (van der Hoek L.). У детей старшего возраста и у взрослых при коронавирусной инфекции может отмечаться гриппоподобная симптоматика, а также кашель и ринорея.

Самым распространенным возбудителем ОРВИ среди взрослого населения и детей всех возрастных групп являются риновирусы (hRv), вызывающие воспаление слизистой оболочки верхних дыхательных путей с ринореей и кашлем; в качестве осложнения нередко развивается трахеит. Риновирусы, в отличие от других респираторных вирусов, часто обнаруживаются у детей без явно выраженных симптомов острой респираторной инфекции, по разным данным — от 15% (Jansen R.R., 2011) до 27% (Яцышина С.Б., 2016) обследованных. Такую ситуацию можно объяснить длительной (2 нед и более) персистенцией риновирусов в слизистой носоглотки после острой инфекции (Olofsson S., 2011), либо инаппарантной инфекцией, либо обследованием детей, находящихся в инкубационном периоде после инфицирования. Гораздо реже у детей без симптомов ОРЗ в мазках из носо- и ротоглотки выявляются НК коронавирусов (не более 2,6%), вирусов парагриппа (не более 2,4%), респираторно-синцитиального вируса (не более 2,2%), бокавируса (не более 1,2%), вирусов гриппа, аденовирусов и метапневмовируса (менее 1%) (Яцышина С.Б., 2016). Тем не менее, принимая во внимание тот факт, что риновирусы обнаруживают у детей при пневмонии (Kieninger E; Яцышина С.Б., 2016), и экспериментально доказана возможность репликации риновирусов в ткани легких млекопитающих (Schroth M.K.), нельзя недооценивать данный возбудитель как причину поражения нижних дыхательных путей у детей. Среди Rv в настоящее время выделяют 3 вида вирусов: А, В, C и более 100 серотипов, которые предположительно, обладают разной патогенностью.

Бокавирус (hBov), впервые описанный в 2005 г., обнаруживается со среднегодовой частотой 1,5—19% как единственный возбудитель острой инфекции дыхательных путей у детей до 5 лет (Кондратьева Т.Ю.), вызывая лихорадку, кашель, риниты и диарею (Вартанян Р.В.). Помимо этого, бокавирус часто обнаруживается в сочетании с другими возбудителями ОРЗ. При пневмонии у детей бокавирусы обнаруживаются в 4—15% случаев (Honkinen M.; Esposito S.; Яцышина С.Б., 2016). У взрослых, находящихся в тесном контакте с больными детьми, бокавирус может вызывать легкие симптомы ОРЗ (Кондратьева Т.Ю.), в редких случаях вирус обнаруживается при пневмонии на фоне иммунодефицита.

Наиболее тяжело протекают острые инфекции дыхательных путей, вызванные респираторно-синцитиальным вирусом, метапневмовирусом, вирусами парагриппа и коронавирусами, у детей в возрасте до 5 лет, пожилых и у лиц с иммунодефицитом.

Современные данные свидетельствуют, что случаи инфекций нижних дыхательных путей вирусной этиологии не следует рассматривать как единичные или очень редкие. Вирусные возбудители инфекций дыхательных путей обнаруживаются у 10% пациентов ВП, нуждающихся в интенсивной терапии (Harris M.).

Внедрение в клиниках методов ранней этиологической лабораторной диагностики вирусных инфекций позволит клиницистам своевременно применять средства специфической противовирусной терапии, разрабатывать эффективную тактику ведения пациентов с инфекцией определенной этиологии, и тем самым, предотвращать осложнения и летальные исходы.

Читайте также: