Посев для фаготипирования производят
Добавил пользователь Alex Обновлено: 19.09.2024
Развитие управляющих функций мозга ребёнка: полезные советы и упражнения для педагогов
Сертификат и скидка на обучение каждому участнику
Государственное автономное образовательное учреждение
среднего профессионального образования Республики Крым
План занятия (практическое) № 29
Тема занятия: Проведение микробиологической диагностики стафилококковых инфекций
МДК 04.01. Теория и практика лабораторных микробиологических и иммунологических исследований
Специальность: 31.02.03. Лабораторная диагностика
Цели занятия:
Образовательные:
Изучить методы выделения чистой культуры стафилококков
Рассмотреть культуральные и биохимические свойства стафилококков
Рассмотреть серологические свойства стафилококков
Развивающие:
Развивать навыки самообразования, творческие способности студентов
Продолжить развитие учебно-интеллектуальных умений;
выделять главное и существенное
устанавливать причинно-следственные связи
Воспитательные:
продолжить формирование эволюционных представлений о развитии органического мира, передачи наследственного материала
воспитывать уважение к людям, науки, их достижениям
продолжить формирования умения работать в коллективе, принимать совместные решения
продолжить формирования здорового образа жизни
Междисциплинарные связи:
Физико-химические методы исследования и техника лабораторных работ
Анатомия и физиология человека
Внутридисциплинарные связи:
Место проведения: кабинет 407
Тип занятия: практическое
Количество часов: 4 академических
Обеспечение занятия: мультимедийное оснащение, таблицы, слайды.
Основные источники:
2. Камышева К.С. Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии / Ростов н/Д: Феникс, 2015. – 281 с.
Дополнительные источники:
Медицинская микробиология, вирусология и иммунология : в 2 т. / под ред. В. В. Зверева, М. Н. Бойченко. – Том 1. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010.- 448 с.
Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований: учебник. Сбойчаков В.Б. 2011. – 608 с
Интернет- ресурсы:
Студент должен уметь:
Проводить посев биологического материала на плотные среды
Проводить индикацию и идентификацию стафилококков
Проводить фаготипирование стафилококковой культуры
Определять чувствительность стафилококковой культуры к антибиотикам
Студент должен знать:
Морфологические, биохимические и культуральные свойства стафилококков
Алгоритм выделения чистой культуры стафилококков
Студент должен обладать:
Общие компетенции
ОК 2. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество.
ОК 3. Принимать решения в стандартных и нестандартных ситуациях и нести за них ответственность.
ОК 4. Осуществлять поиск и использование информации, необходимой для эффективного выполнения возложенных на него профессиональных задач, а также для своего профессионального и личностного развития.
ОК 5. Использовать информационно-коммуникационные технологии в профессиональной деятельности.
ОК 6. Работать в коллективе и команде, эффективно общаться с коллегами, руководством, пациентами.
ОК 7. Брать ответственность за работу членов команды (подчиненных), за результат выполнения заданий.
ОК 8. Самостоятельно определять задачи профессионального и личностного развития, заниматься самообразованием, осознанно планировать и осуществлять повышение своей квалификации.
ОК 9. Ориентироваться в условиях смены технологий в профессиональной деятельности.
ОК 12. Оказывать первую медицинскую помощь при неотложных состояниях.
ОК 13. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.
Профессиональные компетенции
ПК 4.1. Готовить рабочее место и аппаратуру для проведения лабораторных микробиологических исследований.
ПК 4.2. Проводить лабораторные микробиологические и иммунологические исследования биологических материалов, проб объектов внешней среды и пищевых продуктов; участвовать в контроле качества.
ПК 4.3. Регистрировать результаты проведенных исследований
ПК 4.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты.
Структура занятия:
Организационный момент 2 мин.
Мотивация (цели) занятия 3 мин.
Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний) 30 мин.
Инструктаж самостоятельной работы студентов 15 мин.
Практическая часть 120 мин.
Подведение итогов занятия, оценка работы студентов 8 мин.
Задание на дом 2 мин.
Ход занятия
Организационный момент
Инструктаж по охране труда ( роспись в журнале по технике безопасности )
Мотивация (цели) занятия :
Изучение методов индикации и идентификации стафилококков является неотъемлемой частью в процессе освоения программы профессионального модуля ПМ.04. Проведение лабораторных микробиологических исследований.
Оценка знаний студентов (проверка исходного уровня знаний):
а) проверка знаний .
1. По какому признаку кокки объединены в одну группу?
2. Какие ферменты и факторы патогенности продуцируют стафилококки?
3. Какие заболевания вызывают стафилококки?
4. Какие виды стафилококков Вы знаете?
б) проверка внеаудиторной самостоятельной работы
Составление графологических схем: Источник, пути передачи, патогенез, специфическая профилактика инфекции
в) подведение итогов контроля:
Оценивание, замечания по работе.
Практическая часть:
а) подготовка студентов к самостоятельной работе ( проведение инструктажа по выполнению заданий):
Микробиологическое исследование
Цель исследования: выделение и идентификация стафилококков.
Материал для исследования
1. Гной (фурункулы, карбункулы, абсцессы).
2. Слизь из зева (ангина).
3. Мокрота (пневмония).
4. Моча (пиелиты и циститы).
5. Дуоденальное содержимое (холецистит).
6. Кровь (подозрение на сепсис).
7. Рвотные массы, промывные воды желудка, пищевые продукты (пищевые отравления).
8. Слизь из носа (обследование на бактерионосительство).
Способы сбора материала
Основные методы исследования
Ход исследования
Первый день исследования
Все посевы ставят в термостат на сутки.
Обнаружение стафилококков при микроскопии гноя из закрытого абсцесса и осадка мочи, взятой катетером, позволяет дать предварительный положительный ответ: обнаружен стафилококк.
Второй день исследования
Посевы на плотных и жидких питательных средах вынимают из термостата и изучают. Подозрительные в отношении стафилококка колонии, выросшие на желточно-солевом агаре, отсевают на скошенный агар для получения и дальнейшего изучения чистой культуры. При этом учитывают наличие лецитиназы, которое проявляется в образовании радужного венчика вокруг колонии. Чашки с оставшимися колониями оставляют на 2-3 дня при комнатной температуре для выявления пигмента. Просматривают посевы на чашках с агаром, содержащим кровь. Колонии с четкой зоной гемолиза (просветление) вокруг них выделяют на скошенный агар. Посев крови в сахарном бульоне инкубируют 10 сут, производя через 2-3 дня высевы на агар с кровью и желточно-солевую среду.
При отсутствии роста на плотных питательных средах делают высев из бульона с глюкозой на агар с кровью. Посевы ставят в термостат на сутки.
Третий день исследования
Вынимают посевы из термостата. Из выделенных на скошенный агар культур делают мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. При наличии грамположительных стафилококков проводят дальнейшее изучение выделенной культуры:
а) ставят реакцию плазмокоагуляции;
б) изучают гемолитические свойства;
в) определяют продукцию ДНКазы;
г) определяют ферментацию маннита в анаэробных условиях;
д) определяют устойчивость к новобиоцину.
Реакция плазмокоагуляции . Цитратную плазму, полученную из крови кролика, разводят изотоническим раствором натрия хлорида в соотношении 1:4 и наливают в две преципитационные пробирки по 0,3-0,5 мл. В одну пробирку вносят петлю исследуемой культуры, другая пробирка служит контролем. Обе пробирки ставят в термостат при температуре 37° С. Учет реакции производят через 2-3 ч. При отсутствии свертывания плазмы посевы оставляют при комнатной температуре на 24 ч, после чего учитывают реакцию. При наличии фермента коагулазы плазма свертывается (не выливается из перевернутой пробирки). В контрольной пробирке консистенция плазмы не изменяется.
Ускоренный метод определения коагулазы. В стерильной капле воды на предметном стекле суспендируют выделенную культуру, к ней прибавляют одну каплю неразведенной плазмы. При положительной реакции из микробных клеток в течение 20-60 с образуются крупные хлопья. Этот метод используют при массовых обследованиях.
Определение гемолитических свойств . Производят посев на агар с 5% крови (штаммы, продуцирующие α-гемолизин, дают зоны просветления среды и на кроличьей и на бараньей крови, продуцирующие β-гемолизин лизируют только эритроциты барана).
Четвертый день исследования
Производят учет результатов (табл. 24).
Примечание. + положительная реакция.
Наличие перечисленных признаков позволяет отдифференцировать золотистые стафилококки от стафилококков других видов и дать окончательный ответ: выделен S. aureus (рис. 37).
Для установления эпидемиологической цепочки выделенную культуру фаготипируют. Фаготипирование может подтвердить идентичность стафилококков, выделенных от разных больных и из объектов внешней среды.
Для фаготипирования используют критические тест-разведения фагов. Критическим тест-разведением называют то максимальное разведение фагов, при котором происходит полусливной лизис соответствующего штамма стафилококка.
Методика фаготипирования . В чашку Петри наливают 20 мл 1,5% МПА, дают ему застыть и подсушивают в термостате в течение 30-40 мин. На поверхность агара наносят 1 мл 4-6-часовой культуры выделенного стафилококка, распределяют по поверхности всей чашки, избыток жидкости отсасывают или дают ей испариться в термостате в открытой чашке. Предварительно дно чашки делят на секторы или квадраты. Число квадратов или секторов должно соответствовать количеству используемых фагов. Затем на каждый квадрат или сектор наносят один фаг.
Биологические пробы . Проба на определение летальных свойств культуры. Для выявления летального действия токсина кролику вводят внутривенно (или внутрибрюшинно) фильтрат бульонной культуры стафилококка из расчета 0,1-0,2 мл фильтрата на 1 кг массы кролика. Гибель кролика через 3-4 дня свидетельствует о наличии летального действия токсина.
Дермонекротическая проба. Пробу ставят на кролике (наиболее чувствительному к этому токсину животному). Предварительно на боку или на спине животного выщипывают шерсть и вводят внутрикожно 0,2 мл двухмиллиардной взвеси стафилококковой культуры в изотоническом растворе натрия хлорида. При наличии в выделенной культуре некротических свойств в месте введения образуется инфильтрат, сопровождающийся некрозом.
Реакцию учитывают через 24-18 ч.
Полученную культуру стафилококка проверяют на чувствительность к антибиотикам методом бумажных дисков (см. главу 9).
Контрольные вопросы
1. Какой материал исследуют при заболеваниях, вызываемых стафилококками?
2. Каковы основные методы лабораторного исследования для выявления стафилококков?
3. Какова методика постановки реакции плазмокоагуляции?
4. На какой среде выявляют гемолитические свойства стафилококков?
5. С какой целью проводят фаготипирование?
Проверьте, к какому антибиотику чувствительна выделенная культура стафилококка.
Питательные среды
Агар с кровью . См. главу 7.
б) самостоятельная работа студентов:
провести посев гнойного отделяемого или мазков из носоглотки на ЖСА и кровяной агар
зарисовать схему выделения чистой культуры стафилококков
Сделать выводы
в) подведение итогов самостоятельной работы
Оформление в рабочей тетради выводов о проделанной работе
Итоговый контроль
Решение ситуационных задач, см приложение №2
Проверка преподавателем работ студентов
Задание на дом
Подведение итогов занятия, оценка работы студентов
Преподаватель оценивает работу студентов, корректирует ошибки, отвечает на вопросы студентов
Преподаватель Гончарова А.И.
Стафилококки располагаются в виде ______________ ______________.
По Граму окрашиваются ____________________
Дифференциально-диагностические среды____________________________агар и ________________ агар.
На плотных питательных средах стафилококки образуют колонии______________, окруженные зоной ____________________активности.
Стафилококки вырабатывают ферменты, обладающие агрессивными свойствами-_______________________, _________________________,
Гиалуронидазу, ДНКазу, протеиназу, фосфотазу и _________________.
Патогенные стафилококки вырабатывают _____токсин , который характеризуется _______________, летальным и __________________ действием, а также _______________токсин, вызывающий при попадании в ЖКТ пищевые отравления.
Для выявление фермента плазмокоагулазы ставят реакции плазмокоагуляции с _____________ плазмой кролика, если плазма свертывается, то реакция считается ____________________.
Золотистый стафилококк расщепляет манит в анаэробных условиях, при это изменяется цвет среды - ____________________________.
С целью выявления эпидемиологических связей – источника инфекции и факторов передачи проводят __________________________ выделенных культур.
Читайте также: