Питательная среда для посева на менингококк

Добавил пользователь Дмитрий К.
Обновлено: 19.09.2024

Менингококковая инфекция — острая инфекционная болезнь, характеризующаяся поражением слизистой оболочки носоглотки, оболочек головного мозга и септицемией; антропоноз.

Таксономия: возбудитель Neisseria meningitidis (менингококк) относится к отделу Gracilicutes, семейству Neisseriaceae, роду Neisseria.

Морфологические свойства. Мелкие диплококки. Характерно расположение в виде пары кофейных зерен, обращенных вогнутыми поверхностями друг к другу. Неподвижны, спор не образуют, грамотрицательные, имеют пили, капсула непостоянна.

Культуральные свойства. Относятся к аэробам, культивируются на средах, содержащих нормальную сыворотку или дефибринированную кровь лошади, растут на искусственных питательных средах, содержащих специальный набор аминокислот. Элективная среда должна содержать ристомицин. Повышенная концентрация СО₂ в атмосфере стимулирует рост менингококков.

Антигенная структура: Имеет несколько АГ: родовые, общие для рода нейссерии (белковые и полисахаридные, которые представлены полимерами аминосахаров и сиаловых кислот); видовой (протеиновый); группоспецифические (гликопротеидный комплекс); типоспецифические (белки наружной мембраны), которые разграничивают серотипы внутри серогрупп В и С. По капсульным АГ выделяют девять серогрупп (А, В, С, D, X, Y, Z, W₁₃₅ и Е). Капсульные АГ некоторых серогрупп иммуногенны для человека. Штаммы серогруппы А вызывают эпидемические вспышки. В, С и Y - спорадические случаи заболевания. На основании различий типоспецифических АГ выделяют серотипы, которые обозначают арабскими цифрами (серотипы выявлены в серогруппах В, С, Y, W₁₃₅). Наличие АГ серотипа 2 рассматривается как фактор патогенности. Во время эпидемий преобладают менингококки групп А и С, которые являются наиболее патогенными.

Биохимическая активность: низкая. Разлагает мальтозу и глк. До кислоты, не образует индол и сероводород. Ферментация глк. и мальтозы – диф.-диагностический признак. Не образует крахмалоподобный полисахарид из сахарозы. Обладает цитохромоксидазой и каталазой. Отсутствие β-галактозидазы, наличие γ-глютаминтрансферазы.

Факторы патогенности: капсула – защищает от фагоцитоза. AT, образующиеся к полисахаридам капсулы, проявляют бактерицидные свойства. Токсические проявления менингококковой инфекции обусловлены высокотоксичным эндотоксином. Для генерализованных форм менингококковой инфекции характерны кожные высыпания, выраженное пирогенное действие, образование AT. Пили, белки наружной мембраны, наличие гиалуронидазы и нейроминидазы. Пили являются фактором адгезии к слизистой оболочке носоглотки и тканях мозговой оболочки. Менингококки выделяют IgA-протеазы, расщепляющие молекулы IgA, что защищает бактерии от действия Ig.

Резистентность. Малоустойчив во внешней среде, чувствителен к высушиванию и охлаждению. В течение нескольких минут погибает при повышении температуры более 50 °С и ниже 22 °С. Чувствительны к пенициллинам, тетрациклинам, эритромицину, устойчивы к ристомицину и сульфамидам. Чувствительны к 1 % раствору фенола, 0,2 % раствору хлорной извести, 1 % раствору хлорамина.

Эпидемиология, патогенез и клиника. Человек — единственный природный хозяин менингококков. Носоглотка служит входными воротами инфекции, здесь возбудитель может длительно существовать, не вызывая воспаления (носительство). Механизм передачи инфекции от больного или носителя воздушно-капельный.

Инкубационный период составляет 1—10 дней (чаще 2—3 дня). Различают локализованные (назофарингит) и генерализованные (менингит, менингоэнцефалит) формы менингококковой инфекции. Из носоглотки бактерии попадают в кровяное русло (менингококкемия) и вызывают поражение мозговых и слизистых оболочек с развитием лихорадки, геморрагической сыпи, воспаления мозговых оболочек.

Иммунитет. Постинфекционный иммунитет при генерализованных формах болезни стойкий, напряженный.

Микробиологическая диагностика: Материал для исследования - кровь, спинномозговая жидкость, носоглоточные смывы.

Бактериологический метод – выделение чистой культуры. Носоглоточная слизь, кровь, ликвор. Посев на плотные, полужидкие питательные среды, содержащие сыворотку, кровь. Культуры инкубируют в течение 20 ч. При 37С с повышенным содержанием СО₂.Оксидазаположительные колонии – принадлежат в данному виду. Наличие N.meningitidis подтверждают образованием уксусной кислоты при ферментации глк. и мальтозы. Принадлежность к серогруппам – в реакции агглютинации (РА).

Серологический метод – используют для обнаружения растворимых бактериальных АГ в ликворе, или АТ в сыворотке крови. Для обнаружения АГ применяют ИФА,РИА. У больных, перенесших менингококк – в сыворотке специфические АТ: бактерицидные, аггютинины, гемаггютинины.

Лечение. В качестве этиотропной терапии используют антибиотики - бензилпенициллин (пенициллины, левомицетин, рифампицин), сульфамиды.

Профилактика. Специфическую профилактику проводят менингококковой химической полисахаридной вакциной серогруппы А и дивакциной серогрупп А и С по эпидемическим показаниям. Неспецифическая профилактика сводится к соблюдению санитарно-противоэпидемического режима в дошкольных, школьных учреждениях и местах постоянного скопления людей.

Менингококковая инфекция — это группа острых антропонозных заболеваний, возбудителем которых является грам-трицательные парные бактерии Neisseria meningitidise (менингококк).

В зависимости от серотипа поражает различные органы и системы с разными клиническими проявлениями. Объединяет заболевания форма передачи ― воздушно-капельная при тесном контакте с носителем (менее 1 метра). Бактерии не устойчивы во внешней среде, быстро погибают вне организма. Заболевание считается опасным за счет всеобщей восприимчивости населения к инфекции, скоротечности болезни, высокой вероятности развития осложнений и летального исхода.

Классификация

По клиническим проявлениям менингококковую инфекцию делятся на следующие типы:

Локализованная ― менингококконосительство (бессимптомное пребывание менингококка на слизистой носоглотки), назофарингит.

Генерализованная ― менингит, менингоэнцефалит, острая, типичная, хроническая формы менингококкемии, а также смешанная генерализованная форма (менингит и менингококкемия).

Редкие формы ― менингококковый артрит (синовит), полиартрит, пневмония, эндокардит, иридоциклит.

Симптомы

Менингококковые инфекции имеют ярко выраженную симптоматику за исключением легких форм назофарингит и менингококконосительства. В последнем случае человека можно назвать условно здоровым, поскольку нет жалоб и клинических признаков. Носитель, как правило взрослых человек, представляет угрозу для своего окружения, особенно для детей, тяжело переносящих инфекцию. В среднем, согласно статистике, период носительства составляет от 15 до 20 дней.

Симптоматика острого назофарингита

Заложенность носа, вызывающая гнусавость речи.

Першение в горле, отечность, боль при сглатывании.

Бледность кожных покровов.

Упадок сил, снижение аппетита, головная боль.

Иногда болезнь проявляется вестибулярными нарушениями, выражающимися в головокружение, шуме в ушах, тошноте. Чихание и кашель отсутствуют, иногда могут быть слизисто-гнойные выделения из носа. В целом симптомы напоминают ОРЗ, поэтому важно провести дифференциальную диагностику. На 5 - 7 день наступает выздоровление либо переход заболевания в генерализованную форму.

Менингококкемия (менингококковый сепсис)

Внезапное начало заболевания, сопровождающееся повышением температуры до +40 С.

Сильные головные боли, светобоязнь, судороги, рвота.

Розовая или розово-красная сыпь папулезного типа появляется на 1 - 2 день. Пятна различного размера от 5 до 20 мм.

Ригидность мышц затылка ― невозможно прижать подбородок к груди.

Симптом Брудзинского. При попытке притянуть голову к груди больной непроизвольное сгибает и подтягивает ноги к животу.

Симптом Кернига. Поочередно ноги лежащего на спине пациента поднимают и сгибают под углом 90° в коленном суставе. Попытка вернуть их в первоначальное положение не удается, так как повышается тонус мышц.

Из всех перечисленных признаков наиболее наглядны геморрагические высыпания. Через 2 дня после появления они пигментируются, образуя язвы и некрозы. В тяжелых ситуациях патологические изменения могут привести к сухой гангрене и последующей ампутации.

Менингококковый менингит

Быстрый подъем температуры тела до +40 °C.

Сильная головная боль, приступы которой вызваны движением, прикосновением, ярким светом и громкими звуками.

Неоднократная рвота, не зависимая от приема пищи, не несущая облегчения.

Низкое артериальное давление, учащенный пульс, одышка.

Больной часто принимает позу эмбриона ― лежит на боку с подобранными руками, ноги сжимает в коленях. Характерные симптомы, такие как ригидность затылочных мышц, симптомы Брудзинского и Кернига могут присутствовать, а могут не наблюдаться. Болезнь характеризуется высоким показателем смертности, без должного лечения он достигает 50%. У выживших могут проявиться последствия перенесенной инфекции: парезы, глухота, интеллектуальные нарушения, гидроцефалия.

Гипертоксическая (молниеносная) форма менингококковой инфекции

Внезапный подъем температуры до +40 С и более.

Кожа холодная, липкая от пота. Больного лихорадит, могут быть судороги.

Многочисленные геморрагические высыпания, появляющиеся на глазах. Мелкие пятна быстро сливаются в большие геморрагии багрово-цианотичного цвета. Кожные изменения похожи на трупные пятна.

Артериальное давление пониженное.

Гипертоксическая форма развивается крайне быстро, в течение нескольких часов. Возникает отек головного мозга, сопровождающийся сильнейшими головными болями, головокружением, рвотой, потерей сознания. Это ведет к инфекционно-токсическому шоку ― состоянию требующему немедленной реанимационной помощи. Без своевременного лечения больной может умереть.

Диагностика менингококковой инфекции

Выбор лабораторного материала для анализа зависит от формы заболевания, это может быть кровь, носоглоточная слизь, ликвор, соскоб с геморрагической сыпи, гнойные выделения с мозговых оболочек.

При назофарингите и у бессимптомных носителей берут носоглоточные выделения, используя специальный тампон. Материал необходимо взять с задней стенки глотки за мягким нёбом.

При цереброспинальном менингите осуществляют забор ликвора (спинномозговой жидкости). Его собирают пункцией в количестве 2 - 5 мл в стерильную пробирку. Сразу сеют на питательную среду либо срочно, соблюдая температурный режим, отправляют в лабораторию. В момент сбора спинномозговой жидкости можно визуально определить наличие гноя, в этом случае ликвор будет мутным. В отдельных случаях обнаружить бактерии можно только под микроскопом.

При заборе биоматериала посмертно, наиболее часто для анализа берут гной с оболочек мозга. Исследование необходимо для уточнения диагноза. Если менингококковое заболевание подтвердится, следует выявить круг контактирующих лиц, чтобы не допустить распространение инфекции.

Анализ крови и сыворотки крови является дополнительным. Он позволяет оценить степень тяжести состояния, а также обнаружить антитела к менингококку. Основываясь на данных исследования мочи можно определить работу почек. Для постановки диагноза и оценки степени поражения организма используются такие методы инструментальной диагностики, как эхокардиография, рентгенограмма, УЗИ головного мозга и органов брюшной полости, допплерографическое исследование сосудов, офтальмоскопия, магнитно-резонансная томография.

Виды лабораторной диагностики инфекции менингококка

Бактериоскопическое исследование (РА, ПЦР). Определяет наличие менингококков, серогруппу и их концентрацию. Позволяет проводить дифференциацию от других бактерий, вызывающих воспаление головного и спинного мозга. Посев культуры выводят от 18 до 24 часов в термостате при +37 С, повышенном содержании CO2 (до 10%). Определяют принадлежность к Neisseria meningitidis путем выявления выработки уксусной кислоты в результате ферментации глюкозы и мальтозы.

Серологический метод (ИФА, РИА) основывается на выявлении и определении концентрации антител IgM. Титр значительно повышается в начале менингококковой инфекции при генерализованных формах. Концентрация снижается в период ремиссии, антитела IgG начинают преобладать над иммуноглобулинами IgM. У переболевших в сыворотке крови обнаруживают специфические бактерицидные антитела: агглютинины и гемагглютинины.

Вне зависимости от типа биоматериала, он требует срочного проведения анализа поскольку возбудитель погибает вне тела человека. Лабораторная диагностика включает микроскопию, биологический посев, требует проведения не только идентификации возбудителя, но и определения антибиотикочувствительности.

Лечение

При терапии менингококковой инфекции, независимо от степени проявления заболевания и его формы, врач рассматривает состояние пациента, как смертельно опасное. Особенно это касается детей, ведь более половины из них проходят через реанимацию. Больного госпитализируют для проведения экстренной диагностики. Назначить антибиотики можно только после проведения лабораторных анализов.

В зависимости от серотипа основой лечения могут стать такие препараты, как пенициллин, ампициллин, хлорамфеникол. В эпидемиологических условиях при ограниченных ресурсах предпочтение отдают цефтриаксону. Антибиотики являются основой лечения, однако, вместе с ними используют жаропонижающие, противосудорожные и противоотечные препараты, медикаменты инфузионной, детоксикационной и оксигенотерапии. Таким образом проводится комплексное лечение менингококковой инфекции с индивидуальным подбором препаратов, под постоянным контролем врача. Терапия осложненных генерализованных форм может длиться в течение месяца, а реабилитация занимать несколько лет.

Осложнения и последствия

Во время болезни могут возникнуть следующие осложнения:

отек головного мозга;

геморрагический церебральный инсульт;

острая почечная недостаточность;

паралич и другие дисфункции.

На фоне инфекции менингококка может развиться герпес, отит, менингококковая пневмония. Тяжелое течение заболевания может стать причиной развития астенического синдрома, выражающегося в общей слабости и периодических головных болях. Привести к артериальной гипертензии, снижению слуха, эпилепсии и гемипарезу (паралитическому поражению одной стороны тела). У пациентов перенесших менингококковую инфекцию часто возникают апатии и депрессии.

Профилактика заболеваний

Постинфекционный иммунитет. После перенесенного заболевания возникает стойкий иммунитет, защищающий от повторного инфицирования. Однако, он возникает только к той серогруппе бактерий, которые вызвали заболевание. Всего же существует 12 видов менингококковых групп.

Вакцинация. Разработано 3 вида вакцин:

Поливалентные полисахаридные (изобретены 30 лет назад).

Вакцины моно- и поливалентные конъюгированные (применяются с 1999 года).

Новая моновалентная конъюгированная вакцина MenA (разработана в 2010—2011 гг.).

Максимально препарат может охватить только 4 серогруппы: А, С, Y и W. К сожалению, такой вакцины, чтобы защитила от всех видов инфекции пока не разработано.

Менингококковая прививка не входит в календарь детских прививок. Пройти вакцинацию можно только самостоятельно. Проводить ее стоит перед поездкой в страны, входящие в зону риска, и по эпидемиологическим показаниями, т.е. в период эпидемии, когда известен серотип.

Преимущества АО "СЗДЦМ"

Лабораторные исследования имеют крайне важное значение в лечении, особенно таких серьезных заболеваний. Важно получить не только быстрый, но и наиболее точный и развернутый результат.

К вашим услугам:

Лаборатория с технологичным оборудованием.

Квалифицированный и доброжелательный персонал.

Быстрое проведение анализов и несколько вариантов получения результатов.

Медицинские центры и терминалы находятся в местах с удобной транспортной развязкой в Санкт-петербурге, Ленинградской области, Великом Новгороде, Старой Руссе, Окуловке и Пскове.

Наименование метода

Тип биоматериала/Тип пробирки/Цвет крышки

Преаналитические требования

Подготовка к исследованию:

Для бактериологического исследования используют ликвор, взятый при люмбальной пункции или пункции боковых желудочков мозга. Необходимо соблюдение правил асептики при проведении пункции. Для взятия проб ликвора используют флакон для посева на гемокультуру (для выделения аэробов и анаэробов) с универсальной средой (желтая крышка).С флакона со средой удалить пластиковую отщелкивающуюся крышку. Находящуюся под ней резиновую пробку необходимо дезинфицировать 70% спиртом. Свежевзятый ликвор в количестве 5 - 10 мл из шприца, проколов резиновую пробку, внести во флакон со средой. Осторожно перемешать круговыми движениями содержимое флакона.

Условия хранения и транспортировки:

Полученную пробу доставить в лабораторию при сохранении температуры +35°С…+37°С.

Примечание:

Чувствительность определяется при обнаружении возбудителя. Количество препаратов, к которым определяется чувствительность, зависит от выделенного этиологически значимого возбудителя. Идентификация микроорганизмов при бактериологических посевах определяется до вида. К анаэробам, вирусам и мицелийобразующим грибам чувствительность к антибиотикам НЕ ОПРЕДЕЛЯЕТСЯ.

Стабильность аналитов

Клиническая информация о тесте

Neisseria meningitides - грамотрицательный диплококк (менингококк) - может вызвать у человека менингит (примерно 60% этой патологии) и сепсис. Тяжесть этих заболеваний варьирует от небольшой лихорадки до молниеносного сепсиса, приводящего к летальному исходу в течение нескольких часов. Главный резервуар носоглотка. Менингококк распространяется воздушно-капельным путём. Чаще всего менингококковым менингитом заболевают дети первого года жизни. Заболевание начинается с лихорадки, головной боли, рвоты, ригидности шейных мышц, нарушения сознания. Менингококк может быть причиной суперинфекции у больных гриппом и, особенно, у больных с иммунодефицитом. Neisseria meningitides - грамотрицательный диплококк (менингококк) - может вызвать у человека менингит (примерно 60% этой патологии) и сепсис. Тяжесть этих заболеваний варьирует от небольшой лихорадки до молниеносного сепсиса, приводящего к летальному исходу в течение нескольких часов. Главный резервуар носоглотка (почти у 5% всех людей!). Менингококк распространяется воздушно-капельным путём. Чаще всего менингококковым менингитом заболевают дети первого года жизни. Заболевание начинается с лихорадки, головной боли, рвоты, ригидности шейных мышц, нарушения сознания. Менингококк может быть причиной суперинфекции у больных гриппом и, особенно, у больных с иммунодефицитом.

Интерпретация результатов

Интерпретация проводится врачом с учетом клинических проявлений. Положительный результат: - выделение представителей патогенной флоры свидетельствует об этиологическом факторе выделенного возбудителя в клинической картине. При положительном результате осуществляется постановка чувствительности к антибактериальным препаратам. R-возбудитель резистентен (устойчив) к антибактериальному препарату, S-возбудитель чувствителен к антибактериальному препарату, I- возбудитель умеренно устойчив к антибактериальному препарату. Выявление условно-патогенной флоры и ее значимость в развитии заболевания зависит от количества выделенного возбудителя для данной локализации. Отрицательный результат: - отсутствие патогенной флоры - норма; - присутствие условно- патогенной флоры в количестве, не превышающем диагностического значения - норма для данной локализации.

Внешний вид упаковки и препарата может отличаться от изображённого на фотографии

Инструкция по применению

Описание

Форма выпуска

Выпускается в виде комплекта из двух лиофилизированных компонентов: основы питательной среды - лиофилизат из объема 100 мл в бутылке - 1 шт; добавка к основе питательной среды - лиофилизат из объема 24 мл в бутылке - 1 шт.

Состав

Состав набора: 2.2.1. Основа питательной среды Экстракт кроличьего мяса 1000 мл, Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей 10 г, Натрий хлористый 5 г, Аутолизат хлебопекарных дрожжей 50 мл, Кислота оротовая 0,00124 г, Агар микробиологический (20±5) г. 2.2.2. Добавка к основе питательной среды. Сыворотка лошадиная нормальная для бактериологических питательных сред жидкая 200 мл, Аутолизат хлебопекарных дрожжей 20 мл, Аминопептид для микробиологических питательных сред 20 мл.

Показания для применения

Предназначен для микробиологических целей. Применяется для выделения гонококка при исследовании инфицированного материала, а также в качестве среды для культивирования и хранения гонококка в научно- исследовательской работе.

Режим дозирования и способ применения

Приготовление реагентов следует проводить в асептических условиях.

В бутылку с основой питательной среды добавляют 100 мл стерильной очищенной воды и выдерживают (30±5) мин, затем помещают на кипящую водяную баню до полного расплавления агара, после расплавления агара выдерживают на водяной бане не более 5 мин.

В бутылку с добавкой питательной среды добавляют 24 мл стерильной очищенной воды и выдержать (20±2) мин до полного растворения при температуре 20-25°С. Растворенную добавку переносят в растворенную и охлажденную до температуры (50±2)°С основу. Среду размешивают, разливают по 3 мл в стерильные пробирки и скашивают. В каждую пробирку добавляют по 0,5 мл стерильного раствора натрия хлорида 0,9% для увлажнения среды.

Среду можно также разливать по 10-15 мл в стерильные чашки Петри. Пробирки или чашки с питательной средой помещают на (24±1) ч в термостате при температуре (37±1)°С для контроля на стерильность.

Готовую питательную среду хранят при температуре (6±2)°С до 7 сут.

Меры предосторожности при применении

Соблюдение «Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения (Москва. 1981 г.)

Читайте также: