Посев на хеликобактер инвитро

Добавил пользователь Алексей Ф.
Обновлено: 19.09.2024

Helicobacter pylori – бактерия, тропная к слизистой желудка и двенадцатиперстной кишки, способная вызывать различные заболевания этих органов. Важность диагностики хеликобактерной инфекции в последнее время возросла, поскольку ее распространенность прогрессивно увеличивается, а сам микроорганизм признан канцерогеном первого порядка (нелеченая инфекция H. pylori может приводить к развитию рака желудка - аденокарциномы и экстранодальной В-клеточной лимфомы). Поэтому своевременная диагностика заболеваний, ассоциированных с хеликобактерной инфекцией, имеет первостепенное значение. Для этого используется ряд методов, которые отличаются чувствительностью, специфичностью и показаниями к назначению. Наиболее распространенными и известными являются ФГДС, биопсия слизистой, уреазный тест, серологические исследования крови на антитела к H. рylori.

Но отдельной проблемой является лабораторный контроль эрадикации хеликобактер. Это связано с тем, что применение инвазивных тестов (ФГДС с биопсией) не всегда возможно, а серологических неэффективно (наличие антител не позволяет сделать вывод о том, является ли именно текущая инфекция причиной наблюдаемых симптомов или речь идет об инфекции в прошлом, возможно уже вылеченной).

Преимущества данного метода:

не требует абсолютно никакого инвазивного вмешательства;

является высокочувствительным и специфичным методом;

является стандартом в диагностике H. pylori у детей и взрослых как до, так и после проведения эрадикационной терапии.

Расходный материал: контейнер для кала.
Хранение: в холодильнике при tº +4 +8 ºС до 72 часов, если исследование в течение этого периода невозможно, пробу необходимо поместить в морозильную камеру при температуре -20 °С.
Транспортировка при tº +2 +8 ºС в термоконтейнерах с охлаждающими элементами.

Общие показания:

Язвенная болезнь желудка и/или 12-перстной кишки.
Язва пищевода.
Неязвенная диспепсия.
Гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь.
Атрофический гастрит.
Подозрение на онкологические заболевания ЖКТ, рак желудка у ближайших родственников.
Диагностика хеликобактерной инфекции в семье пациента с язвенной болезнью.
Профилактические обследования для выявления людей с риском развития язвы или рака желудка.
Оценка эффективности эрадикационной терапии.

Референсные значения: отрицательно.

Важные замечания:

Если при отрицательном результате теста у пациента есть симптомы язвенной болезни желудка или двенадцатиперстной кишки, гастрита, дуоденита, рекомендуется через 2 недели повторить данный анализ или же провести другие исследования на Helicobacter pylori.

отрицательный результат через 4 недели свидетельствует о полном уничтожении инфекции.

Кал собирается после самопроизвольной дефекации в одноразовый контейнер с герметичной крышкой и ложечкой-шпателем для отбора пробы. Следует избегать примеси к калу мочи и отделяемого половых органов. Кал собирают в контейнер в количестве 1/3 объема контейнера.

Важно: Не рекомендовано проводить исследование во время приема антимикробных препаратов, направленных на лечение различных инфекций. Во избежание ложно-отрицательных результатов - исследование целесообразно проводить не ранее 4-х недель после прекращения антибактериальной терапии или 2-х недель после отмены терапии ингибиторами протонной помпы и препаратами висмута.

Несоблюдение правил подготовки к анализу, нарушение техники сбора биоматериала и его хранения.

Helicobacter pylori – бактерия, тропная к слизистой желудка и двенадцатиперстной кишки, способная вызывать различные заболевания этих органов. Важность диагностики хеликобактерной инфекции в последнее время возросла, поскольку ее распространенность прогрессивно увеличивается, а сам микроорганизм признан канцерогеном первого порядка (нелеченая инфекция H. pylori может приводить к развитию рака желудка - аденокарциномы и экстранодальной В-клеточной лимфомы). Поэтому своевременная диагностика заболеваний, ассоциированных с хеликобактерной инфекцией, имеет первостепенное значение. Для этого используется ряд методов, которые отличаются чувствительностью, специфичностью и показаниями к назначению. Наиболее распространенными и известными являются ФГДС, биопсия слизистой, уреазный тест, серологические исследования крови на антитела к H. рylori.

Преимущества данного метода:

не требует абсолютно никакого инвазивного вмешательства;
является высокочувствительным и специфичным методом;
является стандартом в диагностике H. pylori у детей и взрослых как до, так и после проведения эрадикационной терапии.

Показания к обследованию:

Язвенная болезнь желудка и/или 12-перстной кишки.
Язва пищевода.
Неязвенная диспепсия.
Гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь.
Атрофический гастрит.
Подозрение на онкологические заболевания ЖКТ, рак желудка у ближайших родственников.
Диагностика хеликобактерной инфекции в семье пациента с язвенной болезнью.
Профилактические обследования для выявления людей с риском развития язвы или рака желудка.
Оценка эффективности эрадикационной терапии

Хранение: в холодильнике при tº +4 +8 ºС до 72 часов, если исследование в течение этого периода невозможно, пробу необходимо поместить в морозильную камеру при температуре -20 °С.

Правила транспортировки:

При tº +2 +8 ºС в термоконтейнерах с охлаждающими элементами.

Преимущества данного метода:

не требует абсолютно никакого инвазивного вмешательства;
является высокочувствительным и специфичным методом;
является стандартом в диагностике H. pylori у детей и взрослых как до, так и после проведения эрадикационной терапии.

Показания к обследованию:

Язвенная болезнь желудка и/или 12-перстной кишки.
Язва пищевода.
Неязвенная диспепсия.
Гастроэзофагеальная рефлюксная болезнь.
Атрофический гастрит.
Подозрение на онкологические заболевания ЖКТ, рак желудка у ближайших родственников.
Диагностика хеликобактерной инфекции в семье пациента с язвенной болезнью.
Профилактические обследования для выявления людей с риском развития язвы или рака желудка.
Оценка эффективности эрадикационной терапии

Проводить исследования кала необходимо не ранее, чем через 3 дня после клизмы, рентгенологического исследования желудка и кишечника, фиброколоноскопии.

За несколько дней до исследования нельзя принимать следующие лекарственные вещества: активированный уголь, слабительные препараты с прокинетическим эффектом (белладонна, пилокарпин), препараты железа, меди, висмута, а также использовать ректальные свечи на жировой основе, касторовое и вазелиновое масла).

Перед дефекацией необходимо провести тщательный туалет наружных половых органов и области заднего прохода мыльным раствором с последующим смыванием водой.

Дефекацию производить в чистую сухую емкость (судно, ночную вазу).

После дефекации кал необходимо собрать в чистый, одноразовый контейнер с завинчивающейся крышкой и ложечкой в количестве не более 1/3 объёма контейнера (контейнер необходимо заранее приобрести в аптеке или получить в медицинском центре).

Исключить попадание в биологический материал воды, крови, мочи, слюны, гноя и других посторонних примесей, которые, с большой вероятностью, исказят результаты анализа.

Контейнер с содержимым необходимо плотно закрыть и доставить в медицинский центр не позднее 4-5 часов до исследования.

Особенности подготовки к сдаче кала на хеликобактер пилори:

За месяц до сдачи кала перестать принимать антибиотики; ингибиторы протонной помпы (омепразол, лансопразол, пантопразол, рабепразол, эзомепразол); за 2 недели препараты висмута (де-нол).

За три дня не употреблять алкоголь, пищу, с большим содержанием клетчатки (морковь, капуста, отруби), а также способную приводить к окраске каловых масс

(свекла, напитки с красителями).

Особенности подготовки к сдаче кала на скрытую кровь:

За три дня до обследования необходимо исключить прием препаратов, содержащих аскорбиновую и ацетилсалициловую кислоты, нестероидные противовоспалительные средства, железосодержащие препараты.

За 48 часов до исследования исключить прием алкоголя.

Нельзя собирать кал во время или в течение 3 дней после менструального периода, также нельзя сдавать кал в случае геморроидальных кровотечений или при наличии крови в моче.

За три дня до обследования исключить из рациона питания мясные и рыбные блюда, субпродукты, овощи зеленого цвета, яблоки, гранаты, белю фасоль, шпинат, хрен, цветную капусту, брокколи, редис, болгарский перец, дыню (при проведении пробы Грегерсена, при исследовании кала методом иммунохроматографии соблюдение ограничений в рационе вводить не требуется).

За три дня до исследования необходимо отказаться от чистки зубов, так как даже небольшой объем крови, выделившийся при повреждении десен, может исказить результат обследования.

Особенности подготовки к сдаче кала на дисбактериоз:

Судно или ночную вазу перед дефекацией необходимо хорошо промыть с мылом и губкой, многократно ополоснуть водопроводной водой, а потом обдать кипятком и остудить; обработка судна синтетическими моющими средствами недопустима.

За 3 дня до сбора кала необходимо соблюдать диету, исключающую прием продуктов, усиливающих процессы брожения в кишечнике и молочнокислые продукты, а так же алкоголь и бактерийные препараты (содержащие бифидобактерии, лактобактерии, кишечные палочки).

Особенности подготовки к сдаче кала для копрологического исследования (копрограммы):

За 4-5 дней до сдачи кала на копрологическое исследование требуется отменить прием ферментных препаратов и начать соблюдать специальную диету, которая включает:

вареные всмятку яйца;

белый хлеб со сливочным маслом.

Анализ кала на яйца глист, цисты простейших, эластазу-1, кальпротектин и лактоферрин не требуют специальной подготовки, но должны сдаваться при соблюдении общих правила для сбора кала на анализ.

Дыхательный тест на HP

Бактерия Helicobacter pylori была открыта в 1979 году австралийским патологоанатомом Робином Уорреном, хотя первые упоминания о ней датируются 1875 годом. Чуть позже к исследованию HP присоединился врач Барри Маршалл. Совместно они смогли доказать наличие патогенной бактерии Хеликобактер пилори в организме и то, что она вызывает большинство язв желудка и гастритов у человека. Кроме того, ученые предложили методы ее лечения. Их труд был не только признан профессиональным сообществом, но и достойно оценен — в 2005 году Робин Уоррен и Барри Маршалл получили Нобелевскую премию по физиологии и медицине.

В 2021 году существует много способов диагностики Н.pylori. Один из них — дыхательный тест. Он неинвазивный и при этом информативный (чувствительность достигает 90%). В основе работы лежит биохимический метод выявления продуктов жизнедеятельности патогенной бактерии Хеликобактер пилори в выдыхаемом пациентами воздухе. Исследование базируется на способности HP вырабатывать уреазу. Этот фермент разлагает мочевину до аммония и углекислого газа, который в дальнейшем попадает в кровеносную систему и выделяется через легкие в выдыхаемом воздухе. Для проведения теста необходима мочевина, меченная радиоактивным углеродом 13С (нерадиоактивный), 14С (радиоактивный) или раствор карбамида. Выбор реактива зависит от используемого диагностического метода.

Показания к назначению дыхательных тестов на Хеликобактер

атрофический гастрит;
близкие родственники болеют раком желудка;
кто-то из членов семьи является носителем H. pylori инфекции;
выявлена язвенная болезнь желудка или двенадцатиперстной кишки, а также другие кислотозависимые заболевания пищеварительной системы;
уже был диагностирован хеликобактериоз, и проведена эрадикационная терапия для оценки ее результатов (выполняется спустя 4–6 недель после завершения курса лечения);
дефицит железа неясного генеза.

Также сделать дыхательный тест на Хеликобактер пилори назначают пациентам, которые имеют характерную симптоматику:

Боли в животе. Могут быть ноющего, колющего, давящего или схваткообразного характера. Как правило, болевые ощущения появляются после еды или при больших временных интервалах между приемами пищи.
Изжога. Проявляется жгучими ощущениями в пищеводе и даже гортани.
Чувство тяжести в верхнем отделе желудка. Может возникать даже после небольшого количества пищи.
Повышенный метеоризм.
Резкая потеря веса без каких-либо ярко-выраженных причин.
Диспепсические явления в виде рвоты и тошноты. При этом температура тела не повышается.
Диарея.
Кожные реакции аллергического характера: покраснения, сыпь.
Ухудшение аппетита. Может исчезнуть полностью.
Неприятный запах изо рта.
Частые отрыжки с неприятным кислым или горьким привкусом.
Хронические запоры. Дефекация отсутствует в течение 3 и более суток.
Плохая переносимость жирной и мясной пищи. Проявляется, как правило, неприятными или болевыми ощущениями в животе, кожными реакциями, рвотой.
Чувство дискомфорта в подложечной области.
Затрудненное глотание в процессе приема пищи или употребления напитков.
Наличие в каловых массах следов крови, слизи, их разжижение.

Также сделать дыхательный тест на Хеликобактер пилори можно в профилактических целях. При выявлении бактерии незамедлительно обратитесь к врачу.

Как проводится тест на Хеликобактер?

Суть исследования на Helicobacter pylori базируется на способности этой бактерии вырабатывать особый фермент — уреазу, которая ускоряет гидролиз мочевины. Этот процесс сопровождает выработка углекислого газа, который затем всасывается в кровеносную систему, попадает в легкие и выводится с выдыхаемым воздухом. Пациенты, у которых в организме нет бактерии Хеликобактер пилори, уреаза в желудке также отсутствует. Если у человека есть H.pylori, то количество углекислого газа в выдыхаемом воздухе после приема специального реактива (карбамида, мочевины) увеличивается.

Цена и алгоритм дыхательного теста на Хеликобактер пилори зависит от того, каким способом он проводится. Существует 3 метода исследования.

Уреазный дыхательный тест 13С

На первом этапе сбор выдыхаемого пациентом воздуха проводится без предварительных манипуляций. Человек делает глубокий вдох, задерживает дыхание на несколько секунд, затем – выдох в стерильный пакет, который плотно закрывается. После этого пациент выпивает особый реактив. Он состоит из 75 мг мочевины, которая помечена нерадиоактивным изотопом 13С. Через 30 минут проводится забор выдыхаемого воздуха в другой пакет.

Далее готовые образцы запечатывают, маркируют и отправляют в лабораторию, где с помощью спектроскопического или спектрофотометрического метода проводится измерение концентрации в обеих пробах. На основании исследования специалист делает вывод о наличии или отсутствии Helicobacter pylori.

Хелик-тест

Менее дорогостоящий, чем 13C-УДТ, но и достоверность не превышает 85%. При этом может быть использован у детей и беременных женщин. Проводится с помощью специального цифрового аппарата. Пациент дышит в индикаторную трубку анализатора выдыхаемого воздуха в течение 5–7 минут. Врач фиксирует результаты. Затем пациент выпивает раствор, содержащий 0,5 г карбамида фармацевтической степени чистоты и нормального изотопного состава (диагностический препарат сертифицирован в РФ и безопасен), и минут через 10–15 снова дышит в трубку. Затем два показателя сравниваются. Проведение исследования занимает 15–20 минут.

Поскольку никакие материалы анализа не требуют лабораторного исследования, а данные фиксируются специалистом непосредственно на месте, результаты можно получить моментально.

Уреазный тест 14С

Алгоритм исследования тот же, что и при 13C-УДТ. Ключевое отличие — используемый реагент. Пациенту в этом случае предлагается раствор мочевины, меченной изотопом радиоактивного углерода (14C).

Обратите внимание ! Чтобы результат теста оказался достоверным, необходимо выполнить следующие рекомендации:

Исследование нужно проводить исключительно натощак (через 8 часов после приема пищи). Накануне взятия дыхательных проб следует отказаться от большого количества еды и продуктов, провоцирующих повышенное газообразование.
За 1 час до планируемой диагностики следует отказаться от употребления жидкости.
За 3 дня до даты тестирования следует полностью исключить спиртосодержащие напитки.
Накануне исключить физические и эмоциональные перегрузки.
За 4 часа перед проведением исследования нельзя курить.
Исследование проводится не ранее чем через 6 недель после окончания последнего приема антибактериальных лекарственных средств, ИПП, препарата висмута.

Результаты анализа

Тест на Helicobacter pylori — доступный по цене метод первичной диагностики. Если он дал положительный результат, для повышения точности исследования рекомендуется проводить комплексное обследование, позволяющее обнаружить как сам микроорганизм, так и продукты его жизнедеятельности. Врач может дополнительно назначить:

анализ методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в кале, слюне, смывах желудка, зубном налете;
эндоскопическое исследование с прицельной биопсией желудочных тканей и дальнейшим изучением биоптатов;
иммуноферментный анализ кала на антиген Хеликобактер пилори;
серологический метод (выявление антител к Helicobacter pylori в плазме крови);

При получении отрицательного результата дальнейшие диагностические исследования не назначаются.

Обратите внимание ! Возможен ложноотрицательный результат. Test на HP может показывать отсутствие бактерии при ее наличии в организме человека в следующих случаях:

пациент проходил антибактериальную терапию, принимал ингибиторы протонной помпы, препараты висмута в течение предшествующих 14 дней;
тест был проведен ранее чем через 4 недели после окончания лечения хеликобактериоза;
процедура была проведена неправильно.

Также дыхательный тест на пилори может показать ложноположительный результат. Исследование может выявить бактерию H. pylori при ее отсутствии в следующих случаях:

при наличии у пациента ахлоргидрии (состояния, при котором в желудочном соке отсутствует соляная кислота);
если есть другие спиралевидные желудочные бактерии с уреазной активностью;
нарушены правила подготовки к тестированию и проведения исследования.

Расшифровка

Результат исследования уреазного дыхательного теста – это разница между первой и второй пробой выдыхаемого воздуха. Степень обсеменения организма бактерией обозначается как DOB – Delta over Baseline, измеряется в промилле (‰). Нормой является 0, то есть бактерии Helicobacter pylori нет в ЖКТ. Если значение не равно нулю, то уровни обсеменения оцениваются следующим образом:

Тип бактерий хеликобактер пилори способен вызывать многие из заболеваний, поражающих органы пищеварения, в том числе и язвенную болезнь.

До недавнего времени существование данного микроорганизма и его влияние на здоровье человека вызывало у многих медиков большие сомнения. Теперь то, что язвенная болезнь может возникнуть, как и любое инфекционное заболевание, является доказанным фактом.

Helicobacter pylori (H. pylori)– это бактерия, которая обитает в покрывающей слизистую оболочку желудка субстанции-слизи. Инфицирование H. pylori является широко распространенным явлением. Согласно данным эпидемиологов, обнаружить наличие в желудке этой бактерии можно приблизительно у половины людей на планете, а в ряде регионов у 80–100% населения.

Инфицирование, как правило, происходит еще в детском возрасте и сохраняется на протяжении все жизни. По большей части присутствие H. pylori не создает каких-либо проблем, но у ряда лиц в качестве реакции на инфицирование формируются локальные воспалительные процессы, проявляющиеся через дуоденит, гастрит.

Приблизительно у 5% инфицированных лиц бактерией Н. pylori, развиваются язвенные процессы двенадцатиперстной кишки, желудка. Реже формируются хронические воспаления, связанные с бактерией H. pylori, что приводит к атрофическим явлениям в слизистой оболочке (атрофическому гастриту) – патологии, связанной с вероятностью формирования онкологических процессов в желудке. Риск развития такого рода опасных состояний во многом зависит от штамма H. pylori и вирулентных факторов, индивидуальных особенностей и характерных реактивных явлений на наличие H. pylori, воздействия жизненных условий жизни, в том числе, диет. Изучаемая инфекция эффективно элиминируют (эрадикация H. pylori), но данная ситуация не исключает вероятность последующего инфицирования в будущем. Вопрос о важности эрадикации H. pylori должен решаться в индивидуальном порядке. Тактические действия лечащего врача в основном зависит от клинических проявлений наличия инфекции и, что не менее важно, присутствия патологических изменений в слизистой оболочке двенадцатиперстной кишки и желудка.

Бактерия хеликобактер пилори устойчива ко многим видам воздействия, хорошо сохраняется при неблагоприятных условиях окружающей среды, что позволяет ей активно размножаться на слизистой желудка.

Что показывает анализ

Анализ на хеликобактер пилори помогает выявить присутствие патогенного микроорганизма в организме, так как она может в течение долгого времени никак не проявлять себя.

Появление первых симптомов патологии начинается после снижения уровня иммунитета. После ее выделения и посева появляется возможность подобрать препараты, способные остановить рост и развитие данного микроорганизма.

Как проводится анализ

Анализ имеет смысл проводить в течение недели после появления первых симптомов заболевания, дальше концентрация микроорганизмов в кале значительно уменьшиться и обнаружить их будет сложно.

Необходимый результат, выявить хеликобактером можно одним из трех способов:

ПЦР.
Бакпосев.
ИФА (проводится параллельно, изучается кровь).

В анализе кала ищут антиген к хеликобактер пилори или остатки частей ДНК. Для этого в лаборатории имеется контрольный образец генетического кода бактерии, специальный прибор ищет подобные частицы в предоставленном для исследования материале.

Показания

Анализ кала на хеликобактер пилори назначают, если у пациента появляются следующие виды симптомов:

Боли в верхней части живота, особенно сразу после употребления пищи.
Частая тошнота и рвота.
Ощущение переполненного желудка при употреблении небольшого по объему количества пищи.
Изжога.
Проблемы с глотанием во время приема пищи.
Изменение цвета кала до почернения.
Наличия железодефицитной анемии, на фоне изменений со стороны желудочно-кишечного тракта.
Метеоризм.
Появление крови в рвотных массах или в кале.

Анализ кала на хеликобактер пилори обязательно проводится при уже установленном наличии язв в желудке и двенадцатиперстной кишке. Также проверку на носительство проходят пациенты с раковыми опухолями в органах пищеварения при выявлении железодефицитной анемии.

Поводом для обследования может стать семейная предрасположенность к заболеваниям желудочно-кишечного тракта, особенно если у родителей были язвенные поражения желудка и двенадцатиперстной кишки.

Анализ кала назначают при значительных атрофических изменениях слизистой желудка и при наличии полипов в желудке и кишечнике.

Подготовка

Анализ кала на хеликобактер пилори требует определенной подготовки.

Анализ кала в этом случае можно сдавать только через месяц после последнего приема антибиотиков.
За семьдесят два часа до забора материала нельзя употреблять в пищу продукты, окрашивающие кал. К ним относят чай,кофе, фрукты и овощи красных и оранжевых цветов, куркуму, карри, соевый соус.
При подготовке к исследованию нельзя употреблять продукты, усиливающие перистальтику кишечника. К ним относят блюда из капусты, редьки, редиса, отрубей, свеклы, а также перловую кашу.
Нельзя принимать препараты, влияющие на работу кишечника.
Нельзя употреблять алкогольные напитки и энергетики.
За три дня до обследования желательно уменьшить объемы потребляемых мяса и рыбы.
Материал для исследования желательно собирать в специальную емкость, которую приобретают в аптеке. Образец кала должен быть плотно закрыт.
Во время сбора кала, на него не должна попасть моча и вода.
Допускается хранение собранного материала в холодильнике, но в течение короткого времени.

К контейнеру при предоставлении материала в лабораторию должно прилагаться специальное направление с указанием данных пациента.

Исказить полученный результат может прием антибиотиков, которые неизбежно повлияют на флору кишечника. При попадании микробов и вирусов извне список имеющихся в кишечнике бактерий может измениться.

Интерпретация

Важно понимать, что интерпретация данных исследований является прерогативой лечащего врача. Категорически нельзя использовать полученную информацию для самодиагностики и самостоятельного лечения. Специалист ставит точный диагноз, основываясь как на данные теста, так и за счет сбора информации от пациента, пользуясь другими источниками, исследованиями, анамнезом и т. д.

Процесс гистологического исследования биоптатов сопровождается описательным заключением о состоянии слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки и желудка (с использованием классификации OLGA).

Гистохимическое исследование – процедура производится с полуколичественной оценкой степени обсемененности H. рylori в желудочной слизи:

слабая (I степень)
умеренная (II степень)
выраженная (III степень)
тотальное обсеменение (без указания степени).

Выявляемость возбудителя при анализе кала составляет около 95%.

Если в ходе исследования обнаружено наличие структур аналогичным в имеющемся образце, говорят о том, что результат теста - положительный. В этом случае полученный результат имеет высокую степень точности.

При бактериальном посеве выделенный микроорганизм помещают в питательную среду и ждут увеличения колонии. Примерно через неделю, полученный образец сравнивают с эталонным.

Для определения хеликобактер пилори также используется ее способность окрашиваться при взаимодействии с определенными реагентами. При обнаружении бактерии определяются препараты способные остановить ее рост и размножение.

Читайте также: